本发明专利技术提供了以高亲和力与PD‑L1特异性结合的抗体或其功能性片段。还提供了编码本发明专利技术抗体或其功能性片段的核酸分子，用于表达本发明专利技术抗体或其功能性片段的表达载体和宿主细胞，以及本发明专利技术抗体或其功能性片段的生产方法。本发明专利技术提供了包含本发明专利技术抗体或其功能性片段的免疫缀合物以及药物组合物，以及使用本发明专利技术的抗体或其功能性片段增强T细胞的功能以上调细胞介导的免疫应答用于治疗T细胞功能失调性疾病的方法。
【技术实现步骤摘要】
抗PD-L1抗体及其应用
本专利技术属于生物医药领域，本专利技术提供抗原性多肽，其可以用于产生能够结合PD-L1衍生的分子的抗体。本专利技术还涉及以高亲和力与PD-L1特异性结合的抗体或其功能性片段。本专利技术还提供了编码本专利技术抗体或其功能性片段的核酸分子，用于表达本专利技术抗体或其功能性片段的表达载体和宿主细胞，以及本专利技术抗体或其功能性片段的生产方法。本专利技术还提供了包含本专利技术抗体或其功能性片段的免疫缀合物以及药物组合物，以及使用本专利技术的抗体或其功能性片段增强T细胞的功能以上调细胞介导的免疫应答用于治疗T细胞功能失调性疾病的方法。
技术介绍
程序性细胞死亡蛋白配体1(Programmeddeath-ligand1,PD-L1)，又可称为分化簇274(clusterofdifferentiation274，CD274)或者B7同源蛋白1(B7homolog1，B7-H1)，属于肿瘤坏死因子超家族，是由290个氨基酸残基组成的I型跨膜糖蛋白，包含一个IgV样区、一个IgC样区、一个跨膜疏水区和一个30个氨基酸的胞内尾部,完整分子量为40kDa1。PD-L1mRNA在几乎所有组织中都有表达，但PD-L1蛋白只在少部分组织中持续表达，包括肝脏、肺脏、扁桃体以及免疫特赦组织如眼、胎盘等。PD-L1也表达于活化的T细胞，B细胞，单核细胞，树突状细胞，巨噬细胞等2。PD-L1的受体为PD-1，主要表达于CD4+T细胞、CD8+T细胞、NKT细胞、B细胞和活化的单核细胞等免疫细胞表面。PD-L1与PD-1结合可以启动PD-1胞浆区ITIM(免疫受体酪氨酸抑制作用模块)酪氨酸残基的磷酸化，促使酪氨酸磷脂酶与SHP2结合，活化SHP2,使下游Syk和PI3K发生去磷酸化从而传递终止信号，限制抗原呈递细胞或者树突状细胞与T细胞的相互作用3。这种结合还可以进一步抑制T细胞的代谢，抑制抗凋亡蛋白Bcl-X2的分泌，减少效应细胞因子IL-2,IFN-r的分泌，诱导T细胞耗竭和凋亡，从而降低免疫T细胞参与的免疫应答，行使负性调节功能4。T细胞识别抗原并活化后会分泌IFN-r。T细胞来源的IFN-r会扩增和维持T细胞功能，比如上调MHC分子，增强目标细胞的抗原处理和呈递，促进T细胞分化。IFN-r同时也会诱导免疫炎症部位组织的PD-L1表达，防止过度免疫对组织造成伤害。IFN-r可以诱导常规上皮细胞，血管内皮细胞，髓样细胞，幼稚T细胞等细胞表面PD-L1的表达5,6。IFN-r诱导产生的干扰素调节因子1(IRF-1)也可以与PD-L1转录起始位点前200bp和320bp处的干扰素调节因子结合位点结合，从转录水平调节PD-L17。PD-L1可以与T细胞表面的PD-1结合行使负调节功能，从而保护炎性部位。PD-L1的负性调控功能在肿瘤免疫中发挥着重要作用。2004年，Konishi等率先在非小细胞肺癌病人的组织样本中发现PD-L1的表达，随后PD-L1被发现表达于各种肿瘤病人的组织中，包括胃癌，肺癌，肝癌，肝内胆管癌，结肠癌，胰腺癌，卵巢癌，乳腺癌，子宫颈癌，头颈鳞状细胞癌，鼻咽癌，食管癌，膀胱癌，肾细胞癌，皮肤癌，口腔鳞状细胞癌等8,9。细胞恶变过程中，由于基因突变、外源基因(病毒)表达或静止基因激活等原因会产生新的蛋白分子，这些蛋白质在细胞内降解后，某些降解的肽段可以表达于细胞表面，成为肿瘤抗原。免疫系统可以通过免疫监察识别肿瘤抗原并清除肿瘤细胞，而肿瘤细胞则利用PD-L1逃避免疫攻击。肿瘤部位PD-L1的表达可以通过多种途径保护肿瘤细胞免受伤害。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)分泌IFN-r可诱导肿瘤细胞及周围基质细胞表达PD-L1。而肿瘤细胞的PD-L1可以与TIL上PD-1结合，抑制TIL细胞的活化，并进一步导致其凋亡。体外实验证明，肿瘤细胞相关PD-L1可以增加肿瘤特异T细胞的调亡，而PD-L1单克隆抗体可以减弱这种作用。肿瘤相关PD-L1可以促进T细胞表达IL-10，进一步抑制免疫反应。PD-L1不仅仅是PD-1的配体，他也可以作为受体传递反向的信号保护肿瘤细胞免受FAS-FASL等其他抗肿瘤途径诱导的凋亡2。多种慢性和急性病毒也利用PD-L1信号逃避人体免疫检测。Wang等发现HIV感染者骨髓来源的树突状细胞上PD-L1的表达明显上调，经过抗病毒感染，抑制HIV复制后，PD-L1的表达下调，同时伴随T细胞数目的上调10；Chen等研究发现慢性HBV感染者的T淋巴细胞和树突状细胞上PD-L1的表达也上调11。病毒感染会诱导感染细胞高表达PD-L1，同时诱导CD8+T细胞表达PD-1，从而抑制T细胞作用，导致效应T细胞耗竭。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是，提供增强T细胞功能的相关靶点的抗体和所述抗体的功能片段，使用所述抗体或抗体功能片段增强T细胞的功能以上调细胞介导的免疫应答用于治疗T细胞功能失调性疾病的方法。为了实现上述目的，本专利技术的专利技术人做了深入研究，由此他们发现了特异性结合PD-L1并抑制PD-L1与PD-1结合，从而增强T细胞功能的抗体，即JS003,本专利技术包括以下内容。一方面，本专利技术的抗体或其功能性片段包含选自氨基酸序列SEQIDNO:7，8，9，13，14，15，19，20，21，22，23，24，28，29，30或所述序列之变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQIDNO:1，2，3，4，5，6，10，11，12，16，17，18，25，26，27或任何所述序列之变体的轻链CDR。在另一方面，本专利技术进一步提供了能够结合PD-L1的抗体或其功能性片段，其中所述重链CDR的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列选自以下各氨基酸序列或其变体的组中的一组：HCDR1HCDR2HCDR3ASEQIDNO:7SEQIDNO:8SEQIDNO:9BSEQIDNO:13SEQIDNO:14SEQIDNO:15CSEQIDNO:19SEQIDNO:20SEQIDNO:21DSEQIDNO:22SEQIDNO:23SEQIDNO:24ESEQIDNO:28SEQIDNO:29SEQIDNO:30和/或所述轻链CDR的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列选自以下各氨基酸序列或其变体的组中的一组：在另一方面，本专利技术提供了能够结合PD-L1的抗体或其功能性片段，其重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列选自以下各氨基酸序列或其变体的组中的一组：在另一方面，本专利技术提供了能够结合PD-L1的抗体或其功能性片段，其包含选自氨基酸序列SEQIDNO:33,35,37,38,40或任何所述序列之变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQIDNO:31,32,34,36,39或任何所述序列之变体的轻链可变区。在另一方面，本专利技术提供了能够结合PD-L1的抗体或其功能性片段，其为嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。在另一方面，本专利技术提供了编码本专利技术的能够结合PD-L1的抗体或其功能性片段的分离的核酸分子，及包含所述核酸分子的表达载体或宿主细胞。在另一方面，本专利技术提供了能够结合PD-L1的抗体或其功能性片段，或编码其的核酸分子，或表达载体或宿主细胞在增强T细胞的功能以上调细胞介导的免疫应答用于治疗T细胞功能失调性疾病,本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗体或其功能性片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:7,8,9,13,14,15,19,20,21,22,23,24,28,29,30或任何所述序列之变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:1,2,3,4,5,6,10,11,12,16,17,18,25,26,27或任何所述序列之变体的轻链CDR。
【技术特征摘要】
1.抗体或其功能性片段，其包含选自氨基酸序列SEQIDNO:7,8,9,13,14,15,19,20,21,22,23,24,28,29,30或任何所述序列之变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQIDNO:1,2,3,4,5,6,10,11,12,16,17,18,25,26,27或任何所述序列之变体的轻链CDR。2.权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其中所述重链CDR的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列选自以下各氨基酸序列或其变体的组中的一组：HCDR1HCDR2HCDR3ASEQIDNO:7SEQIDNO:8SEQIDNO:9BSEQIDNO:13SEQIDNO:14SEQIDNO:15CSEQIDNO:19SEQIDNO:20SEQIDNO:21DSEQIDNO:22SEQIDNO:23SEQIDNO:24ESEQIDNO:28SEQIDNO:29SEQIDNO:30和/或所述轻链CDR的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列选自以下各氨基酸序列或其变体的组中的一组：3.权利要求1或2所述的抗体或其功能性片段，其重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列选自以下各氨基酸序列或其变体的组中的一组：4.权利要求1至3中任一项所述的抗体或其功能性片段，其包含选自氨基酸序列SEQIDNO:33,35,37,38,40或任何所述序列之变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQIDNO:31,32,34,36,39或任何所述序列之变体的轻链可变区。5.权利要求1至4中任一项所述的抗体或其功能性片段，其中所述重链可变区为SEQIDNO:33或其变体并且所述轻链可变区为SEQIDNO:31或其变体，或者所述重链可变区为SEQIDNO:33或其变体并且所述轻链可变区为SEQIDNO:32或其变体，或者所述重链可变区为SEQIDNO:35...
【专利技术属性】
技术研发人员：武海，姚盛，周岳华，姚剑，蒙丹，冯辉，
申请(专利权)人：上海君实生物医药科技股份有限公司，苏州君盟生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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