一种川牛膝药材的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种川牛膝药材的检测方法，采用高效液相色谱法测定样品HPLC图谱，并比较所得图谱与川牛膝HPLC指纹图谱的相似度和特征峰差异。本发明专利技术检测方法运用多波长切换技术，解决了多组分因吸收波长差异大而无法在单一波长下全部检出的矛盾，本发明专利技术检测方法用于川牛膝药材的真伪鉴别，灵敏度高、高效准确。

【技术实现步骤摘要】
一种川牛膝药材的检测方法
本专利技术涉及一种川牛膝药材的检测方法，具体涉及一种川牛膝的指纹图谱检测方法，属于药物检验领域。
技术介绍
川牛膝为苋科植物川牛膝(CyathulaofficinalisKuan)的干燥根，收载于《中国药典》2015版一部，有逐瘀通经，通利关节，利尿通淋之功效。川牛膝是著名川产道地药材，主产于四川金口河区、宝兴县和湖北恩施市、宣恩县等地。川牛膝为多组分复杂体系，现行《药典》对川牛膝的质量控制仅测定川牛膝中杯苋甾酮含量，单一组分的测定难以反映川牛膝多组分体系下的整体质量，且川牛膝常见伪品头花杯苋和杂牛膝不仅外观形态上与川牛膝相似，其杯苋甾酮含量也能达到《药典》限量指标，现行《药典》方法难以将川牛膝与伪品、掺伪品有效的鉴别开来。市场上川牛膝造假多以川牛膝中掺混头花杯苋和/或杂牛膝出售为主，严重地影响了川牛膝的临床用药安全和道地药材的开发利用。急需一种能准确鉴别川牛膝正品、川牛膝伪品和掺伪品川牛膝的鉴别方法。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种川牛膝药材的检测方法。本专利技术川牛膝药材的检测方法，采用HPLC指纹图谱进行检测，包括如下操作步骤：(1)供试品溶液制备：取待检药材，提取，滤过，取续滤液，即得。(2)吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1-0.3％磷酸水溶液为流动相B。其中，步骤(1)中所述供试品溶液制备方法为：取待检药材粉末，加甲醇水溶液提取，滤过，取续滤液，即得。进一步地，所述甲醇水溶液的浓度是30～60％；和/或，所述甲醇水溶液加入量是药材粉末的5～80v/w倍。进一步地，所述甲醇水溶液的浓度是40～50％；和/或，所述甲醇水溶液加入量是药材粉末的10～40v/w倍。进一步地，所述甲醇水溶液的浓度是45％；和/或，所述甲醇水溶液加入量是药材粉末的20v/w倍。其中，步骤(1)中，所述提取为超声提取，超声提取时间为0～2小时。进一步地，所述超声提取时间为1小时。其中，步骤(2)中，所述色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18柱。进一步地，所所述色谱柱规格为250mm×4.6mm，5μm。其中，步骤(2)中所述流动相B为0.2％磷酸水溶液。其中，步骤(2)中所述高效液相色谱法采用梯度洗脱，洗脱程序为：其中，步骤(2)中所述高效液相色谱法中检测波长为多波长切换：0～15min220nm，15～20min200nm，20～25min250nm，25～90nm220nm，90～109min250nm，109～116min200nm，116～170min220nm。其中，步骤(2)中所述高效液相色谱法中流速0.5-1.5mL/min；进样量10-40μL；柱温15-30℃。进一步地，步骤(2)中所述高效液相色谱法中流速1.0mL/min；进样量20μL；柱温20℃。其中，比较样品HPLC图谱与川牛膝HPLC指纹图谱的相似度和/或特征色谱峰差异鉴别川牛膝真伪。进一步地，所述川牛膝HPLC指纹图谱有18个共有色谱峰，以9号峰为参照峰，各共有色谱峰的相对保留时间依次为：0.037、0.055、0.064、0.149、0.210、0.259、0.484、0.722、1.000、1.030、1.082、1.112、1.146、1.153、1.170、1.279、1.281、1.289，各色谱峰相对保留时间允许偏差为±5％；按保留时间升序排列，各色谱峰分别是：1号峰：保留时间3.8min；2号峰：保留时间5.7min；3号峰：保留时间6.6min；4号峰：保留时间15.3min；5号峰：保留时间21.6min；6号峰：保留时间26.6min；7号峰：保留时间49.7min；8号峰：保留时间74.1min；9号峰：保留时间102.6min；10号峰：保留时间105.7min；11号峰：保留时间111.0min；12号峰：保留时间114.2min；13号峰：保留时间117.7min；14号峰：保留时间118.4min；15号峰：保留时间120.0min；16号峰：保留时间131.2min；17号峰：保留时间131.5min；18号峰：保留时间132.3min，各色谱峰保留时间允许偏差为±0.5min。进一步地，所述相似度判断标准为：所检样品HPLC图谱与川牛膝HPLC指纹图谱相似度大于0.9为川牛膝正品，相似度小于0.5为川牛膝伪品或掺伪品川牛膝。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)评价上述相似度。进一步地，所述特征色谱峰差异判断标准为：(1)17号峰，保留时间131.5min，附近无色谱峰或仅有少量低响应值特征色谱峰检出，则所检样品为川牛膝正品，具体如下：保留时间128.6min处峰面积为0；保留时间130.7min处峰面积为0～81.4；保留时间131.2min处峰面积为0～61.3；保留时间133.5min处峰面积为0～68.9；保留时间134.3min处峰面积为0；保留时间137.2min处峰面积为0；保留时间138.7min处峰面积为0～56.2；保留时间142.3min处峰面积为0；保留时间148.8min处峰面积为0；各色谱峰保留时间允许偏差为±0.5min，各色谱峰峰面积允许偏差为±10％；(2)17号峰，保留时间131.5min，附近有大量高响应值特征色谱峰检出，则所检样品为川牛膝伪品，具体如下：保留时间128.6min处峰面积大于146.9；保留时间130.7min处峰面积大于568.0；保留时间131.2min处峰面积大于137.2；保留时间133.5min处峰面积大于1254.4；保留时间134.3min处峰面积大于171.5；保留时间137.2min处峰面积大于2499.8；保留时间138.7min处峰面积大于353.0；保留时间142.3min处峰面积大于17.1；保留时间148.8min处峰面积大于40.3；各色谱峰保留时间允许偏差为±0.5min，各色谱峰峰面积允许偏差为±10％；(3)保留时间133.5min和137.2min处有色谱峰检出，则所检样品为5％掺伪品川牛膝，具体如下：保留时间133.5min处峰面积为92.5～180.2；保留时间137.2min处峰面积为137.5～220.5；样品HPLC图谱中伪品特征色谱峰检出数量和峰面积大小与掺伪比重呈正相关，所述伪品特征色谱峰包括保留时间为128.6、130.7、131.2、133.5、134.3、137.2、138.7、142.3、148.8min的峰；各色谱峰保留时间允许偏差为±0.5min，各色谱峰峰面积允许偏差为±10％。其中，所述川牛膝伪品包括头花杯苋和/或杂牛膝；所述掺伪品川牛膝为掺混有5％以上头花杯苋和/或杂牛膝的川牛膝。在实际应用中，所得川牛膝指纹图谱各色谱峰保留时间与本专利技术川牛膝HPLC指纹图谱各色谱峰保留时间是否一致，并不重要，只要所得指纹图谱各色谱峰之间的相对保留时间与本专利技术一致，或者在本专利技术允许的误差范围内，都应该算是在本专利技术的保护范围之内，此处所说相对保留时间，可以是任意指定指纹图谱中的一个色谱峰为参照峰后计算所得的相对保留时间，并不只局限于本说明书中所列出的相对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种川牛膝药材的检测方法，其特征在于：所述方法是采用HPLC指纹图谱进行检测的，包括如下操作步骤：(1)供试品溶液制备：取待检药材，提取，滤过，取续滤液，即得。(2)吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1‑0.3％磷酸水溶液为流动相B。

【技术特征摘要】
1.一种川牛膝药材的检测方法，其特征在于：所述方法是采用HPLC指纹图谱进行检测的，包括如下操作步骤：(1)供试品溶液制备：取待检药材，提取，滤过，取续滤液，即得。(2)吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1-0.3％磷酸水溶液为流动相B。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述供试品溶液制备方法为：取待检药材粉末，加甲醇水溶液提取，滤过，取续滤液，即得；所述提取为超声提取，超声提取时间为0～2小时，优选地，超声时间为1小时；所述甲醇水溶液的浓度是30～60％；和/或，所述甲醇水溶液加入量是药材粉末的5～80v/w倍。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述甲醇水溶液的浓度是40～50％；和/或，所述甲醇水溶液加入量是药材粉末的10～40v/w倍；优选地，所述甲醇水溶液的浓度是45％；和/或，所述甲醇水溶液加入量是药材粉末的20v/w倍。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述流动相B为0.2％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，洗脱程序为：5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述高效液相色谱法中检测波长为多波长切换：0～15min220nm，15～20min200nm，20～25min250nm，25～90nm220nm，90～109min250nm，109～116min200nm，116～170min220nm。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18柱，色谱柱规格为250mm×4.6mm，5μm；所述高效液相色谱法中流速0.5-1.5mL/min，进样量10-40μL，柱温15-30℃；优选地，所述高效液相色谱法中流速1.0mL/min，进样量20μL，柱温20℃。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：比较样品HPLC图谱与川牛膝HPLC指纹图谱的相似度和/或特征色谱峰差异鉴别川牛膝真伪。8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述川牛膝HPLC指纹图谱有18个共有色谱峰，以9号峰为参照峰，各共有色谱峰的相对保留时间依次为：0.037、0.055、0.064、0.149、0.210、0.259、0.484、0.722、1.000、1.030、1.082、1.112、1.146、1.153、1.170、1.279、1.281、1.289，各色谱峰相对保留时间允许偏差为±5％；优选地，按保留时间升序排列，各色谱峰分别是：1号峰：保留时间3.8min；2号峰：保留时间5.7min；3号峰：保留时间6.6min；4号峰：保留时间15.3min；5号峰：保留时间21.6min；6号峰：保留时间26.6min；7号峰：保留时间49.7min；8号峰：保留时间74.1min；9号峰：保留时间...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋英，王礼均，袁强华，曹定知，孟杰，施崇精，
申请(专利权)人：四川省中药饮片有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川,51