一种可提高肺部黏膜免疫应答水平的免疫佐剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种可提高肺部黏膜免疫应答水平的免疫佐剂及其应用。本发明专利技术使用黏膜免疫佐剂C48/80、黏膜免疫佐剂TMC60、氢氧化铝佐剂三种佐剂配合rPA抗原蛋白通过不同免疫接种途径对小鼠进行免疫，对不同免疫佐剂和不同免疫接种途径的免疫保护性进行了相关评价，最终筛选得到一种炭疽疫苗免疫方法：炭疽疫苗添加免疫佐剂TMC60和C48/80，肺递送气溶胶免疫接种。本发明专利技术的免疫方法可增强黏膜免疫应答，有效预防吸入性炭疽，在炭疽病的控制中可发挥重要作用。

An immune adjuvant that can improve the level of mucosal immune response in the lung and its application

The invention discloses an immune adjuvant which can improve the level of mucosal immune response of the lung and its application. The invention uses three adjuvants of mucosal immune adjuvant C48/80, mucosal immune adjuvant TMC60 and aluminium hydroxide adjuvant to immunize mice through different immunization routes with rPA antigen protein, evaluates the immune protection of different immune adjuvants and different immunization routes, and finally selects and obtains a kind of anthrax vaccine. Immunization method: anthrax vaccine was added with immune adjuvant TMC60 and C48/80, and the lungs were delivered with aerosol immunization. The immune method of the invention can enhance the mucosal immune response, effectively prevent inhalation anthrax, and play an important role in the control of anthrax.

【技术实现步骤摘要】
一种可提高肺部黏膜免疫应答水平的免疫佐剂及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种可提高肺部黏膜免疫应答水平的免疫佐剂及其应用。
技术介绍
炭疽病是一种人畜共患烈性传染病，其临床类型分为三种：皮肤炭疽、吸入性炭疽、胃肠炭疽。吸入性炭疽又称肺炭疽，其病死率在以上三种类型中最高。由于炭疽芽孢对外环境高度耐受，可以以气溶胶形式通过呼吸道感染人群引起高死亡率，因此炭疽被认为是最危险的生物战剂。炭疽疫苗作为预防炭疽病的主要手段，在炭疽病的控制中发挥了重要的作用。而炭疽芽孢被制成生物战剂的可能性使得人们迫切需求预防吸入性炭疽的安全有效的疫苗。目前世界上获得许可的人用炭疽疫苗主要有两类：①减毒活芽孢疫苗。该疫苗由无荚膜的减毒株芽孢制成，主要通过皮肤划痕接种，我国使用的是A16R株，对肺炭疽的保护效果不佳，并具有一定的不良反应。②炭疽弱毒株无菌培养滤液佐剂吸附/沉淀苗。包括美国FDA批准的AVA(AnthraxVaeeineAbsorbted)和英国批准的AVP(AnthraxVaccinePrecipitated)。AVA、AVP疫苗虽然有效，但其成分复杂，免疫接种程序繁琐且持续时间长，效力持续时间短，引起高比率的局部及全身不良反应，很难在普通群体中推广接种。现有疫苗安全性和效力持续性等方面的缺陷促使了第二代炭疽疫苗得以发展。第二代疫苗是基于PA保护性抗原的基因工程重组PA亚单位疫苗(recombinantPA，rPA)，rPA疫苗克服了第一代疫苗抗原成分复杂的问题，能降低疫苗接种时的反应原性。rPA与铝佐剂联合免疫兔和非人灵长类动物模型也显示出较高的保护效力。但是rPA疫苗的最佳剂型、免疫程序以及免疫佐剂方案都需进一步进行研究。炭疽疫苗的常规免疫途径为注射接种，然而以诱导全身免疫应答为主的注射接种途径不能在吸入性炭疽芽孢最先侵入的部位——呼吸道及时有效地诱导局部特异性抗体的产生。而疫苗通过呼吸道黏膜免疫，模拟了自然感染的过程，可以同时诱导黏膜局部和全身免疫应答，理论上是吸入性炭疽的最佳免疫途径。黏膜免疫除了可以诱导机体同时产生系统和局部免疫应答以外还具备以下优点：避免了注射接种可能引发的局部不良反应；避免了大人群免疫接种时产生大量的一次性废弃物如注射器等；避免了血液传播病原体如艾滋病毒、乙肝病毒等通过注射交叉污染；可以更有效的预防通过气道传播病原体的感染。因此近年来，用黏膜免疫途径(包括鼻、肺、胃肠道、生殖道黏膜)替代传统免疫途径接种炭疽疫苗受到广泛关注。目前炭疽疫苗肺吸入免疫仅限于前苏联时期对安全性差的炭疽活菌苗的研究，第二代rPA疫苗以及第三代疫苗免疫途径的研究目前主要集中在较容易操作的其他黏膜免疫途径方面(如鼻、胃肠道黏膜)并且未达到理想的免疫保护效果，而肺吸入途径免疫的研究仍处于空白状态。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种免疫佐剂组合物。本专利技术提供的免疫佐剂组合物由免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80组成。上述免疫佐剂组合物中，所述免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80的质量比为6:(20-30)；所述免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80的质量比具体为6:25。本专利技术的另一个目的是提供上述免疫佐剂组合物的新用途。本专利技术提供了上述免疫佐剂组合物在制备炭疽疫苗中的应用。本专利技术还有一个目的是提供一种炭疽疫苗。本专利技术提供的炭疽疫苗包括rPA抗原蛋白和上述免疫佐剂组合物。上述炭疽疫苗中，所述rPA抗原蛋白、所述免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80的质量比为2:(4-8):(20-30)；所述rPA抗原蛋白、所述免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80的质量比具体为2:6:25。上述炭疽疫苗中，所述疫苗采用肺递送气溶胶免疫途径进行接种。所述采用肺递送气溶胶免疫途径进行接种的方法为将所述疫苗通过液体气溶胶肺递送装置递送至动物的肺部。本专利技术的炭疽疫苗由rPA抗原蛋白、所述免疫佐剂TMC60、免疫佐剂C48/80和HEPES缓冲液组成。具体的，所述炭疽疫苗是将10μgrPA抗原、30μg黏膜免疫佐剂C48/80、125μg黏膜免疫佐剂TMC60和50μLHEPES缓冲液混匀得到的。本专利技术的最后一个目的是提供上述免疫佐剂组合物或上述炭疽疫苗的新用途。本专利技术提供了上述免疫佐剂组合物或上述炭疽疫苗在如下1)-10)中任一种中的应用：1)预防炭疽病；2)制备预防炭疽病的产品；3)增强黏膜免疫应答水平；4)制备增强黏膜免疫应答水平的产品；5)提高免疫后动物血清中抗rPA特异性抗体IgG滴度；6)制备提高免疫后动物血清中抗rPA特异性抗体IgG滴度的产品；7)提高免疫后动物肺部中抗rPA特异性抗体S-IgA滴度；8)制备提高免疫后动物肺部中抗rPA特异性抗体S-IgA滴度的产品；9)提高免疫后动物血清和/或肺部中炭疽毒素中和抗体滴度；10)制备提高免疫后动物血清和/或肺部中炭疽毒素中和抗体滴度的产品。上述应用中，所述炭疽病为吸入性炭疽病。上述应用中，所述增强黏膜免疫应答水平为增强肺黏膜免疫应答水平。本专利技术的有益效果：1)本专利技术首次发现黏膜免疫佐剂C48/80与TMC60联用能显著增强黏膜免疫应答，为今后的黏膜免疫研究提供了优秀的佐剂配方参考；2)本专利技术采用的肺递送气溶胶接种炭疽rPA疫苗的免疫方法既能诱导最强的肺部黏膜免疫应答，又能诱导相等或稍高于皮下注射途径的全身免疫应答，是一种全身与局部免疫诱导兼具的接种途径；在佐剂相同条件下，肺递送气溶胶接种诱导的黏膜免疫反应强度高于其他免疫途径。本专利技术使用黏膜免疫佐剂C48/80、黏膜免疫佐剂TMC60、氢氧化铝佐剂三种佐剂配合rPA抗原蛋白通过不同免疫接种途径对小鼠进行免疫，对不同免疫佐剂和不同免疫接种途径的免疫保护性进行了相关评价，最终筛选得到一种炭疽疫苗免疫方法：炭疽疫苗添加免疫佐剂C48/80和TMC60，采用肺递送气溶胶的免疫途径进行接种。本专利技术的免疫方法可增强黏膜免疫应答，有效预防吸入性炭疽，在炭疽病的控制中可发挥重要作用。附图说明图1为血清抗rPA特异性抗体IgG的滴度检测结果。注：A、B、C为统计分析两两比较结果分组。图2为血清抗rPA特异性抗体IgG1/IgG2a检测结果。注：A、B、C为统计分析两两比较结果分组。图3为肺灌洗液抗rPA特异性S-IgA检测结果。注：A、B、C为统计分析两两比较结果分组。图4为血清、肺灌洗液炭疽毒素中和抗体检测结果。注：A、B、C为统计分析两两比较结果分组。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中的黏膜免疫佐剂TMC60记载于文献“张冕，何文，李菁，代文兵，不同季铵化程度的N-三甲基壳聚糖透皮吸收促进作用的研究，中国药学杂志，2006年10月第41卷第19期，1475-1478”中，公众可从中国人民解放军军事科学院军事医学研究院获得。实施例1、炭疽rPA疫苗多种免疫途径、多种佐剂免疫的免疫原性比较研究一、炭疽rPA疫苗多种免疫途径、多种佐剂免疫的免疫原性比较试验方法1、实验分组本专利技术比较了炭疽rPA疫苗通过肺递送(intropulmonary，IP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫佐剂组合物，其由免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80组成。

【技术特征摘要】
1.一种免疫佐剂组合物，其由免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80组成。2.根据权利要求1所述的免疫佐剂组合物，其特征在于：所述免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80的质量比为6:(20-30)；和/或，所述免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80的质量比为6:25。3.权利要求1或2所述的免疫佐剂组合物在制备炭疽疫苗中的应用。4.一种炭疽疫苗，所述疫苗包括rPA抗原蛋白和权利要求1或2所述的免疫佐剂组合物。5.根据权利要求4所述的炭疽疫苗，其特征在于：所述rPA抗原蛋白、所述免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80的质量比为2:(4-8):(20-30)；和/或，所述rPA抗原蛋白、所述免疫佐剂TMC60和免疫佐剂C48/80的质量比为2:6:25。6.根据权利要求3-5任一所述的炭疽疫苗，其特征在于：所述疫苗采用肺递送气溶胶免疫途径进行接种。7.根据权利要求6所述的炭疽疫苗，其特征在于：所述采用肺递送气溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文慧，周冬生，焦周光，孙岩松，法云智，高波，邱业峰，胡凌飞，杨慧盈，靳爱军，焦俊，赵月娥，于学东，殷喆，熊小路，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11