The invention provides a method for regulating cell pathway by phytohormone GA and small molecular substance PAC, and realizes the regulation switch of signal pathway in human cells. GA receptor proteins GID1 and GAI in Arabidopsis thaliana were constructed on human cell expression vectors. Then they were transfected into HEK293T cells together. GA was added into HEK293T cells to induce the interaction between the two proteins. When PAC was added, the degree of interaction would be weakened. In this way, the key proteins in the human cell signaling pathway are fused with these two receptor proteins, and the two receptor proteins interact with each other under the induction of GA, resulting in the fusion signal pathway is also induced by GA. The invention selects a key protein LRP6 on the human Wnt pathway. After fusion expression of GA receptor and LRP6, LRP6 aggregates under GA induction, which promotes the production of beta-catenin, opens up intracellular signaling pathways, and when PAC is added, the production of beta-catenin decreases and the cellular pathway closes.
【技术实现步骤摘要】
一种利用植物激素GA及小分子物质PAC调节细胞通路的方法
本专利技术涉及生物方法专利
,具体的说,是一种利用植物激素GA以及小分子物质PAC调节细胞通路的方法。
技术介绍
光遗传学是一种将光控技术与遗传学相结合以进行细胞生物学研究的新技术,即将光敏感的离子通道蛋白表达于可兴奋的靶细胞或靶器官上,利用相应波长的光照激活光敏感通道以实现对细胞、组织、器官及动物生理功能的精细调控,到目前为止,许多光受体被改良,用于融合信号通路上的关键蛋白,来调控和控制生物体内的众多通路,如受体酪氨酸激酶Ras-MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路和Wnt信号通路。在基因水平上,研究者利用CRY2-CIB1、FKF1-GI、UVR8-COP1和LOV蛋白等元件来调控哺乳动物细胞中特定基因的转录表达。有研究将拟南芥蓝光受体CRY2与Wnt信号通路内的LRP6蛋白融合表达,实验证明,蓝光诱导下CRY2的聚集同样使融合表达的LRP6发生聚集作用。从而调控了下游β-catenin信号通路。麻省理工大学的张峰实验室利用免疫抑制因子雷帕霉素(Rapamycin)控制其受体蛋白并与dCas9构成了一个转录激活系统。张峰将受体蛋白FKBP与dCas9的C端以及转录激活子VP64融合表达;FRB与dCas9的N端融合表达。将这两个载体以及sgRNA共同转入细胞内,雷帕霉素处理后,靶基因的转录被激活。然而,此方法和光遗传学都有一定限制。雷帕霉素是免疫抑制子,对免疫系统有一定伤害;光遗传学的系统不适合于细胞内的光信号通路的调控。受到光遗传学(optogenetics)中利用光受体进而调控相 ...
【技术保护点】
1.一种利用植物激素GA及小分子物质PAC调节细胞通路的方法,其特征在于:采用以下引物:GID1‑F:GCGTGGTACCTCTAGAATGGCTGCGAGCGATGAAGT,GID1‑R:GAAGCGGCCGCCCGGGTTAACATTCCGCGTTTACAA;GID1‑F:GCGTGGTACCTCTAGAATGGCTGCGAGCGATGAAGT,GID1‑LRP6C‑R:CCCGAGCCACCGCCGGAACCGCCACCTTAACATTCCGCGTTTACAA;LRP6C‑F:GGCGGTGGCTCGGGAGGTGGCTCAAGGATGTTGTGTCCACGTAT,LRP6C‑R:GAAGCGGCCGCCCGGGTCAGGAGGAGTCTGTACAGG;GAI‑F:GCGTGGTACCTCTAGAATGAAGAGAGATCATCATCA,GAI‑R:GAAGCGGCCGCCCGGGATTGGTGGAGAGTTTCCAAG;GAI‑F:GCGTGGTACCTCTAGAATGAAGAGAGATCATCATCA,GAI‑LRP6C‑R:CCCGAGCCACCGCCGGAACCGCCAC ...
【技术特征摘要】
1.一种利用植物激素GA及小分子物质PAC调节细胞通路的方法,其特征在于:采用以下引物:GID1-F:GCGTGGTACCTCTAGAATGGCTGCGAGCGATGAAGT,GID1-R:GAAGCGGCCGCCCGGGTTAACATTCCGCGTTTACAA;GID1-F:GCGTGGTACCTCTAGAATGGCTGCGAGCGATGAAGT,GID1-LRP6C-R:CCCGAGCCACCGCCGGAACCGCCACCTTAACATTCCGCGTTTACAA;LRP6C-F:GGCGGTGGCTCGGGAGGTGGCTCAAGGATGTTGTGTCCACGTAT,LRP6C-R:GAAGCGGCCGCCCGGGTCAGGAGGAGTCTGTACAGG;GAI-F:GCGTGGTACCTCTAGAATGAAGAGAGATCATCATCA,GAI-R:GAAGCGGCCGCCCGGGATTGGTGGAGAGTTTCCAAG;GAI-F:GCGTGGTACCTCTAGAATGAAGAGAGATCATCATCA,GAI-LRP6C-R:CCCGAGCCACCGCCGGAACCGCCACCATTGGTGGAGAGTTTCCAAG;LRP6C-F:GGCGGTGGCTCGGGAGGTGGCTCAAGGATGTTGTGTCCACGTAT,LRP6C-R:GAAGCGGCCGCCCGGGTCAGGAGGAGTCTGTACAGG。2.根据权利要求1所述的一种利用植物激素GA及小分子物质PAC调节细胞通路的方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)载体设计以及构建:首先利用权利要求1所述的引物,以拟南芥和HEK293T细胞反转录的cDNA为模板,利用pcr技术将...
【专利技术属性】
技术研发人员:左泽乘,张峻川,莫伟亮,张力,肖勇,石翔,张宝昌,张文礼,李苏迪,
申请(专利权)人:吉林大学,
类型:发明
国别省市:吉林,22
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