The invention discloses a method for enlarging the propagation of bacterial wilt phage. The non-toxic bacterial wilt strain RSsw326_2 is stored in a typical culture preservation center of China, and the preservation number is CCTCC NO.M 2018197. The non-toxic bacterial wilt pathogen in the present invention is a bacterial wilt pathogen isolated from naturally occurring tobacco plants. The mutant strain is obtained by subculture. After pathogenicity test, the bacterial wilt pathogen is non-toxic to tobacco seedlings when it loses pathogenicity. The bacterial wilt bacteriophage can be propagated by the non-toxic bacterial wilt pathogen, and the bacterial wilt bacteriophage with high titer can be obtained. Bacteriophage. This method is expected to be used as a carrier for large-scale phage multiplication in the development of bacterial wilt phage biopesticides, and avoid harming the control object again because of the toxicity of host strains.
【技术实现步骤摘要】
一种青枯菌噬菌体扩大繁殖的方法
本专利技术涉及生物
和微生物制品领域,具体涉及一种青枯菌噬菌体扩大繁殖的方法。
技术介绍
噬菌体(phage)是侵袭细菌的病毒,也是赋予宿主菌生物学性状的遗传物质。噬菌体能够杀死细菌的现象在1915年由弗德里克·特沃特(FrederickW.Twort)发现,因而利用噬菌体控制细菌的研究已有近百年。噬菌体必须在活菌内寄生,有严格的宿主特异性,其取决于噬菌体吸附器官和受体菌表面受体的分子结构和互补性。噬菌体是病毒中最为普遍和分布最广的群体。通常在一些充满细菌群落的地方,如:泥土、动物的肠道里,都可以找到噬菌体。随着分子生物学技术的发展,噬菌体已经广泛用于疾病诊断、水处理等多个领域。由于噬菌体可以将基因插入宿主DNA内的特性,使得它还成为了重要的分子和遗传学研究工具。利用噬菌体,可以设计很多精巧的实验。然而在上述过程中,都需要对噬菌体进行扩大生产,现有技术的植物病原细菌的噬菌体通常是采用其宿主菌进行繁殖,而宿主菌是植物的病原菌,但是在进行噬菌体扩繁时,宿主细菌未能全部被噬菌体裂解,在田间应用时易造成对防治对象的再次为害,因而严重制约了对噬菌体应用的发展。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种青枯菌噬菌体扩大繁殖的方法。为实现上述目的,本专利技术采用如下技术方案:所述方法包括如下步骤:(1)将所述青枯菌接种于CPG培养基平板上,倒置,28℃培养24-48h,使其长出单菌落;(2)挑取无毒青枯菌单菌落于装有3mLNB培养基的三角烧瓶中,28℃,180rpm振荡培养至浓度为108CFU/mL;(3)以体积比1%的接种浓度转接到 ...
【技术保护点】
1.一种青枯菌噬菌体扩大繁殖的方法,其特征在于:所述方法包括如下步骤:(1)将青枯菌接种于CPG培养基平板上,倒置,28℃培养24‑48h,使其长出单菌落;(2) 挑取无毒青枯菌单菌落于装有3mL NB培养基的三角烧瓶中,28℃、180rpm振荡培养至浓度为108 CFU /mL;(3)以体积比1%的接种浓度转接到100mL新鲜的NB培养基中,28℃,180rpm振荡培养至浓度为108 CFU /mL;(4) 加入1mL噬菌体原液,混匀,静置15min,28℃,130rpm振荡过夜培养;所得共培液即为用无毒菌株培养好的噬菌体。
【技术特征摘要】
1.一种青枯菌噬菌体扩大繁殖的方法,其特征在于:所述方法包括如下步骤:(1)将青枯菌接种于CPG培养基平板上,倒置,28℃培养24-48h,使其长出单菌落;(2)挑取无毒青枯菌单菌落于装有3mLNB培养基的三角烧瓶中,28℃、180rpm振荡培养至浓度为108CFU/mL;(3)以体积比1%的接种浓度转接到100mL新鲜的NB培养基中,28℃,180rpm振荡培养至浓度为108CFU/mL;(4)加入1mL噬菌体原液,混匀,静置15min,28℃,1...
【专利技术属性】
技术研发人员:蔡学清,林志坚,夏志辉,胡方平,
申请(专利权)人:福建农林大学,
类型:发明
国别省市:福建,35
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