人轮状病毒G9P[6]毒株和作为疫苗的用途制造技术

本发明专利技术公开了减毒的G9P[6]轮状病毒。在一些实施方案中，公开了包含减毒的G9P[6]轮状病毒或其组分的药物组合物。这些组合物可用于诱导针对轮状病毒的免疫反应，例如保护性免疫反应。所述组合物可用作疫苗，例如用于儿童(婴儿)，例如用于初免‑加强免疫策略中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人轮状病毒G9P[6]毒株和作为疫苗的用途相关专利申请的交叉引用本申请要求于2015年10月5日提交的美国临时专利申请62/237,452的优先权，所述临时申请的全部内容以引用的方式纳入本文中。
本专利技术涉及病毒学领域，具体地涉及使用减毒的G9P[6]轮状病毒诱导针对轮状病毒感染的免疫反应的方法。
技术介绍
轮状病毒是儿童腹泻的最常见病因，几乎世界上每一个儿童在5岁前都被轮状病毒感染过。所述病毒被认为是通过粪-口途径的高度传染性的，并且其影响没有特别的社会经济或地理群的差异。尽管大部分儿童能够挺过感染，大量的儿童患病程度严重，并且与该病毒相关的死亡数目是相当大的。除了对人类健康的影响，轮状病毒还感染动物，并且是家畜的病原体。A型轮状病毒是引起90％以上的人类轮状病毒肠胃炎。A型轮状病毒是呼肠孤病毒科(Reoviridae)的具有明显的轴辐式(hub-and-spoke)形态的二十面体病毒。轮状病毒颗粒包含围绕病毒基因组的三个蛋白层，所述基因组由11个双链RNA片段组成，每一个片段编码一种蛋白。有6种形成病毒颗粒的病毒蛋白(VP)，被称为VP1-7；以及6种非结构蛋白(NSP)，被称为NSP1-NSP6。基于病毒衣壳蛋白所特有的特性通过组、亚组和血清型对轮状病毒进行分类。很多结构蛋白在引起宿主中的免疫反应中特别重要，因为这些蛋白存在于病毒颗粒的最外层表面。认为VP7和VP4在宿主免疫反应中起到重要作用。VP7和VP4结构蛋白的变体表征不同的A型轮状病毒血清型。具体地，人VP7的变体被鉴定为“G”血清型，至少包括G1、G2、G3、G4、G5、G6、G8、G9、Gl0、G11、G12、G13和G14。VP4结构蛋白的变体被鉴定为“P”血清型，至少包括P1A、P1B、P2A、P3、P4、P5、P6和P8。因为完整的轮状病毒由VP7蛋白和VP4蛋白表征，根据具体的病毒中所含有的这两个蛋白的变体的类型对各个病毒血清型进行命名。A型轮状病毒的G1血清型是最常见的与全世界人类疾病相关的血清型。常见的A型轮状病毒包含VP7和VP4的G1和P[8]变体，并且被称为G1P[8]。已经开发出很多使用A型轮状病毒G1毒株的疫苗，目的在于宿主中产生针对A型轮状病毒G1毒株以及具有其他血清型的A型轮状病毒毒株的免疫。多种人轮状病毒类型逐渐被认为是导致全世界急性严重腹泻疾病的原因。这种多样性凸显了对能够产生针对多种毒株的免疫的强有力的疫苗的需要。是具有针对全世界儿童中的同型Wa样和异型DS-1样毒株的广谱交叉反应免疫和交叉保护的疫苗。但是，这种疫苗对某些地区的DS-1样毒株具有较低的功效。因此，对于针对常见类型和不太常见类型的人A型轮状病毒的疫苗有着持续的需要。
技术实现思路
本文提供了减毒的G9P[6]轮状病毒。在一些实施方案中，公开了药物组合物，其包括减毒的G9P[6]轮状病毒。任选地，所述药物组合物可包括佐剂和/或灭活的G1P[8]轮状病毒。在其他实施方案中，还公开了用于通过给予受试者包括减毒的G9P[6]轮状病毒的药物组合物来诱导受试者中的免疫反应的方法。在一些非限制性的实例中，所述药物组合物通过口服给药，并且不包括佐剂。在其他非限制性的实例中，所述药物组合物通过肠胃外给药，并且包括佐剂。任选地，所述G9P[6]轮状病毒是灭活的。任选地，所述药物组合物可包括灭活的G1P[8]轮状病毒。在一个具体的非限制性实例中，所述G1P[8]轮状病毒是CDC-9。所述G1P[8]轮状病毒可是减毒的和/或是灭活的。所述灭活的减毒轮状病毒也可被包括在药物组合物中以诱导针对其他病原体(例如，但不限于，白喉、破伤风、百日咳、b型流感嗜血杆菌、乙型肝炎(HBV)、脊髓灰质炎和/或肺炎球菌疾病)的反应。所述免疫反应可为保护性免疫反应。所述受试者可为儿童，例如小于5岁或1岁的人类儿童。所述方法可包括至少一次初免(prime)和加强免疫(boost)。在其他实施方案中，公开了分离的来自G9P[6]轮状病毒的核酸分子和分离的来自G9P[6]轮状病毒的多肽。这些分子可被包括在药物组合物中，并且可用于诱导免疫反应。从以下参照附图进行的对数个实施方案的详细描述，本专利技术的上述和其他特征和优点会变得更加清楚。附图说明图1示出了VP4和VP7序列与其他轮状病毒的关系。图2为示出了TLP纯化和RNA电泳型的数字图像。图3是示出了在病毒的减毒形式中发生的核苷酸和氨基酸序列改变的表格。图4是示出了CDC-6和GR10924(其为一种有毒力的G9P[6]轮状病毒)之间每一条核苷酸和蛋白序列的序列同一性的表格。序列表所列出的核酸和氨基酸序列是使用在37C.F.R.1.822中定义的核苷酸碱基的标准字母缩写和氨基酸的三字母编码显示。只显示每条核酸序列的一条链，但是应理解对提及所示链的任何提及均包括其互补链。所述序列表以ASCII文本文件(序列表，2016年9月20日，75,887个字节)提交，以引用的方式纳入本文。在所附序列表中:SEQIDNO:1是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP1多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:2是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP2多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:3是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP3多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:4是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP4多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:5是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP5多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:6是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP7多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:7是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP1多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:8是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP2多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:9是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP3多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:10是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP4多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:11是来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP5多肽的氨基酸序列：SEQIDNO:12是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP1多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:13是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP2多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:14是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP3多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:15是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP4多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:16是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP6多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:17是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的VP7多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:18是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP1多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:19是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP2多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:20是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP3多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:21是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP4多肽的示例性核酸序列：SEQIDNO:22是编码来自减毒的G9P[6]轮状病毒的NSP5多肽的示例性核酸序列：具体实施方式本文公开了减毒的G9P[6]轮状病毒，其可被包括在用于给予至本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的减毒的轮状病毒，其中所述轮状病毒为G9P[6]轮状病毒。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.05 US 62/237,4521.一种分离的减毒的轮状病毒，其中所述轮状病毒为G9P[6]轮状病毒。2.权利要求1的分离的减毒的轮状病毒，其包含：a)编码包含与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列至少99.8％相同的氨基酸序列的多肽(VP1)的核酸分子；b)编码包含SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的多肽(VP2)的核酸分子；c)编码包含与SEQIDNO:3所示的氨基酸序列至少99.6％相同的氨基酸序列的多肽(VP3)的核酸分子；d)编码包含与SEQIDNO:4所示的氨基酸序列至少99.1％相同的氨基酸序列的多肽(VP4)的核酸分子；e)编码包含SEQIDNO:5所示的氨基酸序列的多肽(VP6)的核酸分子；f)编码包含与SEQIDNO:6所示的氨基酸序列至少98.9％相同的氨基酸序列的多肽(VP7)的核酸分子；h)编码包含与SEQIDNO:7所示的氨基酸序列至少98.9％相同的氨基酸序列的多肽(NSP1)的核酸分子；i)编码包含SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的多肽(NSP2)的核酸分子；j)编码包含与SEQIDNO:9所示的氨基酸序列至少98.8％相同的氨基酸序列的多肽(NSP3)的核酸分子；k)编码包含SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的多肽(NSP4)的核酸分子；和l)编码包含与SEQIDNO:11所示的氨基酸序列至少99.6％相同的氨基酸序列的多肽(NSP5)的核酸分子。3.权利要求1或2的分离的减毒的轮状病毒，其包含以下中的至少一个：a)编码包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；b)编码包含SEQIDNO:4所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；c)编码包含SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；d)编码包含SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；和e)编码包含SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子。4.权利要求3的分离的减毒的轮状病毒，其包含以下中的所有：a)编码包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；b)编码包含SEQIDNO:4所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；c)编码包含SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的多肽的核酸；d)编码包含SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；和e)编码包含SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子。5.权利要求1-4中任一项的分离的减毒的轮状病毒，其中所述轮状病毒在体外宿主细胞中增殖时生长至滴度为107至108。6.权利要求2-5中任一项的分离的减毒的轮状病毒，其包含：a)编码包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；b)编码包含SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；c)编码包含SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；d)编码包含SEQIDNO:4所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；e)编码包含SEQIDNO:5所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；f)编码包含SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；h)编码包含SEQIDNO:7所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；i)编码包含SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；j)编码包含SEQIDNO:9所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；k)编码包含SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子；和l)编码包含SEQIDNO:11所示的氨基酸序列的多肽的核酸分子。7.权利要求1或2的分离的减毒的轮状病毒，其包含：a)包含与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列至少99.8％相同的氨基酸序列的多肽；b)包含SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的多肽；c)包含与SEQIDNO:3所示的氨基酸序列至少99.6％相同的氨基酸序列的多肽；d)包含与SEQIDNO:4所示的氨基酸序列至少99.1％相同的氨基酸序列的多肽；e)包含SEQIDNO:5所示的氨基酸序列的多肽；f)包含与SEQIDNO:6所示的氨基酸序列至少98.9％相同的氨基酸序列的多肽；h)包含与SEQIDNO:7所示的氨基酸序列至少98.9％相同的氨基酸序列的多肽；i)包含SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的多肽；j)包含与SEQIDNO:9所示的氨基酸序列至少98.8％相同的氨基酸序列的多肽；k)包含SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的多肽；和l)包含与SEQIDNO:11所示的氨基酸序列至少99.6％相同的氨基酸序列的多肽。8.权利要求1-7中任一项的分离的减毒的轮状病毒，其包含：a)SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；b)SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；c)SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；d)SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；e)SEQIDNO:5所示的氨基酸序列；f)SEQIDNO:6所示的氨基酸序列；h)SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；i)SEQIDNO:8所示的氨基酸序列；j)SEQIDNO:9所示的氨基酸序列；k)SEQIDNO:10所示的氨基酸序列；和l)SEQIDNO:11所示的氨基酸序列。9.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-8中任一项的分离的减毒的轮状病毒以及可药...

【专利技术属性】
技术研发人员：江保明，王玉环，
申请(专利权)人：美国政府由卫生和人类服务部的部长所代表，
类型：发明
国别省市：美国,US