当归四逆汤指纹图谱的建立方法及指纹图谱技术

本发明专利技术公开了当归四逆汤指纹图谱的建立方法及指纹图谱，属于中药分析领域。本发明专利技术采用高效液相色谱法建立指纹图谱，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；柱温：25‑35℃；流速：0.9‑1.1ml/min；检测波长：220nm；以乙腈A‑0.1％磷酸溶液B为流动相，按如下顺序梯度洗脱：

【技术实现步骤摘要】
当归四逆汤指纹图谱的建立方法及指纹图谱
本专利技术属于中药分析领域，涉及一种中药复方颗粒质量标准检测方法，特别涉及一种当归四逆汤组合物的质量控制方法。
技术介绍
中药汤剂是临床用药的主流，但因起煎煮、携带不方便，煎煮制备的汤剂质量往往因人、因煎煮器具而存在较大差异，而经典名方临床疗效确切，因简、便、验、廉而深受广大消费者喜爱，运用现代科学技术将经典名方开发承携带方便、便于服用的中药制剂，不仅是对中医药的传承，也是更好的促进经典名方的临床应用。颗粒剂制备工艺相对简单、易于赋形，服用、携带方便，在服用形式上与传统汤剂最为一致，能较大限度的保持传统汤剂的特点，因此以汤剂形式服用的经典名方选择颗粒剂最为适宜。颗粒剂的开发应遵循“原汁原味”的原则，在现有技术条件下，首先通过研究制备明确煎煮参数的标准(基准)汤剂，对基准汤剂的关键质量属性进行研究，主要以单处方标准汤剂的固含量(干膏率)、指纹图谱、多指标成分作为质量参比，指导颗粒的研制。研究中为减少不同来源的饮片存在的质量差异对一致性研究带来影响，选择随行对照的方式，采用同一批次的饮片，煎煮至少10份标准汤剂，以其关键质量的均值作为颗粒剂制备工艺参数研制的“基准”。当归四逆汤出自《伤寒论》，该方原治厥阴伤寒，为素体血虚、寒凝经脉所致之证。该方由当归、桂枝、细辛、白芍、炙甘草、通草(川木通)、大枣组成。当归四逆汤方适应症广泛、功效明确，且现今没有以当归四逆汤原方为基础开发而成的中成药。该方虽已逾千年，但由于其组方严谨、配伍精良、功效卓越等特点，在临床上以其为基本方应用甚为广泛。现有中药饮片及复方汤剂及颗粒的质量标准，一般包括两方面，形态鉴别、理化鉴别和光谱色谱分析等，其中光谱色谱分析通常包括薄层色谱法、高效液相含量测定方法、指纹图谱法等。作为中药复方当归四逆汤，由两味以上药味组成，有相对规定性的加工方法和使用方法，其所含化学成分相对复杂、药理作用具有多靶点多层次的特点，而且多方面干扰因素众多，因此研究难度颇大，且生产上难以做到精确稳定可控。而目前药复方制剂领域在含量控制上基本只有一个或两个指标性成分，质量控制单一，指标少，难以全面反映当归四逆汤产品的质量状况。
技术实现思路
因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中的中药复方制剂在含量控制上基本只有一个或两个指标性成分，质量控制单一，指标少，存在难以全面反映药味多，组分多、靶标多的当归四逆汤组合物的质量状况的缺陷，从而提供当归四逆汤指纹图谱的建立方法及指纹图谱。为此，本专利技术提供如下技术方案：当归四逆汤指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；柱温：25-35℃；流速：0.9-1.1ml/min；检测波长：220nm；以乙腈A-0.1％磷酸溶液B为流动相，按如下顺序梯度洗脱：所述指纹图谱包括9个共有峰，各峰相对保留时间与参照峰相对保留时间比值分别为：1号峰相对保留时间RRT为0.31，2号峰相对保留时间RRT为0.72，3号峰相对保留时间RRT为0.81，4号峰相对保留时间RRT为0.90，5号峰相对保留时间RRT为1.00，6号峰相对保留时间RRT为1.38，7号峰相对保留时间RRT为1.72，8号峰相对保留时间RRT为1.80，9号峰相对保留时间RRT为1.97，其中5号S峰是参照物的色谱峰。通过如下方法制备当归四逆汤组合物：按重量份配比取当归3份；桂枝3份；白芍3份；细辛1份；炙甘草2份；川木通2份；大枣6.67份，加水提取两次，滤过，于50℃下将滤液浓缩相对密度为1.20-1.25的清膏，加麦芽糊精，混合，干燥，制粒，即得。供试品水溶液按如下方法制备：取当归四逆汤组合物，混匀，研细，取0.5-2.0重量份，置具塞容器中，加入70％甲醇20体积份，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。参照物溶液按如下方法制备：取芍药苷对照品适量，称定，加甲醇制成每1体积份含0.0003重量份的溶液，即得。进样量为10μl-20μl。当归四逆汤指纹图谱，所述指纹图谱包括9个共有峰各峰相对保留时间与参照峰相对保留时间比值分别为：其中：1号峰相对保留时间RRT为0.31，2号峰相对保留时间RRT为0.72，3号峰相对保留时间RRT为0.81，4号峰相对保留时间RRT为0.90，5号峰相对保留时间RRT为1.00，6号峰相对保留时间RRT为1.38，7号峰相对保留时间RRT为1.72，8号峰相对保留时间RRT为1.80，9号峰相对保留时间RRT为1.97，其中5号S峰是参照物的色谱峰。本专利技术技术方案，具有如下优点：1、本专利技术提供的当归四逆汤指纹图谱的建立方法所得的指纹图谱全面反映出当归四逆汤组合物质量信息，从而能够达到更加全面、有效地控制当归四逆汤制剂产品质量的目的。2、本专利技术提供的当归四逆汤指纹图谱的建立方法采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所测指纹图谱的辨认，操作方便、快捷；而且，以此得出的相以度结果对制剂指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。3、本专利技术提供的当归四逆汤指纹图谱的建立方法经过对供试品制备方法的考察及测定指纹图谱的仪器，色谱柱、流动相、检测波长等条件进行系统的优选，建立了指纹图谱测定条件并进行了方法学考察，在对多批本中药组合物指纹图谱检测结果的基础上，逐渐积累数据，提出了标准指纹图谱，作为本品指纹图谱标准，从而达到能够更全面、有效地控制制剂质量的目的。4、本专利技术提供的当归四逆汤指纹图谱的建立方法采用国家药典委员会提供中药色谱指纹图谱相似度评价系统做为本中药组合物指纹图谱相似度计算软件，经多次试验研究，通过与计算相对保留时间及相对峰面积的方法相比较，所得出的评价结论基本一致，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统评价指纹图谱的相似度，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对制剂指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。5、本专利技术提供的当归四逆汤指纹图谱的建立方法采用指纹图谱较全面的表征组合物的质量信息，从整体上反映产品质量，同时针对处方五味药材，采用多波长切换技术建立所有药味的含量控制指标，供试品溶液的制备方法简单、便捷，且测定结果准确、可靠；本专利技术考虑目前现有技术在控制复方中成药上往往只有一个或两个指标性成分，且缺乏指纹图谱整体表征产品质量信息，因此提出以指纹图谱结合多指标成分含量控制的方式全面的控制当归四逆汤质量。6、本专利技术提供的当归四逆汤指纹图谱的建立方法提出采用指纹图谱，结合多波长切换技术测定当归四逆汤种多个指标成分。7、本专利技术提供的当归四逆汤指纹图谱的建立方法可以为当归四逆汤提供一种较全面的质量控制方法。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术当归四逆汤组合物药材指纹图谱三维图谱；图2为本专利技术当归四逆汤组合物指纹图谱对照图谱；图3为本专利技术当归四逆汤组合物精密度考察指纹图谱叠加图；图4为本专利技术当归四逆汤组合物稳定性试验指纹图谱叠加图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.当归四逆汤指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；柱温：25‑35℃；流速：0.9‑1.1ml/min；检测波长：220nm；以乙腈A‑0.1％磷酸溶液B为流动相，按如下顺序梯度洗脱：

【技术特征摘要】
1.当归四逆汤指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；柱温：25-35℃；流速：0.9-1.1ml/min；检测波长：220nm；以乙腈A-0.1％磷酸溶液B为流动相，按如下顺序梯度洗脱：2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述指纹图谱包括9个共有峰，各峰相对保留时间与参照峰相对保留时间比值分别为：1号峰相对保留时间RRT为0.31，2号峰相对保留时间RRT为0.72，3号峰相对保留时间RRT为0.81，4号峰相对保留时间RRT为0.90，5号峰相对保留时间RRT为1.00，6号峰相对保留时间RRT为1.38，7号峰相对保留时间RRT为1.72，8号峰相对保留时间RRT为1.80，9号峰相对保留时间RRT为1.97，其中5号S峰是参照物的色谱峰。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，通过如下方法制备当归四逆汤组合物：按重量份配比取当归3份；桂枝3份；白芍3份；细辛1份；炙甘草2份；川木通2份；大枣6.67份，加水提取两次，滤过，于50℃下将滤液浓缩相对密度为1.20-1.25的清膏，加麦芽...

【专利技术属性】
技术研发人员：林丽娜，刘英，陈周全，刘志刚，谭沛，马鹏岗，高雅，高云佳，屠鹏飞，
申请(专利权)人：华润三九医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44