治疗分子制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合前列腺特异性膜抗原(PSMA)的结合分子，特别是单人可变重链结构域抗体，并且涉及用于治疗癌症的相关方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗分子专利
本专利技术涉及前列腺特异性膜抗原(PSMA)结合分子，以及这类结合分子在治疗疾病中的用途。介绍前列腺癌是发达国家男性中最常见的非皮肤相关性恶性肿瘤。据估计，六分之一的男性将被诊断患有前列腺癌。目前用于前列腺癌的治疗包括手术、放疗和辅助激素治疗。虽然这些疗法在疾病的早期阶段相对有效，但最初诊断为局限性前列腺癌的大多数患者最终复发。虽然化疗是对抗晚期前列腺癌最广泛使用的方法之一，但由于缺乏特异性和相关毒性，其疗效通常不足。缺乏针对前列腺癌细胞的靶向递送是实现可行治疗效果的主要障碍之一。因此，对于增加抗前列腺癌剂的选择性的策略仍然存在迫切需求(Barve等.,JControlRelease.2014August10；0:118–132)。在使用基于血清的标志物例如前列腺特异性抗原(PSA)之后，前列腺癌的诊断已经大大改善。此外，前列腺肿瘤相关抗原为肿瘤成像、诊断和靶向治疗提供了靶点。前列腺特异性膜抗原(PSMA)(是一种前列腺肿瘤相关标志物)就是这样一种靶标。PSMA是一种高度限制于前列腺分泌上皮细胞膜的750个残基的II型跨膜糖蛋白。它在前列腺癌细胞和非前列腺实体瘤新血管系统中高度表达，并在其他组织(包括健康的前列腺，肾，肝，小肠和脑)中表达较低。PSMA表达随着前列腺疾病进展和转移而增加，并且其表达水平因此与肿瘤侵袭性相关。在良性前列腺上皮细胞中，各种免疫组织学研究已经证实在几乎所有前列腺癌病例中PSMA水平均增加。在疾病的所有阶段均可发现强烈的PSMA染色，包括前列腺上皮内瘤变，晚期雄激素非依赖性前列腺癌和局限于淋巴结、骨、软组织和肺的继发性前列腺肿瘤。因此PSMA被广泛用作前列腺癌细胞的生物标志物。PSMA具有3部分结构：19个氨基酸的内部部分，24个氨基酸的跨膜部分和707个氨基酸的外部部分。它基于其处理神经肽N-乙酰天冬氨酰谷氨酸盐和谷氨酸缀合的叶酸衍生物的能力而形成具有谷氨酸羧肽酶活性的非共价同二聚体。PSMA通过胞吞途径快速有效地内化，并迅速再循环到膜上。基于抗体的疗法已经成为治疗肿瘤、炎症和传染病等领域中越来越多的人类恶性肿瘤的重要组分。在大多数情况下，治疗功能的基础是基于抗体的药物对其靶抗原具有高度的特异性和亲和力。用药物、毒素或放射性核素结合单克隆抗体(mAb)是单克隆抗体可能诱导治疗效果的另一种策略。通过将抗体的靶向特异性与毒性效应分子的肿瘤杀伤力相结合，免疫缀合物允许靶标与正常组织之间的敏感区分，从而导致比大多数常规化学治疗药物更少的副作用。然而，由于它们的大小和其他物理性质，单克隆抗体必须静脉内(iv)或皮下(sc)施用，因此具有较高的全身暴露量。因此，它们的递送途径通常可能不是最理想的，导致抗体在非疾病部位与靶抗原结合(可能损害正常、非疾病组织的健康功能)或导致次优PK/PD特征。由于次优的施用途径，任何一种结果都可能导致功效丧失和/或安全性受损。随后开发并商业化了报道的第一种PSMA特异性mAb，即鼠mAb7E11作为肿瘤成像的诊断剂(ProstaScint,Cytogen,Princeton,N.J.)。然而，该抗体识别细胞死亡后暴露的PSMA的细胞内表位，这限制了其作为用于检测PSMA的显像剂的用途。最近，鉴定了识别PSMA的细胞外部分的mAb，如J591。本专利技术的目的是解决用于治疗前列腺癌的替代性抗体治疗的需要。专利技术概述本专利技术涉及与毒素缀合的单人重链可变(VH)结构域抗体。本专利技术还涉及结合人PSMA的结合分子。本专利技术还提供了分离的单结构域抗体，特别是VH单结构域抗体，其与PSMA结合并表现出许多期望的性质。特别地，结合天然形式的人PSMA。在优选的实施方案中，结合分子包含至少一个单人重链可变(VH)结构域抗体或由单人重链可变(VH)结构域抗体组成。因此不存在轻链。在一个实施方案中，本专利技术的结合分子由单VH结构域抗体组成并且不包含其他部分。在另一个实施方案中，结合分子包含结合人PSMA的单结构域VH抗体和其他部分。在优选的实施方案中，单VH结构域由在表达人V基因座并用PSMA抗原免疫的转基因啮齿动物中产生的仅有重链的抗体产生。本专利技术的单结构域抗体以单价形式结合靶标。单结构域抗体小于常规单克隆抗体形式，并且专利技术人已经显示与单克隆抗体基准相比，这样的分子促进了高水平的特异性肿瘤靶向、快速渗透进肿瘤中并高积累。专利技术人还显示单结构域抗体以高亲和力结合PSMA，非常稳定且表达水平高。此外，本专利技术的单VH结构域抗体比鼠抗体具有更低的免疫原性，并且不需要人源化。这些性质使得单VH结构域抗体以不同形式特别有用，例如缀合至毒素或延长半衰期的部分。这些化合物因此可用于治疗疾病，特别是癌症。专利技术人通过显示通过将毒素缀合到单VH结构域抗体可以将单VH结构域抗体与毒素一起用于杀伤细胞，已经证明了这一点。一方面，本专利技术提供了包含本文所述单VH结构域抗体的免疫缀合物。以下进一步总结本专利技术的各方面。在第一方面，本专利技术因此涉及缀合至毒素的单VH结构域抗体。本专利技术还涉及这类缀合物在治疗疾病(例如癌症)中的用途，并且涉及将这类缀合物给予患者以治疗疾病(例如癌症)的方法。因此，一方面，本专利技术涉及能够结合人PSMA的结合分子，其包含人重链可变免疫球蛋白结构域(VH)，所述VH包含CDR3序列，所述CDR3序列包含SEQIDNO.3、83、183、279、295、303、331、363、367、371、375、379、383、387或391或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％序列同源性的序列。一方面，本专利技术涉及能够结合人PSMA的结合分子，其包含人重链可变免疫球蛋白结构域(VH)，所述VH包含SEQIDNO.4、84、184、280、332、364、368、372、376、380、384、388或392或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％序列同源性的序列。另一方面，本专利技术涉及能够结合人PSMA的结合分子，其包含单VH结构域抗体，所述单VH结构域抗体包含CDR3序列，所述CDR3序列包含SEQIDNO.3或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列，或涉及由这种单VH结构域抗体组成的结合分子。另一方面，本专利技术涉及能够结合人PSMA的结合分子，其包含单VH结构域抗体，所述单VH结构域抗体包含CDR3序列，所述CDR3序列包含SEQIDNO.83或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。另一方面，本专利技术涉及能够结合人PSMA的结合分子，其包含单VH结构域抗体，所述单VH结构域抗体包含CDR3序列，所述CDR3序列包含SEQIDNO.183或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。另一方面，本专利技术涉及能够结合人PSMA的结合分子，其包含单VH结构域抗体，所述单VH结构域抗体包含CDR3序列，所述CDR3序列包含SEQIDNO.279或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。另一方面，本专利技术涉及能够结合人PSMA的结合分子，其包含单VH结构域抗体，所述单VH结构域抗体包含CDR3序列，所述CDR3序列包含SEQIDNO.295或与其具有至少70％，至少本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.能够结合人PSMA的结合分子，其包含含有CDR3序列的单人可变重链结构域(VH)抗体，所述CDR3序列包含SEQ ID NO.3或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.12 GB 1600559.7;2016.04.04 GB 1605770.5;201.能够结合人PSMA的结合分子，其包含含有CDR3序列的单人可变重链结构域(VH)抗体，所述CDR3序列包含SEQIDNO.3或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。2.根据权利要求1所述的结合分子，其中所述单结构域抗体包含CDR1和CDR2序列，其中所述CDR1序列包含SEQIDNO.1或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列并且所述CDR2序列包含SEQIDNO.2或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。3.根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述CDR1包含氨基酸序列SEQIDNO.1，5，9，13，17，21，25，29，33，37，41，45，49，53，57，61，65，69，73或77或由其组成；所述CDR2包含氨基酸序列SEQIDNO.2，6，10，14，18，22，26，30，34，38，42，46，50，54，58，62，66，70，74或78或由其组成并且所述CDR3包含氨基酸序列SEQIDNO.3，7，11，15，19，23，27，31，35，39，43，47，51，55，59，63，67，71，75或79或由其组成。4.根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述单结构域抗体具有图1中对于单结构域抗体1.1至1.20中任一所示的CDR1，CDR2和CDR3序列的组合。5.根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.4或与其具有至少70％，75％，80％，90％或95％同源性的序列或者由其组成。6.根据权利要求5所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.4，8，12，16，20，24，28，32，36，40，44，48，52，56，60，64，68，72，76或80或由其组成。7.能够结合人PSMA的结合分子，其包含含有CDR3序列的单VH结构域抗体，所述CDR3序列包含SEQIDNO.83或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。8.根据权利要求7所述的结合分子，其中所述单结构域抗体包含CDR1和CDR2序列，其中所述CDR1序列包含SEQIDNO.81或与其具有至少60％，至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列并且所述CDR2序列包含SEQIDNO.82或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。9.根据权利要求7或8中任一项所述的结合分子，其中所述CDR1包含氨基酸序列SEQIDNO.81，85，89，93，97，101，105，109，113，117，121，125，129，133，137，141，145，149，153，157，161，165，169，173或177；所述CDR2包含氨基酸序列SEQIDNO.82，86，90，94，98，102，106，110，114，118，122,126，130，134，138，142，146，150，154，158，162，166，170，174或178并且所述CDR3包含氨基酸序列SEQIDNO.83，87，91，95，99，103，107，111，115，119，123，127，131，135，139，143，147，151，155，159,163，167，171，175或179。10.根据权利要求7至9中任一项所述的结合分子，其中所述单VH结构域抗体具有图2中对于单结构域抗体2.1至2.25中任一所示的CDR1，CDR2和CDR3序列的组合。11.根据权利要求7至10中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.84或与其具有至少70％，75％，80％，90％或95％同源性的序列或者由其组成。12.根据权利要求11所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.84，88，92，96，100，104，108，112，116，120，124，128，132，136，140，144，148，152，156，160，164，168，172，176或180或由其组成。13.能够结合人PSMA的结合分子，其包含含有CDR3序列的VH结构域抗体，所述CDR3序列包含SEQIDNO.183或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。14.根据权利要求13所述的结合分子，其中所述单VH结构域抗体包含CDR1和CDR2序列，其中所述CDR1序列包含SEQIDNO.181或与其具有至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列并且所述CDR2序列包含SEQIDNO.182或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。15.根据权利要求13或14中任一项所述的结合分子，其中所述CDR1包含氨基酸序列SEQIDNO.181，185，189，193，197，201，205，209，213，217，221，225，229，233，237，241，245，249，253，257，261，265，269或273或由其组成；所述CDR2包含氨基酸序列SEQIDNO.182，186，190，194，198，202，206，210，214，218，222，226，230，234，238，242，246，250，254，258，262，266，270或274或由其组成并且所述CDR3包含氨基酸序列SEQIDNO.183，187，191，195，199，203，207，211，215，219，223，227，231，235，239，243，247，251，255，259，263，267，271或275或由其组成。16.根据权利要求13至15中任一项所述的结合分子，其中所述单结构域抗体具有图3中对于单结构域抗体3.1至3.24中任一所示的CDR1，CDR2和CDR3序列的组合。17.根据权利要求13至16中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.184或与其具有至少70％，75％，80％，90％或95％同源性的序列或者由其组成。18.根据权利要求13至17中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.184，188，192，196，200，204，208，212，216，220，224，228，232，236，240，244，248，252，256，260，264，268，272或276或由其组成。19.能够结合人PSMA的结合分子，其包含含有CDR3序列的单人可变重链VH结构域抗体，所述CDR3序列包含SEQIDNO.279或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。20.根据权利要求19所述的结合分子，其中所述单VH结构域抗体包含CDR1和CDR2序列，其中所述CDR1序列具有SEQIDNO.277或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列并且所述CDR2序列具有SEQIDNO.278或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。21.根据权利要求19或20中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.280或与其具有至少70％，75％，80％，90％或95％同源性的序列或者由其组成。22.根据权利要求19至21中任一项所述的结合分子，其中所述CDR1包含氨基酸序列SEQIDNO.277，281，285或289或由其组成，所述CDR2包含氨基酸序列SEQIDNO.278，282，286或290或由其组成并且所述CDR3包含氨基酸序列SEQIDNO.279，283，287或291或由其组成。23.根据权利要求19至22中任一项所述的结合分子，其中所述单结构域抗体具有图4中对于单结构域抗体4.1至4.4中任一所示的CDR1，CDR2和CDR3序列的组合。24.根据权利要求19至23中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.280或与其具有至少70％，75％，80％，90％或95％同源性的序列或者由其组成。25.根据权利要求19至24中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.280，284，288或292或者由其组成。26.能够结合人PSMA的结合分子，其包含含有CDR3序列的单人可变重链VH结构域抗体，所述CDR3序列包含SEQIDNO.295或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。27.根据权利要求26所述的结合分子，其中所述单VH结构域抗体包含CDR1和CDR2序列，其中所述CDR1序列具有SEQIDNO.293或297或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列并且所述CDR2序列具有SEQIDNO.294或298或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。28.根据权利要求26或27中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.296或300或与其具有至少70％，75％，80％，90％或95％同源性的序列或者由其组成。29.能够结合人PSMA的结合分子，其包含含有CDR3序列的单VH结构域抗体，所述CDR3序列包含SEQIDNO.303或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。30.根据权利要求29所述的结合分子，其中所述单VH结构域抗体包含CDR1和CDR2序列，其中所述CDR1序列具有SEQIDNO.301或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列并且所述CDR2序列具有SEQIDNO.302或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。31.根据权利要求29至30中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.304或与其具有至少70％，75％，80％，90％或95％同源性的序列或者由其组成。32.根据权利要求29至31中任一项所述的结合分子，其中所述CDR1包含氨基酸序列SEQIDNO.301，305，309，313，317，321或325或由其组成，所述CDR2包含氨基酸序列SEQIDNO.302，306，310，314，318，322或326或由其组成并且所述CDR3包含氨基酸序列SEQIDNO.303，307，311，315，319，323或327或由其组成。33.根据权利要求29至32中任一项所述的结合分子，其中单结构域抗体具有图6中对于单结构域抗体6.1至6.7中任一所示的CDR1，CDR2和CDR3序列的组合。34.根据权利要求29至33中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.304或与其具有至少70％，75％，80％，90％或95％同源性的序列或者由其组成。35.根据权利要求29至34中任一项所述的结合分子，其中所述VH结构域包含SEQIDNO.304，308，312，316，320或324，328或者由其组成。36.能够结合人PSMA的结合分子，其包含含有CDR3序列的单VH结构域抗体，所述CDR3序列包含SEQIDNO.331或与其具有至少70％，至少80％，至少90％或至少95％同源性的序列。37...

【专利技术属性】
技术研发人员：布莱恩·麦吉尼斯，伊莎贝尔·奥苏奇，克里斯·罗桑特，麦克·罗曼诺斯，尼基·罗伊尔，托马斯·山道尔，洛林·汤普森，米歇尔·来特，
申请(专利权)人：克雷森多生物制剂有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB