一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法，是将羊栖菜洗净、粉碎、过筛、回流脱脂、冷水浸提、醇沉、冷冻干燥、D101型大孔树脂脱色，再用三氟乙酸(TFA)水解即可获得分子量均一，纯度较高的低分子量羊栖菜多糖；本发明专利技术的反应条件温和，获取的低分子量多糖回收率较高；降解试剂容易从反应液中直接清除，产物分离纯化方便，并且操作简单适合工业化生产。

Preparation of a low molecular weight polysaccharide of Sargassum fusiform

The invention provides a preparation method of low molecular weight Sargassum Polysaccharide, which is to wash, smash, sift, reflux and desolation, cold water extraction, alcohol precipitation, freeze-drying, D101 macroporous resin decolorization, and then three FLUOROACETIC acid (TFA) hydrolysis can obtain molecular weight and high molecular weight and low molecular weight of Sargassum polysaccharides. The reaction condition of the invention is mild, the recovery rate of low molecular weight polysaccharide obtained is high, the degrading reagent is easily removed from the reaction liquid, the product is convenient to separate and purify, and the operation is simple and suitable for industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法。
技术介绍
羊栖菜多糖(Sargassumfusiformepolysaccharide)是一类含岩藻糖的硫酸多糖，具有抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等生物活性，因此具有很高的药用价值。然而羊栖菜多糖分子量分布范围较广，可从几千到上百万道尔顿，由于分子量大、分子体积大、水溶性差、构效关系不明确等缺点，极大地限制了羊栖菜多糖作为药物的开发。目前已知的多糖降解方法有化学法、物理法和酶解法等。近年来对于海藻来源的多糖降解已有许多研究，而对于羊栖菜多糖降解方面的研究尚未见有系统的文献报道。因此，研究羊栖菜多糖的降解方法，以及对多糖降解产物的分子量与生物活性之间关系的探究，为筛选低分子量羊栖菜多糖，开发新产品，发展羊栖菜产业等具有十分重要的意义。同时也可以为羊栖菜多糖的构效关系研究提供借鉴。
技术实现思路
本专利技术是针对现有技术的不足，为羊栖菜多糖的降解提供一种操作步骤简单，耗能耗材少的方法，并获得糖含量及纯度较高、分子量均一的寡糖产品。为低分子量羊栖菜多糖及寡糖的研究和开发提供一条新途径。本专利技术的一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法，包括以下步骤：(1)将洗净烘干的羊栖菜粉碎，过40目药筛；(2)将步骤(1)中得到的羊栖菜藻粉与95％的乙醇充分混合，羊栖菜藻粉∶95％乙醇＝1∶5～15(m∶v)，80℃回流脱脂，时间3h/次，至少重复三次；(3)将步骤(2)中得到的脱脂后的羊栖菜藻粉按照料液比为1∶20(m∶v)加入蒸馏水浸提，时间8h/次，至少重复三次；(4)将步骤(3)中得到的浸提液于50℃下减压浓缩至原体积的2％，加入4mol/L氯化钙至不再产生沉淀后4500r/min离心10min；(5)将步骤(4)中得到的上清液于50℃下减压浓缩至在烧瓶内开始挂壁后缓慢加入95％乙醇至乙醇浓度为80％，醇沉过液，醇沉获得的沉淀便是羊栖菜多糖；(6)将步骤(5)醇沉后得到的沉淀，复溶于水，进行减压冷冻干燥；(7)脱色处理：利用D101型大孔树脂作为层析柱(500mL)的填料，将羊栖菜多糖配制成5％的溶液，每次上样10mL，用0.5～2mol/L的氯化钠洗脱脱色；(8)低分子量羊栖菜多糖的制备：以脱色后羊栖菜多糖为原料，将多糖用0.5mol/L三氟乙酸(TFA)溶液配制成5mg/mL的终浓度，65℃水浴反应4～6h，反应结束立刻减压清除多余的三氟乙酸，并将多糖溶液放入截留量为1kDa透析袋中，流水透析，除去杂质后，便获得低分子量羊栖菜多糖溶液。上述方法中，所述的脱色处理是利用D101型号的大孔树脂作为层析柱(500mL)的填料，将羊栖菜多糖配成5％，每次上样10mL，收集回收0.5～2mol/L氯化钠洗脱的组分，并用超滤系统除去收集液里的盐分及杂质。上述方法中，所述的羊栖菜多糖溶液降解试剂为三氟乙酸(TFA)，并且是以0.5mol/L三氟乙酸将多糖配制成5mg/mL的最终浓度。上述方法中，所述水浴密闭条件，是将多糖溶液密封于50mL玻璃管内在65℃水浴反应4～6小时。本专利技术具有如下有益效果：本专利技术的反应条件温和，获取的低分子量羊栖菜多糖回收率较高；降解试剂容易从反应液中直接清除，产物分离纯化方便，并且操作简单，适合工业化生产。附图说明图1栖菜多糖、脱色后羊栖菜多糖经TSK-gelG-5000PWxl测定分子量。图2降解后获得的低分子量羊栖菜多糖超滤分级后经TSK-G5000PWxl测定分子量。图3温度、酸浓度、糖浓度对多糖降解的影响。图4不同实例获得的羊栖菜多糖经TSK-G3000PWxl测定分子量。具体实施方式下面结合附图和实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法。详细步骤如下：(1)将洗净烘干的羊栖菜粉碎，过40目药筛；(2)将步骤(1)中得到的羊栖菜藻粉与95％的乙醇充分混合，羊栖菜藻粉∶95％乙醇＝1∶5～15(m∶v)，80℃回流脱脂，时间3h/次，至少重复三次；(3)将步骤(2)中得到的脱脂后的羊栖菜藻粉按照料液比为1∶20(m∶v)加入蒸馏水浸提，时间8h/次，至少重复三次；(4)将步骤(3)中得到的浸提液于50℃下减压浓缩至原体积的2％，加入4mol/L氯化钙至不再产生沉淀后4500r/min离心10min；(5)将步骤(4)中得到的上清液于50℃下减压浓缩至在烧瓶内开始挂壁后缓慢加入95％乙醇至乙醇浓度为80％，醇沉过液，醇沉获得的沉淀便是羊栖菜多糖；(6)将步骤(5)醇沉后得到的沉淀，复溶于水，进行减压冷冻干燥；(7)脱色处理：利用D101型大孔树脂作为层析柱(500mL)的填料，将羊栖菜多糖配制成5％的溶液，每次上样10mL，用0.5～2mol/L的氯化钠洗脱脱色；(8)低分子量羊栖菜多糖的制备：以脱色后羊栖菜多糖为原料，将多糖用0.5mol/L三氟乙酸(TFA)溶液配制成5mg/mL的终浓度，65℃水浴反应4～6h，反应结束立刻减压清除多余的三氟乙酸，并将多糖溶液放入截留量为1kDa透析袋中，流水透析，除去杂质后，便获得低分子量羊栖菜多糖溶液。实施例1：(1)将羊栖菜多糖用去离子水配制成5％的糖溶液，上样10mL，利用D101型大孔树脂作为层析柱的填料并用0.5mol/L～2mol/L的氯化钠作为洗脱液进行脱色；(2)将已脱色的羊栖菜多糖用0.1mol/L三氟乙酸(TFA)溶液配制成1mg/mL的终浓度，55℃水浴分别反应1小时，反应结束后立即减压旋蒸清除三氟乙酸终止反应，将多糖溶液放入截留量为1kDa透析袋中，流水透析，除去杂质后，便获得低分子量羊栖菜多糖溶液；(3)将步骤(2)中的多糖溶液，冷冻真空干燥即可得到低分子量羊栖菜多糖产物；(4)本实施例制备的低分子量羊栖菜多糖得率为46.87％，糖含量76.92％，糖醛酸含量5.44％，蛋白含量2.32％，重均分子量Mw为68.34kDa。实施例2：(1)同实施例1；(2)将已脱色的羊栖菜多糖用0.1mol/L三氟乙酸(TFA)溶液配制成5mg/mL的终浓度，65℃水浴分别反应1小时，反应结束后立即减压旋蒸清除三氟乙酸终止反应，将多糖溶液放入截留量为1kDa透析袋中流水透析除去杂质后便获得低分子量羊栖菜多糖溶液；(3)将步骤(2)中的多糖溶液，冷冻真空干燥即可得到低分子量羊栖菜多糖产物；(4)本实施例制备的低分子量羊栖菜多糖得率为59.34％，糖含量78.47％，糖醛酸含量6.46％，蛋白含量3.14％，重均分子量Mw为69.34kDa。实施例3：(1)同实施例1；(2)将已脱色的羊栖菜多糖用0.5mol/L三氟乙酸(TFA)溶液配制成1mg/mL的终浓度，55℃水浴分别反应3小时，反应结束后立即减压旋蒸清除三氟乙酸终止反应，将多糖溶液放入截留量为1kDa透析袋中流水透析除去杂质后便获得低分子量羊栖菜多糖溶液；(3)将步骤(2)中的多糖溶液，冷冻真空干燥即可得到低分子量羊栖菜多糖产物；(4)本实施例制备的低分子量羊栖菜多糖得率为47.34％，糖含量79.64％，糖醛酸含量6.25％，蛋白含量2.10％，重均分子量Mw为54.34kDa。实施例4：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法，详细步骤如下：(1)将洗净烘干的羊栖菜粉碎，过40目药筛；(2)将步骤(1)中得到的羊栖菜藻粉与95％的乙醇充分混合，羊栖菜藻粉∶95％乙醇＝1∶5～15(m∶v)，80℃回流脱脂，时间3h/次，至少重复三次；(3)将步骤(2)中得到的脱脂后的羊栖菜藻粉按照料液比为1∶20(m∶v)加入蒸馏水浸提，时间8h/次，至少重复三次；(4)将步骤(3)中得到的浸提液于50℃下减压浓缩至原体积的2％，加入4mol/L氯化钙至不再产生沉淀后4500r/min离心10min；(5)将步骤(4)中得到的上清液于50℃下减压浓缩至在烧瓶内开始挂壁后缓慢加入95％乙醇至乙醇浓度为80％，醇沉过液，醇沉获得的沉淀便是羊栖菜多糖；(6)将步骤(5)醇沉后得到的沉淀，复溶于水，进行减压冷冻干燥；(7)脱色处理：利用D101型大孔树脂作为层析柱(500mL)的填料，将羊栖菜多糖配制成5％的溶液，每次上样10mL，用0.5～2mol/L的氯化钠洗脱脱色；(8)低分子量羊栖菜多糖的制备：以脱色后羊栖菜多糖为原料，将多糖用0.5mol/L三氟乙酸(TFA)溶液配制成5mg/mL的终浓度，65℃水浴反应4～6h，反应结束立刻减压清除多余的三氟乙酸，并将多糖溶液放入截留量为1kDa透析袋中，流水透析，除去杂质后，便获得低分子量羊栖菜多糖溶液。...

【技术特征摘要】
1.一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法，详细步骤如下：(1)将洗净烘干的羊栖菜粉碎，过40目药筛；(2)将步骤(1)中得到的羊栖菜藻粉与95％的乙醇充分混合，羊栖菜藻粉∶95％乙醇＝1∶5～15(m∶v)，80℃回流脱脂，时间3h/次，至少重复三次；(3)将步骤(2)中得到的脱脂后的羊栖菜藻粉按照料液比为1∶20(m∶v)加入蒸馏水浸提，时间8h/次，至少重复三次；(4)将步骤(3)中得到的浸提液于50℃下减压浓缩至原体积的2％，加入4mol/L氯化钙至不再产生沉淀后4500r/min离心10min；(5)将步骤(4)中得到的上清液于50℃下减压浓缩至在烧瓶内开始挂壁后缓慢加入95％乙醇至乙醇浓度为80％，醇沉过液，醇沉获得的沉淀便是羊栖菜多糖；(6)将步骤(5)醇沉后得到的沉淀，复溶于水，进行减压冷冻干燥；(7)脱色处理：利用D101型大孔树脂作为层析柱(500mL)的填料，将羊栖菜多糖配制成5％的溶液，每次上样10mL，用0.5～2mo...

【专利技术属性】
技术研发人员：张旭，肖保衡，刘剑，何丹，吴明江，于萍，佟海滨，
申请(专利权)人：温州大学苍南研究院，
类型：发明
国别省市：浙江,33