The present invention relates to a preparation method and application of single cell selective labeling beads, i.e. labeling the fragmented single cell mRNA by flow cytometry through a special labeling bead with fluorescent and special base sequences, thus making the sorting work required for single cell sequencing more difficult. Simple and efficient, and effectively solve the current single cell sequencing difficulties in sorting labels difficult technical problems, while suitable for large-scale single cell sequencing experiments.
【技术实现步骤摘要】
一种单细胞分选用标签珠的制备方法与应用
本专利技术涉及材料科学和生物化学领域，特别是一种单细胞分选用标签珠的制备方法与应用。
技术介绍
基因测序技术是一种对生物体内基因的排列序列进行检测的技术。自从上世纪90年代初，人类便开始涉足“人类基因组计划”，通过对人体内基因不同的碱基排序进行检测得到一长串序列，再通过生物信息学技术对排序进行分析，得到有意义的信息，最终帮助人们进行诊断、科研、疾病预测等多种重要功能。基因测序技术也如同其他技术一样在日新月异的向着更快、更廉价、更精确的方向发展。随着测序技术的发展及测序成本的大幅度下降，破译来自单细胞的30亿碱基的基因组并逐个细胞比较序列正在变为现实，即是将生物实验的精确尺度推向单细胞级别，而非传统的用含有上百万细胞的组织进行实验。目前，单细胞的研究已经在蛋白质组学、显微影像学等领域取得了初步的成果，研究发现单细胞的反应模式并非传统通过大块组织研究得到的“线性结果”，而是非0即1的数字化的结果。特别是在肿瘤研究领域，单细胞研究已逐渐发展为研究的重点领域。虽然测序仪器的技术进步使得单细胞测序变为可能，但是单细胞研究仍旧面临着非常大的困难。即是如何标记单个细胞以及单个细胞中的各条mRNA序列。目前通用的方法是将单个细胞通过流式细胞仪分选到96孔板的单个孔中，再通过聚合酶链反应技术将特异序列的引物加在基因序列上，通过横竖排的多种序列来进行单细胞的定位，再进行测序。但是通过横竖排不同的序列来定位细胞的技术在加样过程中容易交叉污染导致可靠性不足，同时每次加样过程中都需要对横竖排分别加样导致耗时巨大效率低下，并且每横排和每竖排都需...
【技术保护点】
1.一种单细胞分选用标签珠的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：1）在珠子表面上合成荧光基团6‑FAM；2）将珠子等分成四份，分别在珠子表面合成单个的脱氧鸟苷酸、脱氧腺苷酸、脱氧胸苷酸和脱氧胞苷酸；合成完毕后，将四份珠子混合后再随机等分成四份，再次分别合成上述四种脱氧核苷酸，如此重复共合成12次；3）将四份珠子全部混合后加入含有脱氧鸟苷酸、脱氧腺苷酸、脱氧胸苷酸和脱氧胞苷酸的混合溶液中再次合成反应8次；4）将珠子加入脱氧胸苷酸溶液中再次合成反应30次，即获得所述单细胞分选用标签珠。
【技术特征摘要】
1.一种单细胞分选用标签珠的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：1）在珠子表面上合成荧光基团6-FAM；2）将珠子等分成四份，分别在珠子表面合成单个的脱氧鸟苷酸、脱氧腺苷酸、脱氧胸苷酸和脱氧胞苷酸；合成完毕后，将四份珠子混合后再随机等分成四份，再次分别合成上述四种脱氧核苷酸，如此重复共合成12次；3）将四份珠子全部混合后加入含有...
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