用于治疗庞贝氏病的增强的酸性α-葡糖苷酶制造技术

提供了一种用于治疗庞贝氏病的方法，该方法包括将具有带有甘露糖‑6‑磷酸残基的最优糖基化的重组人酸性α‑葡糖苷酶与一定量的麦格司他组合给予，有效最大化重组人酸性α‑葡糖苷酶的组织摄取，同时最小化重组人酸性α‑葡糖苷酶的酶活性的抑制。

Enhanced acid alpha glucosidase for the treatment of Pompeii disease

A method for the treatment of Pompeii's disease is provided by combining a recombinant human acidic alpha glucosidase with an optimal glycosylation of a mannose 6 phosphate residue with a certain amount of Magostat to effectively maximize tissue uptake of recombinant human acidic alpha glucosidase while minimizing recombinant human acidity. Inhibition of enzyme activity of alpha glucosidase.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗庞贝氏病的增强的酸性α-葡糖苷酶专利
本专利技术提供了一种用于治疗庞贝氏病的方法，该方法包括将一种酸性α-葡糖苷酶及其药物分子伴侣的组合给予个体。更具体地说，本专利技术提供了一种用于治疗庞贝氏病的方法，该方法包括将重组人酸性α-葡糖苷酶和麦格司他的组合给予个体。
技术介绍
庞贝氏病，又称为酸性麦芽糖酶缺乏症或糖原贮积症II型，是若干种溶酶体贮积失调之一。溶酶体贮积失调是常染色体隐性遗传疾病的一个类群，其特征在于细胞的糖鞘脂、糖原，或黏多糖在细胞内的区室(称为溶酶体)内的积累。具有这些疾病的个体携带编码对于催化一种或多种这些物质的水解中有缺陷的酶的突变基因，然后这些物质积累在溶酶体中。溶酶体失调的其他实例包括戈谢病、GM1-神经节苷脂贮积症、岩藻糖苷贮积症、粘多糖贮积症、胡尔勒-施埃尔病(Hurler-Scheiedisease)、尼曼-皮克A和B病(Niemann-PickA和B)，以及法布里氏病(Fabrydisease)。庞贝氏病还被分类为神经肌肉疾病或代谢性肌病。庞贝氏病的发病率被估计为在40,000人中约1例，并且是由GAA基因的突变引起的，该GAA基因编码溶酶体的α-葡糖苷酶(EC:3.2.1.20)，该酶也常被称为酸性α-葡糖苷酶。酸性α-葡糖苷酶通过在溶酶体内将糖原催化水解为葡萄糖，参与糖原(一种分枝的聚糖，是动物中葡萄糖的主要储存形式)的代谢。因为患有庞贝氏病的个体产生的突变的、缺陷的酸性α-葡糖苷酶是非活性的或具有减少的活性，糖原分解发生缓慢或一点也不分解，并且糖原累积在不同组织的溶酶体中(特别是在横纹肌中)，导致了包括进行性肌无力和呼吸功能不全的广谱临床表现。组织(例如，心脏和骨骼肌)是特别受影响的。庞贝氏病可以在酶的缺乏程度、严重程度和发病年龄方面广泛变化，并且已经鉴定在GAA基因中的超过500种不同的突变，它们中的许多引起不同严重程度的疾病症状。该疾病已经被分类为以下广泛类型：早发型或婴儿型，以及晚发型。早发型的疾病和更低的酶活性通常与更严重的临床病程相关。婴儿型庞贝氏病是最严重的，是由完全的或接近完全的酸性α-葡糖苷酶缺乏引起，并且出现包括严重肌肉紧张缺乏、虚弱、肝脏和心脏增大、和心肌病的症状。舌头可能变得增大和突出，并且吞咽可能变得困难。多数染病的儿童在两岁之前死于呼吸并发症或心脏并发症。晚发型庞贝氏病可以出现在大于12个月的任何年龄，并且其特征在于缺乏心脏损害和更好的短期预后。症状与进行性骨骼肌功能障碍相关，并且涉及全身性肌无力以及在躯干、近端下肢，和隔膜中的呼吸肌的消耗。一些成年患者缺乏主要症状或运动限制。预后通常取决于呼吸肌受累的程度。大多数患有庞贝氏病的受试者最终发展为需要使用轮椅和辅助通气的身体衰弱的状态，其中由于呼吸衰竭而经常发生过早死亡。针对庞贝氏病的目前的治疗选项包括用重组人酸性α-葡糖苷酶(rhGAA)进行的酶替代疗法(ERT)。常规的rhGAA产品在阿葡糖苷酶α名下是已知的：或(健赞公司(Genzyme,Inc.))。ERT是贯穿患者一生所必需的慢性治疗，并且通过静脉输注参与替代酶的给予。该替代酶然后在循环中转运，并且进入细胞内的溶酶体，在溶酶体中该替代酶的作用是分解积累的糖原，补偿内源性缺损突变体酶缺乏的活性，并且从而缓解该疾病症状。在患有婴儿发作型示出庞贝氏病的受试者中，相比历史对照，已经用阿葡糖苷酶α的治疗显著提高存活率，并且在晚发型庞贝氏病中，与安慰剂相比，阿葡糖苷酶α已经示出对6分钟步行测试(6MWT)和用力肺活量(FVC)的影响具有统计学显著性(如果适度的话)。然而，在经历阿葡糖苷酶α的治疗时，大多数受试者保持稳定抑或继续恶化。用阿葡糖苷酶α的ERT的明显次优效应的原因尚不清楚，但是部分可以归因于潜在肌肉病理的进行性性质，或当前ERT的差的组织靶向。例如，输注的酶在中性pH(包括在血浆的pH(约pH7.4))下不稳定，并且会在循环内不可逆地失活。此外，输注的阿葡糖苷酶α在关键的疾病相关肌肉中示出不足的摄取，可能归因于与甘露糖-6-磷酸(M6P)残基的不足的糖基化。这样的残基在细胞表面结合阳离子非依赖性甘露糖-6-磷酸受体(CIMPR)，允许该酶进入细胞及其内的溶酶体。因此，高剂量的该酶对于有效的治疗是必需的，以便充足量的活性酶可以到达溶酶体，使得此种治疗昂贵并且费时。另外，抗-重组人酸性α-葡糖苷酶中和抗体的发展通常在庞贝氏病患者中发展，归因于重复暴露于治疗。此类的免疫应答会严重降低患者对治疗的耐受性。用于阿葡糖苷酶α的美国产品标签包括带有关于超敏反应的潜在风险的信息的一个黑盒警告。已经在用阿葡糖苷酶α治疗的受试者中观察到危及生命的过敏反应，包括过敏性休克。正在开发下一代ERT来解决这些缺陷。在一种策略中，重组酶可以与药物分子伴侣共同给予，这些药物分子伴侣可以诱导或稳定酶的适当构象，以防止或减少该酶的降解，和/或它在体外(例如，在给予前储存)或体内的解折叠为无活性形式。此种策略在国际专利申请公开号WO2004/069190、WO2006/125141、WO2013/166249和WO2014/014938中进行了描述。已经描述了将阿葡糖苷酶α与麦格司他共同给予患有庞贝氏病的患者的临床实验的结果。在意大利的4个治疗中心，在患有庞贝氏病的13个受试者(3例早发型(婴儿型)和10例晚发型)上进行的临床实验中，将20至40mg/kg的阿葡糖苷酶α单独给予，然后与4个剂量的80mg的麦格司共同给予。本研究的结果显示，相比单独给予阿葡糖苷酶α，对于共同给予的酸性α-葡糖苷酶活性暴露(根据药物动力学参数AUC(在浓度对比时间曲线下的面积)测量的)平均增加6.8倍(帕伦蒂，G(Parenti,G.)，G.安德里亚(G.Andria)等人，(2015)，“溶酶体贮存病：从病理生理学到治疗”("LysosomalStorageDiseases:FromPathophysiologytoTherapy.")医药学年评(Annu.Rev.Med.)66(1):471-486)。此外，在佛罗里达大学进行的研究评估了当与阿葡糖苷酶α静脉输注共同给予至患有庞贝氏病的受试者时的血浆麦格司他的药物代谢动力学(PK)，(多弗勒，P.A.(Doerfler,P.A.)，J.S.凯利(J.S.Kelley)，等人，(2014)，“药物分子伴侣在酶替代疗法期间通过抗-GAA抗体阻止rhGAA的沉淀”("PharmacologicalchaperonespreventtheprecipitationofrhGAAbyanti-GAAantibodiesduringenzymereplacementtherapy.")分子遗传与代谢(Mol.Genet.Metab.)111(2):S38)。然而，针对治疗庞贝氏病，还需要进一步改进酶替代疗法。例如，新的重组人酸性α-葡糖苷酶是有希望的，它可以具有一种或多种超越现有酶的优点，包括但不限于改进组织摄取、改进酶活性、改进稳定性或降低免疫原性。
技术实现思路
本专利技术提供了一种用于在对其有需要的患者中治疗庞贝氏病的方法，该方法包括将麦格司他与重组人酸性α-葡糖苷酶(rhGAA)组合给予患者，其中该重组人酸性α-葡糖苷酶在中国仓鼠卵巢(CHO)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于在庞贝氏病的治疗中，与麦格司他组合使用的重组酸性α‑葡糖苷酶,其中该重组酸性α‑葡糖苷酶在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达，并且相比带有阿葡糖苷酶α的一个或两个甘露糖‑6‑磷酸残基的N‑聚糖单元含量，该重组酸性α‑葡糖苷酶包括含量增加的带有一个或两个甘露糖‑6‑磷酸残基的N‑聚糖单元。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.30 US 62/272,890;2016.02.26 US 62/300,479;1.用于在庞贝氏病的治疗中，与麦格司他组合使用的重组酸性α-葡糖苷酶,其中该重组酸性α-葡糖苷酶在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达，并且相比带有阿葡糖苷酶α的一个或两个甘露糖-6-磷酸残基的N-聚糖单元含量，该重组酸性α-葡糖苷酶包括含量增加的带有一个或两个甘露糖-6-磷酸残基的N-聚糖单元。2.用于根据权利要求1使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中该重组人酸性α-葡糖苷酶包括与SEQIDNO:1或SEQIDNO:5具有至少95％一致性的序列。3.用于根据权利要求1或2使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中该重组人酸性α-葡糖苷酶的至少30％的分子包括带有一个或两个甘露糖-6-磷酸残基的一个或多个N-聚糖单元。4.用于根据权利要求1-3中任一项使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中该重组人酸性α-葡糖苷酶包括每摩尔重组人酸性α-葡糖苷酶中的平均从0.5至7.0摩尔的带有一个或两个甘露糖-6-磷酸残基的N-聚糖单元。5.用于根据权利要求1-4中任一项使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中该重组人酸性α-葡糖苷酶包括每摩尔重组人酸性α-葡糖苷酶中的平均至少2.5摩尔的甘露糖-6-磷酸残基和每摩尔重组人酸性α-葡糖苷酶中的至少4摩尔的唾液酸残基。6.用于根据权利要求1-5中任一项使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中该重组人酸性α-葡糖苷酶包括七个潜在的N-糖基化位点，至少50％的该重组人酸性α-葡糖苷酶分子包括带有在第一位点的两个甘露糖-6-磷酸残基的N-聚糖单元；至少30％的该重组人酸性α-葡糖苷酶分子包括带有在第二位点的一个甘露糖-6-磷酸残基的N-聚糖单元；至少30％的该重组人酸性α-葡糖苷酶分子包括带有在第四位点的两个甘露糖-6-磷酸残基的N-聚糖单元；以及至少20％的该重组人酸性α-葡糖苷酶分子包括带有在第四位点的一个甘露糖-6-磷酸残基的N-聚糖单元。7.用于根据权利要求1-6中任一项使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中该重组人酸性α-葡糖苷酶是通过中国仓鼠卵巢细胞系GA-ATB-200或ATB-200-001-X5-14或其次代培养物产生的。8.用于根据权利要求1-7中任一项使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中将该重组人酸性α-葡糖苷酶以约5mg/kg至约20mg/kg的剂量实施静脉给予，并且将麦格司他以约200mg至约600mg的剂量口服给予。9.用于根据权利要求1-8中任一项使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中将麦格司他在给予该重组人酸性α-葡糖苷酶之前给予。10.用于根据权利要求1-9中任一项使用的重组酸性α-葡糖苷酶，其中将麦格司他在给予该重组人酸性α-葡糖苷酶约一小时前给予。11...

【专利技术属性】
技术研发人员：晃·V·杜，里奇·肯纳，拉塞尔·戈乔尔，
申请(专利权)人：阿米库斯治疗学公司，
类型：发明
国别省市：美国,US