一种区分检测PCV2野毒抗体与疫苗抗体的多肽及其在ELISA检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种区分检测PCV2野毒抗体与疫苗抗体的多肽，包括SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.4多肽序列所示的一条或两条多肽。本发明专利技术还公开了上述多肽与多糖载体的偶联多肽、多肽的制备方法，含有所述多肽的ELISA检测试剂盒及其制备方法。本发明专利技术所述的区分检测PCV2野毒抗体与疫苗抗体的ELISA检测试剂盒通过血清学检测就可以判断待检猪场中是否存在圆环野毒感染的风险，当断奶仔猪未经PCV2疫苗免疫前，如果检测发现PCV2抗体呈阳性，且在PCV2疫苗免疫后此抗体水平逐渐降低，而疫苗抗体的水平逐渐升高，说明此仔猪有圆环病毒野毒感染的风险或是母猪有圆环病毒野毒感染，通过母源抗体传递给仔猪。

A polypeptide for differentiating PCV2 wild virus antibody and vaccine antibody and its application in ELISA detection kit

The present invention discloses a polypeptide for distinguishing PCV2 wild virus antibody from vaccine antibody, including one or two polypeptides shown in SEQ ID NO.1_SEQ ID NO.4 polypeptide sequence. The invention also discloses the preparation method of the polypeptide and the polypeptide coupling with the polysaccharide carrier, the ELISA detection kit containing the polypeptide and the preparation method thereof. The ELISA detection kit for distinguishing PCV2 wild-virus antibody from vaccine antibody can determine whether there is a risk of circovirus infection in the pig farm to be examined by serological detection. If PCV2 antibody is found to be positive by detection before weaning piglets are immunized with PCV2 vaccine, and the antibody water after immunization with PCV2 vaccine However, the level of vaccine antibody increased gradually, indicating that the piglets had the risk of circovirus infection or sows had circovirus infection, which was transmitted to piglets through maternal antibody.

【技术实现步骤摘要】
一种区分检测PCV2野毒抗体与疫苗抗体的多肽及其在ELISA检测试剂盒中的应用
本专利技术涉及免疫学领域，更具体地说，涉及一种区分检测PCV2野毒抗体与疫苗抗体的多肽及其在ELISA检测试剂盒中的应用。
技术介绍
猪圆环病毒(porcinecircovirus,PCV)为圆环病毒科圆环病毒属病毒，是已知的最小动物病毒之一。PCV病毒包括PCV-1和PCV-2两种血清型，一般认为PCV1无致病性，广泛存在于猪源细胞及正常猪体内各组织中；PCV-2具有致病性，能引起猪的多系统功能障碍疾病，如断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)猪呼吸道疾病综合征(PRDC)猪皮炎与肾病综合征(PDNS)仔猪先天性震颤(CT)以及猪繁殖系统障碍等多种疾病。根据对PCV-2毒株的序列分析结果，将PCV-2病毒分离株分为PCV-2a～PCV-2e共5个亚型，当前世界范围内PCV-2优势亚型已从PCV-2a转变为PCV-2b，即PCV-2b为主要流行亚型。相关研究表明，猪感染圆环病毒后容易产生免疫抑制，可影响其他疫苗的免疫效果，如干扰猪瘟疫苗的免疫应答，抑制伪狂犬疫苗的体液应答等，且感染圆环病毒的猪，因免疫系统受本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种区分检测PCV2野毒抗体与疫苗抗体的多肽，其特征在于，包括以下多肽序列一条或两条序列：SEQ ID NO.1：Phe‑Ser‑Tyr‑His‑Ser‑Arg‑Tyr‑Phe‑Thr‑Pro‑Lys‑Pro–Val‑Leu‑Asp‑Ser‑Thr；SEQ ID NO.2：Ser‑Thr‑Pro‑Lys‑Pro‑Val‑Leu‑Asp‑Ser‑Thr‑Ile‑Asp‑Tyr‑Phe‑Glu‑Pro‑Asn‑Asn‑Lys‑Arg；SEQ ID NO.3：Thr‑Pro‑Lys‑Pro‑Val‑Leu‑Asp‑Ser‑Thr‑Ile‑Asp‑Tyr‑Phe‑Glu‑Pro‑Asn‑Asn‑L...

【技术特征摘要】
1.一种区分检测PCV2野毒抗体与疫苗抗体的多肽，其特征在于，包括以下多肽序列一条或两条序列：SEQIDNO.1：Phe-Ser-Tyr-His-Ser-Arg-Tyr-Phe-Thr-Pro-Lys-Pro–Val-Leu-Asp-Ser-Thr；SEQIDNO.2：Ser-Thr-Pro-Lys-Pro-Val-Leu-Asp-Ser-Thr-Ile-Asp-Tyr-Phe-Glu-Pro-Asn-Asn-Lys-Arg；SEQIDNO.3：Thr-Pro-Lys-Pro-Val-Leu-Asp-Ser-Thr-Ile-Asp-Tyr-Phe-Glu-Pro-Asn-Asn-Lys-Arg-Asn-Glu-Leu-Trp-Leu-Arg-Leu-Glu；SEQIDNO.4：Glu-Pro-Asn-Asn-Lys-Arg-Asn-Glu-Leu-Trp-Leu。2.一种用于区分检测PCV2野毒抗体与疫苗抗体的偶联多肽，其特征在于，包括以下序列中的一条或两条序列的多肽和与所述多肽偶联的多糖载体，SEQIDNO.1：Phe-Ser-Tyr-His-Ser-Arg-Tyr-Phe-Thr-Pro-Lys-Pro–Val-Leu-Asp-Ser-Thr；SEQIDNO.2：Ser-Thr-Pro-Lys-Pro-Val-Leu-Asp-Ser-Thr-Ile-Asp-Tyr-Phe-Glu-Pro-Asn-Asn-Lys-Arg；SEQIDNO.3：Thr-Pro-Lys-Pro-Val-Leu-Asp-Ser-Thr-Ile-Asp-Tyr-Phe-Glu-Pro-Asn-Asn-Lys-Arg-Asn-Glu-Leu-Trp-Leu-Arg-Leu-Glu；SEQIDNO.4：Glu-Pro-Asn-Asn-Lys-Arg-Asn-Glu-Leu-Trp-Leu。3.如权利要求2所述的偶联多肽，其特征在于，所述多糖载体为活化葡聚糖、壳聚糖、壳多糖中的一种。4.一种如权利要求1所述的多肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)载体树脂溶涨：将RinkAmide-MBHA树脂放入反应管中，加DCM氮气鼓泡振荡，使载体树脂溶胀以提高氨基酸与载体树脂的结合效率；(2)氨基酸与树脂载体结合：通过沙芯抽滤掉DCM，加入过量的Fmoc-L-Ile-OH氨基酸、HBTU，再加入过量的DIEA，最后加入DMF溶解，氮气鼓泡室温反应；(3)脱保护：抽滤掉DMF，加20％哌啶DMF溶液，室温下震荡反应，抽滤掉哌啶后，再一次20％哌啶DMF溶液，室温反应；(4)检测：抽滤掉哌啶溶液，取十几粒树脂，将取出的树脂用乙醇滤三次，加入茚三酮、KCN、苯酚溶液各1滴，105℃-110℃加热至变深蓝色即为阳性，说明氨基酸已与树脂载体成功链接；(5)洗涤：将反应管中的载体树脂依次用DMF、甲醇、DCM洗涤，将载体树脂上残余的哌啶洗掉；(6)缩合：在载体树脂中加入保护氨基酸Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、HBTU，并用少量DMF溶解，立刻加入过量的N-甲基吗啉，氮气鼓泡室温反应；(7)洗涤：将反应管中的载体树脂用DMF洗两次甲醇洗两次，DCM洗两次，将未参与反应的原料和缩合剂洗掉。(8)连接：重复上述步骤(1)-步骤(6)的操作，从右到左依次连接序列中的氨基酸；(9)脱保护：最后一个氨基酸连接后，脱保护，然后将反应管中的载体树脂依次用DMF、甲醇、DCM洗涤，将树脂载体中的哌啶洗掉，然后将树脂载体倒出来，烘干；(10)切割：分别加入94％切割液TFA、2.5％水；2.5％...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈善真，李其昌，陈克宏，杨洁，刘博奇，王贵平，
申请(专利权)人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44