本申请涉及一种采用HPLC‑DAD‑MS测定郁金次生代谢产物的方法。本申请通过采用HPLC‑DAD‑MS分析手段，建立郁金指纹图谱分析方法，并通过模式识别技术，分析郁金次生代谢产物，结合紫外、多级质谱数据，对生物标志物进行鉴定。
【技术实现步骤摘要】
一种采用HPLC-DAD-MS测定郁金次生代谢产物的方法
：本申请涉及一种采用HPLC-DAD-MS测定郁金次生代谢产物的方法，属于中药分析测定领域。
技术介绍
：郁金临床常用于治疗肝胆系统疾病，通过初步研究，我们得出如下结论：郁金水提物表现为性寒，郁金醇提物均表现为性温；郁金提取物的寒温与其姜黄素含量有一定正相关性。
技术实现思路
：为了分析郁金性寒的有效成分群，需要采用HPLC-MS指纹图谱技术，分析郁金的次生代谢产物、提取物及含药血清图谱间，阐明其体内作用的物质基础。本申请采用HPLC-DAD-MS分析手段，建立郁金指纹图谱分析方法，并通过模式识别技术，比较郁金次生代谢产物的差异，结合紫外、多级质谱数据，对生物标志物进行鉴定。一种采用HPLC-DAD-MS测定郁金次生代谢产物的方法，其特征在于，(1)取郁金饮片粉碎、过20目筛，精称0.5g粉末，置于具塞三角瓶中，精密加入50mL甲醇，称重后置于超声波提取器中，冰水超声提取40min，取出称重后用甲醇补重，进样前过0.45μm微孔滤膜，(2)取处理好的样品，上样，其中HPLC-DAD-MS测定的条件为：固定相：KromasilC185uL250×4.6mm(E48163)，柱温35℃，流动相：A相：0.1％甲酸水，B相：乙腈，梯度设置：0-20min，10-60％B；20-45min，60-100％B；45-50min，100％B，流速：1.0ml/min，进样量：10μL，DAD检测器的设置：200-400nm(监测波长265nm)，质谱检测器的设置：附图说明：附图1姜黄、郁金HPLC-DAD(265nm)色谱指纹图谱匹配图(a)姜黄典型色谱图(b)郁金典型色谱图(c)姜黄、郁金色谱匹配图a.Notidentifiedb.Bisdemethoxycurcuminc.Demethoxycurcumind.Curcumine.Notidentufiedf.Ar-turmeroneg.Zingiberene，β-bisaboleneorβ-curcumeneh.α，β-turmeroneorbisacumol附图2姜黄、郁金质谱总离子流图(TIC)(A：姜黄，B：郁金)附图3PCA主成份分析得分图(scoresplot)附图4PCA主成份分析载荷图(LoadingPlot)附图5姜黄、郁金主要次生差异代谢产物相对含量比较附图6(a)姜黄素标品一级质谱图附图6(b)姜黄素标品分子离子峰(m/z369)的二级质谱图附图7生物标志物2的一级质谱图(出峰时间：UV.22.5min，MS：23min)附图8生物标志物2的紫外全波长扫描图(出峰时间：UV.22.5min，MS：23min)附图9生物标志物2的二级质谱图(出峰时间：UV.22.5min，MS：23min)附图10生物标志物3的一级质谱图(出峰时间：UV.23.0min，MS：23.5min)附图11生物标志物3的紫外全波长扫描图(出峰时间：UV.23.0min，MS：23.5min)附图12生物标志物3的二级质谱图(出峰时间：UV.23.0min，MS：23.5min)附图13生物标志物4的一级质谱图(出峰时间：UV.23.6min，MS：24.1min)附图14生物标志物4的紫外全波长扫描图(出峰时间：UV.23.6min，MS：24.1min)附图15生物标志物4的二级质谱图(出峰时间：UV.23.6min，MS：24.1min)附图16生物标志物5的一级质谱图(出峰时间：UV.24.8min，MS：25.3min)附图17生物标志物5的紫外全波长扫描图(出峰时间：UV.24.8min，MS：25.3min)附图18生物标志物5的二级质谱图(出峰时间：UV.24.8min，MS：25.3min)附图19生物标志物8的一级质谱图(出峰时间：UV.33.4min，MS：33.9min)附图20生物标志物8的紫外全波长扫描图(出峰时间：UV.33.4min，MS：33.9min)附图21生物标志物8的二级质谱图(出峰时间：UV.33.4min，MS：33.9min)附图22生物标志物9的一级质谱图(出峰时间：UV.35.2min，MS：35.6min)附图23生物标志物9的紫外全波长扫描图(出峰时间：UV.35.2min，MS：35.6min)附图24生物标志物9的二级质谱图(出峰时间：UV.35.2min，MS：35.6min)附图25生物标志物10的一级质谱图(出峰时间：UV.37.0min，MS：37.4min)附图26生物标志物10的紫外全波长扫描图(出峰时间：UV.37.0min，MS：37.4min)附图27生物标志物10的二级质谱图(出峰时间：UV.37.0min，MS：37.4min)具体实施方式：具体实验如下：一、材料与仪器仪器：Agilent1200HPLC系统，高压二元梯度泵、自动进样器、柱温箱、Chemstations化学工作站等(美国Agilent公司)，串联二极管阵列检测器(DADdetector)和安捷伦离子阱质谱检测器(AgilentLC-MSD-Trap-SLiontrapmassspectrometer)。台式高速离心机(美国Labnet)，SartoriousBT25S型1/100000电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)，KQ-500DE型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)，水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)。试剂：甲醇、乙腈为Fisher色谱纯，甲酸(色谱纯，国药集团化学试剂有限公司)，水为Milli-Qwatersystem(Millipore，Bedfo-rd，MA，USA)过滤后的纯水。数据处理软件：6300SeriesIonTrapLC/MSSoftware6.1，SIMCA-P+12.0(Umetrics，Sweden)，MicrosoftExcel2003(MicrosoftCorporation)，色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会)，SPSS11.5软件包(SPSSInc，美国)。二、实验方法1.郁金样品的采集与前处理姜科植物姜黄(Curcuma.LongaL)样品采自四川省成都市，样品经鉴定为姜科植物姜黄，块根即中药材郁金。2.提取方法考察为保证样品制备的过程中成分的稳定性，采用冰水超声提取的办法，根据色谱出峰情况(数量、强度)，考察超声时间20、30、40、50、60min。提取溶剂：采用甲醇作为提取溶剂，根据色谱图出峰情况考察甲醇用量8、10、20、50、100倍。3.HPLC-DAD-MS色谱条件的优化及方法学考察固定相的考察：实验中考察了三种色谱柱分别为DiamonsilC185uL250×4.6mm(DiKmaSer.no.：8038655)，KromasilC185uL250×4.6mm(E48163)，AgelaTechnologiesVenusilMP-C18(250×4.60mm，5μm，SN：4625051005)。流动相考察：甲醇-水，乙腈-水以及不同浓度的甲酸。DAD检测信号的确定：考察不同(200-400)检测波长，根据峰的数量和分离情况确定最佳检测波长。方法学考察：从样品色谱图中均匀选取响应较本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种采用HPLC‑DAD‑MS测定郁金次生代谢产物的方法，其特征在于，(1)取郁金饮片粉碎、过20目筛，精称0.5g粉末，置于具塞三角瓶中，精密加入50mL甲醇，称重后置于超声波提取器中，冰水超声提取40min，取出称重后用甲醇补重，进样前过0.45μm微孔滤膜，(2)取处理好的样品，上样，其中HPLC‑DAD‑MS测定的条件为：固定相：Kromasil C18 5uL 250×4.6mm(E48163)，柱温35℃，流动相：A相：0.1％甲酸水，B相：乙腈，梯度设置：0‑20min，10‑60％B；20‑45min，60‑100％B；45‑50min，100％B，流速：1.0ml/min，进样量：10μL，DAD检测器的设置：200‑400nm(监测波长265nm)，质谱检测器的设置：
【技术特征摘要】
1.一种采用HPLC-DAD-MS测定郁金次生代谢产物的方法，其特征在于，(1)取郁金饮片粉碎、过20目筛，精称0.5g粉末，置于具塞三角瓶中，精密加入50mL甲醇，称重后置于超声波提取器中，冰水超声提取40min，取出称重后用甲醇补重，进样前过0.45μm微孔滤膜，(2)取处理好的样品，上样，其中HPLC-DAD-MS测定的条件为：固定相：K...
【专利技术属性】
技术研发人员：李洪梅，吴宏伟，孙建辉，霍海如，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。