一种用于检测胃癌的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种用于检测胃癌的试剂盒，其包括胃癌相关的基因突变引物：正向引物如SEQ ID NO.3所示；反向引物如SEQ ID NO.4所示。本发明专利技术获得了胃癌发病相关突变位点谱和特异性标志物；通过突变位点序列的改变进行相关诊断试剂盒的研制和应用，可使得胃癌的诊断更加方便易行，为临床医生快速准确掌握患者病情，为临床治疗效果评价奠定基础，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。

A kit for the detection of gastric cancer

The present invention relates to a kit for detecting gastric cancer, which includes gene mutation primers associated with gastric cancer: positive primers such as SEQ ID NO.3, as shown by reverse primers such as SEQ ID NO.4. The invention has obtained the mutation site spectrum and specific markers related to the incidence of gastric cancer, and the development and application of the related diagnostic kit through the change of the mutation site sequence can make the diagnosis of gastric cancer more convenient and convenient. It provides a basis for the clinician to quickly and accurately grasp the patient's condition, and lays the foundation for the evaluation of the effect of the treatment of the bed. The discovery of new small molecule drug targets with potential therapeutic value will help.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测胃癌的试剂盒
本专利技术属于生物检测领域，涉及一种用于检测胃癌的试剂盒。
技术介绍
胃癌是最常见消化道恶性肿瘤肿瘤之一，是严重威胁人类健康生命的常见病、多发病。据统计，全世界每年约有90万人新诊断为胃癌，在我国，胃癌占消化道恶性肿瘤第1位，全身恶性肿瘤第3位。根据卫生部卫生信息统计中心2001年公布的资料，恶性肿瘤是我国城市居民的第1位死因，死亡率为135.59/10万04.9％)。其中，胃癌在恶性肿瘤死因中居第3位。胃癌的发生、发展同其他恶性肿瘤一样，属多因素、多步骤、多阶段和多基因改变过程。我国是胃癌的高发区，每年我国新发现40万胃癌患者，约占世界胃癌发病人数的42％左右。由于胃癌早期症状不明显，又缺乏特异的早期诊断方法【diMarioFetal.Non-invasivetestsingastricdiseases.DigLiverDis40:523-530(2008)】，现有的肿瘤标志物CEA、CA19-9、CA50、CA125在胃癌中的敏感度与特异性不高，对胃癌具较高特异性的CA72-4也通常在胃癌的III-IV期增高。胃癌的明确诊断通常在疾病的进展期才能做出，而此时病人的平均生存期只有7～9个月【WagnerADetal.Chemotherapyinadvancedgastriccancer：asystematicreviewandmeta-analysisbasedonaggregatedata.JClin0ncol.24:2903-2909(2006)】。近年来，某些基因的单核苷酸多态性(SNP)在恶性肿瘤易感性研究中倍受关注，研究认为亚甲基四氢叶酸还原酶基因(Methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR)的C677T位点(rsl801133),CYP2E1的rs2031920位点增加个体患胃癌的风险。因而寻找利于早期诊断和早期治疗的生物标志物一直是胃癌研究的热点，如IncRNAs。但随着肿瘤分子生物学研究的深入，科学家逐渐将目光转向环状RNA(circularRNA，circRNA)，因其在致癌与肿瘤抑制途径中显露出的潜在作用而成为肿瘤研究的新热点，circRNA是区别于传统线性RNA的RNA家族新成员，不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。最新研究表明，circRNA具有闭合环状结构，主要通过非典型可变剪切加工产生，广泛存在于各种生物细胞中，具有结构稳定，难以被RNA酶降解、表达丰度高、物种间保守性好，表达具有组织及时空特异性等特征，这些特点使得circRNA在疾病诊断与治疗新型方法的开发应用上具有广阔的前景。现有技术检测胃癌易感人群，采用杂交芯片法或玻璃板芯片法，以及利用taqman探针，该方法准确率低、假阴性和假阳性率较高，且不能批量检测；另一种直接测序法，虽准确率高，但其成本高、同样不能实现批量检测，因此现有方法均无法满足大规模基因筛选的要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有新的突变位点的ABCG2突变基因。本专利技术另一个目的是提供检测上述突变位点的特异性引物。本专利技术第三个目的是提供上述ABCG2突变基因及特异性引物在制备胃癌辅助诊断试剂盒中的应用。本专利技术第四个目的是提供一种胃癌辅助诊断试剂盒。专利技术人通过分离和研究胃癌患者及与其年龄匹配的健康对照外周血DNA中的突变，寻找与胃癌相关的高特异性的突变位点，并研制出可临床或人群应用的胃癌辅助诊断试剂盒，为胃癌的筛查和诊断提供支持。本专利技术的目的是通过下列技术方案实现的：一种用于胃癌辅助诊断的ABCG2突变基因，该突变基因与ABCG2正常基因序列相比具有在SEQIDNO：1序列的第349位点突变，突变后的序列如SEQIDNO：2。用于检测上述ABCG2基因的突变位点的特异性测序引物，其上游引物的序列如为SEQIDNO.所示，下游引物的序列如SEQIDNO.4所示。用于检测上述ABCG2基因的检测方法，该方法采用Sanger测序方法，使用PCR扩增引物，对ABCG2基因进行突变检测；其中PCR扩增引物的上游引物的序列如为SEQIDNO.3所示，下游引物的序列如SEQIDNO.4所示。上述的ABCG2突变基因在制备胃癌辅助诊断试剂盒中的应用。上述的引物在制备胃癌辅助诊断试剂盒中的应用。一种胃癌辅助诊断试剂盒，该试剂盒用于检测ABCG2基因是否具有SEQIDNO：2所示序列的突变。所述的试剂盒，该试剂盒含有上述引物(上游引物的序列如为SEQIDNO.3所示，下游引物的序列如SEQIDNO.4所示)，该试剂盒还可以含有PCR技术所需的常用试剂。本专利技术解决问题的技术方案包括筛选出人群中ABCG2与胃癌发生相关的新突变，提供位点的突变后碱基序列。诊断试剂盒制备方法采用Sanger测序对ABCG2基因的外显子编码区进行扫描和单个突变位点检测后确定胃癌病例与健康对照中基因型分布差异的突变位点，作为胃癌诊断的指标。最后筛选出的与胃癌发病有关的突变位点组成辅助诊断试剂盒。诊断试剂可以包括该突变位点的特异性引物以及Taq酶、dNTP等试剂。根据上述实验结果，本专利技术人发现了一个能用于胃癌辅助诊断的突变位点。具体而言，该突变位点的碱基序列的改变有助于胃癌的辅助诊断，为临床医生快速准确掌握患者的疾病状态和病情严重程度，及时采取更具个性化的防治方案提供支持。本专利技术有益效果：本专利技术提供的突变位点序列改变作为胃癌辅助判断的标志物的优越性在于：(1)突变位点是一种新型基因生物标志物，区别于传统生物标志物，稳定、微创、易于检测，将大大提高疾病诊断的敏感性和特异性，该类生物标志物的成功开发将为胃癌的诊断和治疗开创全新局面，为其他疾病生物标志物的研制提供借鉴。(2)本专利技术获得了胃癌发病相关突变位点谱和特异性标志物；通过突变位点序列的改变进行相关诊断试剂盒的研制和应用，可使得胃癌的诊断更加方便易行，为临床医生快速准确掌握患者病情，为临床治疗效果评价奠定基础，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。具体实施方式实施例1血液样本DNA提取1、材料专利技术人于2015年1月至2017年12月在北京307医院收集了大量的新发胃癌患者血标本，通过对样品资料的整理，专利技术人从中选择了30例符合下列标准的样本，同时选择10例年龄在25-55岁健康人作对照进行全外显子芯片检测，样本选择标准如下：(1)经病理学明确诊断的胃癌病例，其中有4例病人具有癌症家族史并分别标记为X1、X2、X3、X4；(2)采血前未接受过放疗或化疗、无既往肿瘤病史；(3)与病例年龄匹配的健康人对照并系统采集了这些样本的人口学资料和临床资料等情况。2、提取DNA具体步骤为：(1)向储存于2mL冻存管中的外周血加入溶血试剂(即裂解液，40份量配置方法如下：蔗糖219.72g、氯化镁2.02g和曲拉通X-100(amresco0694)20mL混合后，用Tris-HCl溶液定容至2000mL，下同)，颠倒混勾后完全转入。(2)去除红细胞：用溶血试剂将5mL离心管补至4mL，颠倒混勾，4000rpm离心10分钟，弃上清。向沉淀中加入4mL溶血试剂，再次颠倒混匀清洗一次，4000rpm离心10分钟，弃上清。(3)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括胃癌相关的基因突变引物：正向引物如SEQ ID NO.3所示；反向引物如SEQ ID NO.4所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括胃癌相关的基因突变引物：正向引物如SEQIDNO.3所示；反向引物如SEQIDNO.4所示。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：还包括DNA提取试剂、PCR试剂、阳性对照或阴性对照。如权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾超，
申请(专利权)人：顾超，
类型：发明
国别省市：北京,11