胰内分泌细胞的制造方法和转分化剂技术

本发明专利技术提供一种胰内分泌细胞的制造方法，该方法包括将下述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物导入体细胞内的导入工序：(A)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物；(B)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和Pdx1基因或其基因产物；(C)GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物；以及(D)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】胰内分泌细胞的制造方法和转分化剂
本专利技术涉及一种由体细胞制造胰内分泌细胞的胰内分泌细胞的制造方法、以及将体细胞转分化成胰内分泌细胞的转分化剂。
技术介绍
胰内分泌细胞被期待用作糖尿病的再生医疗材料、以及用于筛选糖尿病治疗药的材料等。从上述再生医疗的角度考虑，例如，期待着对胰岛素不足的I型糖尿病患者给予作为胰内分泌细胞之一的、产生胰岛素的β细胞。因此，强烈要求开发一种在体外大量制备胰内分泌细胞的方法。迄今为止，有人提出了利用胚胎干细胞(embryonicstemcell、以下有时称作“ES细胞”)或人工多能性干细胞(inducedpluripotentstemcell、以下有时称作“iPS细胞”)来制造β细胞的方法。然而，在上述方法中，需要在细胞培养用的培养基中加入各种参与成长分化的抑制剂等以调整培养环境，存在着繁琐的问题，另外，还存在着有时无法获得重现性的问题。另外，在上述方法中，由于还制造了β细胞以外的细胞，因此还存在着效率方面的问题。而且，到获得β细胞为止最少需要21天～30天，还存在着无法在短期内制造β细胞的问题。因此，现状是强烈要求及时提供一种胰内分泌细胞的制造方法，所述制造方法简便且容易重现、生产效率优异、并且能够在短期内制造胰内分泌细胞。此外，已知GLIS1(GLISfamilyzincfinger1)会改善iPS细胞的建立改善效率(例如参照专利文献1)。然而，GLIS1参与将体细胞直接转变成胰内分泌细胞而不经过干细胞一事还完全未知。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表2013－519371号公报
技术实现思路
技术问题本专利技术的课题在于：解决上述现有的诸多问题，达到以下目的。即，本专利技术的目的在于提供：一种胰内分泌细胞的制造方法，所述制造方法简便且容易重现、生产效率优异、并且能够在短期内制造胰内分泌细胞；以及将体细胞转分化成胰内分泌细胞的转分化剂。解决问题的方案用于解决上述课题的方法如下。即：＜1＞一种胰内分泌细胞的制造方法，其特征在于，包括下述的导入工序：将下述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物导入体细胞内。(A)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素(Neurogenin)3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。(B)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和Pdx1基因或其基因产物。(C)GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。(D)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。＜2＞一种转分化剂，该转分化剂将体细胞转分化成胰内分泌细胞，其特征在于：包含下述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物。(A)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。(B)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和Pdx1基因或其基因产物。(C)GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。(D)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。专利技术效果根据本专利技术，可以解决上述现有的诸多问题，达到上述目的，可以提供：一种胰内分泌细胞的制造方法，该制造方法简便且容易重现、生产效率优异、并且可以在短期内制造胰内分泌细胞；以及将体细胞转分化成胰内分泌细胞的转分化剂。附图说明图1A是显示试验例1－1中产生DsRed2阳性胰岛素的细胞数的测定结果的图。图1B是显示试验例1－1中胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。图1C是显示试验例1－2中胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。图2A是显示试验例2－1中产生DsRed2阳性胰岛素的细胞数的测定结果的图。图2B是显示试验例2－1中胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。图2C是显示试验例2－2中胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。图3A是显示试验例3－1中产生DsRed2阳性胰岛素的细胞数的测定结果的图。图3B是显示试验例3－1中胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。图3C是显示试验例3－2中胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。图4是显示试验例4的葡萄糖应答性胰岛素分泌试验的结果的图。图5是显示试验例5的葡萄糖应答性胰岛素分泌试验的结果的图。图6是显示试验例6的胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。图7是显示试验例7的胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。图8是显示试验例8的胰岛素基因的相对表达量的测定结果的图。具体实施方式(胰内分泌细胞的制造方法)本专利技术的胰内分泌细胞的制造方法至少包括导入工序，根据需要还包括其他工序。＜导入工序＞上述导入工序是指将下述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物导入体细胞内。(A)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物(以下有时称作“基因或其基因产物(A)”)。(B)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和Pdx1基因或其基因产物(以下有时称作“基因或其基因产物(B)”)。(C)GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物(以下有时称作“基因或其基因产物(C)”)。(D)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物(以下有时称作“基因或其基因产物(D)”)。上述基因产物是指由上述基因转录的mRNA、由上述mRNA翻译的蛋白。＜＜基因或其基因产物＞＞－方案－通过上述导入工序导入体细胞内的基因或其基因产物的方案只要包括上述基因或其基因产物(A)、上述基因或其基因产物(B)、上述基因或其基因产物(C)和上述基因或其基因产物(D)中的任一种即可，没有特别限定，可以根据目的而适当选择，在胰内分泌细胞的生产效率优异方面，优选包含上述基因或其基因产物(A)、上述基因或其基因产物(B)和上述基因或其基因产物(D)中的任一种的方案，更优选包含上述基因或其基因产物(A)和上述基因或其基因产物(D)中的任一种的方案。通过上述导入工序导入体细胞内的基因或其基因产物可以只是上述基因或其基因产物(A)、上述基因或其基因产物(B本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胰内分泌细胞的制造方法，其特征在于，包括导入工序：将下述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物导入体细胞内，(A)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物；(B)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和Pdx1基因或其基因产物；(C)GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物；(D)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.29 JP 2015-2125631.一种胰内分泌细胞的制造方法，其特征在于，包括导入工序：将下述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物导入体细胞内，(A)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物；(B)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和Pdx1基因或其基因产物；(C)GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物；(D)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。2.根据权利要求1所述的胰内分泌细胞的制造方法，其中，通过所述导入工序导入体细胞内的所述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物为：(A)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。3.根据权利要求1所述的胰内分泌细胞的制造方法，其中，通过所述导入工序导入体细胞内的所述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物为：(B)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和Pdx1基因或其基因产物。4.根据权利要求1所述的胰内分泌细胞的制造方法，其中，通过所述导入工序导入体细胞内的所述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物为：(C)GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物、Pdx1基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。5.根据权利要求1所述的胰内分泌细胞的制造方法，其中，通过所述导入工序导入体细胞内的所述(A)～(D)中的任一种基因或其基因产物为：(D)与序列号:1和序列号:2中的任一个所表示的碱基序列具有85％以上的序列同源性的突变GLIS1基因或其基因产物、神经原素3基因或其基因产物和MafA基因或其基因产物。6.根据权利要求1～5中任一项所述的胰内分泌细胞的制造...

【专利技术属性】
技术研发人员：松本征仁，岡崎康司，菅原泉，
申请(专利权)人：学校法人顺天堂，
类型：发明
国别省市：日本,JP