包括聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂和基于脂质的佐剂的辅助系统以及无水疫苗组合物技术方案

本公开内容提供了辅助系统，其包括：(a)聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂；(b)基于脂质的佐剂；(c)两亲化合物；和(d)疏水运载体。还提供了无水或基本上不含水的疫苗组合物，其包括相同的组分连同一种或多种抗原。本公开内容还提供了这样的组合物在诱导抗体(体液)和/或细胞介导的免疫应答中的用途和它们用于治疗通过抗体和/或细胞介导的免疫应答减轻的疾病、障碍或病痛的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包括聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂和基于脂质的佐剂的辅助系统以及无水疫苗组合物相关申请的交叉引用本申请要求2015年11月18日提交的美国临时专利申请号62/256,875的权益和优选权，其由此通过引用以其全部并入本文。
本公开内容一般地涉及辅助系统和疫苗组合物，其在诱导和/或加强免疫对象中的抗原特异性体液免疫应答和细胞介导的免疫应答中具有增强的功效。
技术介绍
包含限定的蛋白质或肽抗原的疫苗的免疫原性不足以生成快速的和持续的免疫力。这可以有时采用佐剂强化对抗原的免疫应答而被克服(Schijns和Lavelle2011)。通常存在两个大类的佐剂：递送系统和免疫刺激剂(Dubensky和Reed2010，Schijns和Lavelle2011，Hafner,Corthesyetal.2013)。通过提供稳定性和抗原与免疫系统的持续的相互作用，疫苗的递送系统可以充当佐剂(Alving,Peachmanetal.2012)。疫苗还可以掺入作为佐剂的具有免疫刺激活性的分子化合物，目的是通过直接激活免疫系统的细胞来进一步增强疫苗的免疫原性。免疫刺激性佐剂是限定的分子激动剂，其经由专用的受体由免疫系统识别，例如聚肌胞苷酸刺激Toll样受体3，并且Pam3CSK4(SEQIDNO:1)刺激Toll样受体1/2(Duthie,Windishetal.2011，Ogawa,Liuetal.2011)。免疫刺激剂可以激活免疫系统并且还指导针对疫苗抗原生成的免疫应答的类型。例如，许多疫苗的效力与抗体的生成相关；然而，对于其它类型的疫苗，主要由CD8+T细胞介导的强的细胞毒性免疫应答是期望的。可以通过包括免疫刺激剂来操纵针对疫苗抗原生成的免疫应答的类型，该免疫刺激剂激活在免疫细胞——其可以通过生成细胞因子和趋化因子起始这些应答——上发现的特定受体。基于铝的佐剂(共同称为alum)在当前许可的人和兽医疫苗中是最常见的(Gupta1998，Wilson-Welder,Torresetal.2009)。通过混合抗原与铝盐比如氢氧化铝或磷酸铝制备alum疫苗(Gupta1998，Stills2005)。在注射之后，alum形成抗原的短期贮存(Gupta,Changetal.1996)并且通过巨噬细胞促进疫苗的吞噬(Heimlich,Regnieretal.1999，Rimaniol,Grasetal.2004)。alum佐剂还可以充当免疫刺激物，这是由于它们已经显示激活由先天免疫细胞表达的NLRP3炎性体(Kang和Locksley2009，He,Zouetal.2015)。通过在免疫位点处引起坏死、通过募集免疫细胞加强炎性应答，alum还间接地激活多种危险感测受体(Kool,Soullieetal.2008)。alum佐剂倾向于诱导以IL-4产生、IgG1与IgE抗体和嗜曙红细胞激活为特征的2型免疫应答(Wilson-Welder,Torresetal.2009)。乳液-制剂疫苗是基于铝的疫苗的替代物。通过使用油比如弗氏不完全佐剂(IFA)或MontanideTMISA51VG乳化溶解在水性缓冲液中的抗原来制备这些制剂。乳液制剂还形成短期贮存以促进通过先天免疫细胞的疫苗吞噬并且还导致2型免疫应答(Leenaars,Koedametal.1998)。在乳液中使用的油可以赋予独特的免疫刺激并且已经显示导致比alum辅助的疫苗更强的免疫应答(DeGregorio,Capronietal.2013)。然而，由于抗原对免疫系统的无效呈递，乳液制剂可能导致T细胞耐受性(Aichele,Brduscha-Riemetal.1995，Hailemichael,Daietal.2013)。乳液制剂还受实际考虑限制，比如它们可能制备麻烦、必需储存在2-8℃下和具有有限的保存期限(Koh,Higginsetal.2006，Kumru,Joshietal.2014)。另外，乳液制剂与毒性和反应原性相关，其已经排除其批准用于人用途(Graham,McElrathetal.2010)。因为递送系统型佐剂和/或免疫刺激剂型佐剂之间和之中的相互作用或关联可能具有不可预测的效果，并且可能通常发生拮抗或无变应性而非协同，所以发现最佳的辅助系统是困难的。对如下辅助系统和疫苗组合物的研发存在需要：其用于针对各种抗原生成强的体液免疫应答和细胞介导的免疫应答。在本公开内容中，申请人描述了用于增强抗原特异性免疫原性的新型辅助系统和疫苗组合物。
技术实现思路
在实施方式中，本公开内容涉及辅助系统，其包括：(a)聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂；(b)基于脂质的佐剂；(c)两亲化合物；和(d)疏水运载体。在另一个实施方式中，本公开内容涉及组合物，其包括：(a)抗原；(b)聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂；(c)基于脂质的佐剂；(d)两亲化合物；和(e)疏水运载体。如本文描述的，组合物是无水的或基本上不含水。在本文描述的辅助系统和组合物的一些实施方式中，基于脂质的佐剂包括至少一个棕榈酸部分，比如例如，如本文描述的棕榈酸佐剂。在具体的实施方式中，基于脂质的佐剂是Pam-3-Cys-Ser-(Lys)4(Pam3CSK4；SEQIDNO:1)。在本文描述的辅助系统和组合物的一些实施方式中，聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂是近似分子量为989486道尔顿的聚肌胞苷酸的传统形式，其包含变化链长度的聚肌苷酸和聚胞苷酸的混合物(ThermoScientific；USA)。在本文描述的辅助系统和组合物的一些实施方式中，两亲化合物是磷脂，比如例如DOPC或S100卵磷脂，其在实施方式中与胆固醇一起使用。在本文描述的辅助系统和组合物的一些实施方式中，疏水运载体是油，比如例如基于矿物油的运载体(例如ISA51)。在另一个实施方式中，本公开内容涉及包括给需要其的对象施用如本文描述的组合物的方法，其用于诱导所述对象中对所述抗原的抗体应答和/或细胞介导的免疫应答。在另一个实施方式中，本公开内容涉及用于治疗和/或预防由细菌、病毒、真菌、寄生虫、变应原、或表达抗原的肿瘤细胞引起的疾病的方法，所述方法包括给对象施用如本文描述的组合物。在另一个实施方式中，本公开内容涉及治疗和/或预防神经变性疾病的方法，其中神经变性疾病与抗原的表达相关，所述方法包括给对象施用如本文描述的组合物。在另一个实施方式中，本公开内容涉及用于使用抗体中和毒素、病毒、细菌或变应原的方法，所述方法包括给对象施用如本文描述的组合物。在另一个实施方式中，本公开内容涉及试剂盒，其在一个或多个单独的容器中包括聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂；基于脂质的佐剂；两亲化合物；和疏水运载体。在查阅下列描述连同所附权利要求和附图之后，本公开内容的其它方面、实施方式和特征将对本领域技术人员将变得明显。附图说明在附图中，其仅借助实例图解了本专利技术的实施方式：图1图解了响应于以基于油的无水疫苗——其不包含佐剂，包含聚肌胞苷酸、Pam3CSK4(SEQIDNO:1)或聚肌胞苷酸和Pam3CSK4(SEQIDNO:1)的组合——接种疫苗的抗体效价和功能活性。以在基于油的无水疫苗——其不包含佐剂(组1)，包含单独的聚肌胞苷酸(组2)、单独的Pam3CSK4(SEQIDNO:1)(组3)或聚肌胞苷酸和Pam3CSK4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.辅助系统，其包括：(a)聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂；(b)基于脂质的佐剂；(c)两亲化合物；和(d)疏水运载体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.18 US 62/256,8751.辅助系统，其包括：(a)聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂；(b)基于脂质的佐剂；(c)两亲化合物；和(d)疏水运载体。2.组合物，其包括权利要求1所述的辅助系统和抗原，其中所述组合物无水或基本上不含水。3.权利要求2所述的组合物，其中基本上不含水的组合物包括以重量/重量计所述运载体的总重量的小于大约10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％的水。4.权利要求2或3所述的组合物，其中所述基于脂质的佐剂：i)包括一种或多种脂肽，其中所述脂肽中的至少一种包括作为所述脂质组分的棕榈酸；ii)包括二棕榈酰-S-丙三基-半胱氨酸(PAM2Cys)或三棕榈酰-S-丙三基-半胱氨酸(PAM3Cys)；和/或iii)是PAM2Cys-Ser-(Lys)4(SEQIDNO:1)或PAM3Cys-Ser-(Lys)4(SEQIDNO:1)。5.权利要求2至4中任一项所述的组合物，其中所述聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂：i)包括RNA、DNA或其组合；ii)是双链的并且每条链是肌苷酸或胞苷酸残基的均聚物或是双链的并且每条链是包括肌苷酸和胞苷酸残基二者的杂聚物；和/或ii)是包括均聚物聚肌胞苷酸多核苷酸和杂聚物聚肌胞苷酸多核苷酸二者的混合物。6.权利要求2至5中任一项所述的组合物，其中所述两亲化合物是二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、包括DOPC的磷脂的混合物、卵磷脂、或包括卵磷脂的磷脂的混合物。7.权利要求6所述的组合物，其中所述脂质围绕所述抗原形成闭合的囊泡结构，其中所述闭合的囊泡结构是单层囊泡结构或双层囊泡结构。8.权利要求2至7中任一项所述的组合物，其中所述运载体是油或油的混合物，所述油选自植物油、坚果油、和矿物油；或所述运载体是矿物油溶液中的二缩甘露醇油酸酯。9.权利要求2至8中任一项所述的组合物，其中所述基于脂质的佐剂是PAM3Cys-Ser-(Lys)4(SEQIDNO:1)；所述聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂是不同链长度的聚肌苷酸和聚胞苷酸的混合物，所述混合物包括989,486道尔顿的近似分子量；并且所述运载体是ISA51VG。10.权利要求2至9中任一项所述的组合物，其中所述抗原是多肽；编码多肽的多核苷酸；碳水化合物；微生物或其部分；或毒素。11.权利要求10所述的组合物，其中所述抗原源自病毒，源自细菌，源自原生动物，或源自膜表面结合癌症抗原。12.权利要求11所述的组合物，其中所述存活素抗原是：i)肽抗原，其包括来自所述存活素蛋白的氨基酸序列(SEQIDNO:69)或其修饰变体；或编码所述肽抗原的核酸分子；ii)肽抗原，其包括选自FEELTLGEF(SEQIDNO:70)；FTELTLGEF(SEQIDNO:71)；LTLGEFLKL(SEQIDNO:72)；LMLGEFLKL(SEQIDNO:73)；RISTFKNWPF(SEQIDNO:74)；RISTFKNWPK(SEQIDNO:75)；STFKNWPFL(SEQIDNO:76)；或LPPAWQPFL(SEQIDNO:77)，或其任意组合的氨基酸序列；或编码所述肽抗原的核酸分子；或iii)包括氨基酸序列：FTELTLGEF(SEQIDNO:71)；LMLGEFLKL(SEQIDNO:73)；RISTFKNWPK(SEQIDNO:75)；STFKNWPFL(SEQIDNO:76)；和LPPAWQPFL(SEQIDNO:77)的五种肽抗原的混合物。13.权利要求2至12中任一项所述的组合物，其中所述抗原包括至少一种B细胞表位、至少一种CTL表位或其组合。14.权利要求2至13中任一项所述的组合物，进一步包括辅助性T表位。15.权利要求14所述的组合物，其中所述辅助性T表位是包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO:79)的PADRE；包括氨基酸序列FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE(SEQIDNO:80)的破伤风类毒素肽F21E；或包括氨基酸序列AQYIKANSKFIGITEL(SEQIDNO:78)的修饰的破伤风类毒素肽A16L；其中所述辅助性T表位被任选地缀合或融合至所述抗原。16.权利要求2至15中任一项所述的组合物，其中所述聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂是Toll样受体3(TLR3)激动剂并且所述基于脂质的佐剂是所述TLR1/2异源二聚体的激动剂。17.权利要求2至16中任一项所述的组合物，其能够以单一剂量诱导抗体免疫应答和/或细胞介导的免疫应答。18.权利要求17所述的组合物，其包括低的每单位剂量的量的所述聚肌胞苷酸多核苷酸佐剂和所述基于脂质的佐剂，其中：i)与包括较高的每单位剂量的量的所述聚肌胞苷酸多核苷酸佐...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·M·韦尔，L·D·麦克唐纳，R·利韦斯基，M·曼苏尔，
申请(专利权)人：免疫疫苗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA