一组针对HER2基因的探针与相关试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一组针对HER2基因的探针与相关试剂盒。本发明专利技术提供的一组针对HER2基因的探针由ERBB2‑1至ERBB2‑20这20种探针组成；ERBB2‑1至ERBB2‑20的序列分别为序列表中序列1‑20，各探针均由荧光物质标记。实验证明，利用本发明专利技术的针对HER2基因的探针可成功标记细胞内或组织切片人类表皮生长因子受体‑2(HER2)基因，可以方便、准确、快速地标记肿瘤细胞或非肿瘤细胞中肿瘤标志基因HER2的表达与分布，可用于协助判断肿瘤的发生发展阶段与趋势；本发明专利技术的探针的稳定结合力及特异性高，非特异性背景信号低，具有很高的应用前景。

A set of probes and related kits for the HER2 gene

The invention discloses a set of probes and related kits for HER2 gene. A set of probes for the HER2 gene provided by the present invention is composed of 20 probes of ERBB2 1 to ERBB2 20; the sequence of ERBB2 1 to ERBB2 20 is respectively the sequence 1 of the sequence 20, and the probes are marked by the fluorescent substance. It has been proved that the HER2 gene probe can successfully label the human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) gene in cell or tissue section, and can easily, accurately and quickly mark the expression and distribution of tumor marker gene HER2 in tumor cells or non tumor cells, and can be used to help judge the occurrence of tumor. The probe has high stable binding force and specificity, low non-specific background signal and high application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一组针对HER2基因的探针与相关试剂盒
本专利技术涉及生物
中，一组针对HER2基因的探针与相关试剂盒。
技术介绍
人类表皮生长因子受体-2(HER2)基因又名ERBB2，c-erbB-2，表皮生长因子受体(EGFR)家族成员,属于原癌基因，位于17q21，编码相对分子质量185KD的跨膜糖蛋白(跨膜酪氨酸激酶受体)；研究表明：30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/过度表达(如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等)；HER2也是卵巢癌、乳腺癌等重要的预后判断因子，HER2阳性的卵巢癌、乳腺癌对常规的化疗和内分泌治疗反应差，肿瘤浸润性强，无病生存期短，预后差。HER2阳性(过表达或扩增)的乳腺癌，其临床特点和生物学行为也有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。因此，快速准确鉴别HER2阳性组织细胞对于临床病例的诊断及有效用药治疗有着重要意义。目前关于表皮生长因子受体-2(HER2)检测一般采用免疫组织化学(IHC)检测HER2蛋白过度表达，应用原位杂交法检测HER2基因扩增的水平。FDA已经批准的检测方式包括免疫组化(IHC)、荧光原位杂交方法(fluorescenceinsituhybridization，FISH)和显色原位杂交方法(chromogenicinsituhybridization，CISH)。此外还有亮视野原位杂交(brightfieldinsituhybridization)。由于CISH与FISH相比具有符合率高、观察便捷、标本可长期保存等特点，现已被国内外许多检测机构采用。但不同的检测方法、计算的准确性和试剂的选择都会影响HER2检测的结果。美国的一项调查结果显示，近1/4患者是因检测结果不准确而接受了不恰当的治疗。IHC检测HER2蛋白过度表达的错误率平均为18％，FISH检测HER2基因扩增的错误率在13％。但目前在制备探针过程中通常需要采用以Her2基因为模板，对Her2基因中的非重复序列进行聚合酶连反应，扩增产物通常在几百碱基对大小不等的DNA片段，产物经过荧光标记后获得Her2基因序列荧光原位杂交探针，用于Her2基因荧光原位杂交检测，在此过程中，片段的选择设计，PCR扩增效率，突变引入，荧光标记效率，非特异性结合，反应成本等问题都可能影响相关产品的使用与推广。另外较长的探针对于靶序列变异的识别能力又有所降低。特别对于仅是单个碱基(SNP)或少数碱基不同的两序列，克隆探针不能区分，往往杂交信号相当，易导致假阳性的出现。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种将若干带有荧光信号且带有修饰核酸序列用于标记细胞内人类表皮生长因子受体-2(HER2)基因核酸的成套探针。本专利技术提供的成套探针，包括名称为ERBB2-1、ERBB2-16和ERBB2-18的探针；所述ERBB2-1、所述ERBB2-16和所述ERBB2-18的序列分别为序列表中序列1、16和18。所述成套探针可仅由ERBB2-1、ERBB2-16和ERBB2-18组成。该成套探针中所述ERBB2-1、所述ERBB2-16和所述ERBB2-18的摩尔数可相等。上述探针中，所述成套探针还可由ERBB2-1、ERBB2-16和ERBB2-18以及名称分别为ERBB2-2、ERBB2-3、ERBB2-4、ERBB2-5、ERBB2-6、ERBB2-7、ERBB2-8、ERBB2-9、ERBB2-10、ERBB2-11、ERBB2-12、ERBB2-13、ERBB2-14、ERBB2-15、ERBB2-17、ERBB2-19和ERBB2-20这17种探针中的至少一种组成；所述ERBB2-2、所述ERBB2-3、所述ERBB2-4、所述ERBB2-5、所述ERBB2-6、所述ERBB2-7、所述ERBB2-8、所述ERBB2-9、所述ERBB2-10、所述ERBB2-11、所述ERBB2-12、所述ERBB2-13、所述ERBB2-14、所述ERBB2-15、所述ERBB2-17、所述ERBB2-19和所述ERBB2-20的序列分别为序列表中序列2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、17、19和20。上述成套探针中各探针均可由荧光物质标记。所述荧光物质具体可为CY3。上述成套探针中，所述ERBB2-1～所述ERBB2-20的摩尔数相等。在所述成套探针由20条探针组成时，该成套试剂中各探针的摩尔数均相等。在所述成套探针由4-20条探针组成时，该成套探针中所包含的探针间均满足由20条探针组成时的成套探针中相应探针间的摩尔比关系。所述成套探针中各探针可独立包装，也可包装在一起。本专利技术还提供了检测HER2的系统，所述系统包括所述成套探针。上述系统还可包括利用荧光原位杂交方法检测HER2所需的试剂和/或仪器。所述系统可为仅包括试剂的试剂盒。所述检测HER2可为检测组织、细胞或细胞培养液中的HER2基因。所述检测HER2可为检测HER2基因的表达和/或扩增。所述扩增是指目的基因中的拷贝数量或表达数量出现增加。本专利技术还提供了所述成套探针或所述系统在标记HER2基因的表达和/或分布中的应用。本专利技术还提供了所述成套探针或所述系统在制备标记HER2基因的表达和/或分布产品中的应用。本专利技术还提供了所述成套探针或所述系统在鉴定或辅助鉴定肿瘤发生和/或发展中的应用。本专利技术还提供了所述成套探针或所述系统在制备鉴定或辅助鉴定肿瘤发生和/或发展产品中的应用。所述肿瘤可为实体肿瘤。所述实体肿瘤可为乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌或前列腺癌。实验证明，利用本专利技术的成套探针可成功标记细胞内或组织切片人类表皮生长因子受体-2(HER2)基因，可以方便、准确、快速地标记肿瘤细胞或非肿瘤细胞中肿瘤标志基因HER2的表达与分布，可用于协助判断肿瘤的发生发展阶段与趋势。本专利技术的成套探针的稳定结合力及特异性高，非特异性背景信号低，具有很高的应用前景。附图说明图1为靶向ACTB基因的探针的结果。其中，ACTB表示靶向ACTB基因的探针的结果，DAPI表示DAPI对细胞核的染色，MERGE表示前两幅图的合并。图2为NC探针检测MCF7和293T的结果。图3为三种细胞中HER2基因的检测结果。HER2+17表示用成套探针2与靶向17号染色体着丝点区域的探针一同检测，在检测时所用每条探针的摩尔数均相同。图4为人乳腺癌组织石蜡切片的检测结果。图5为人乳腺癌组织冰冻切片的检测结果。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。所用试剂如下：20×SSC为由溶剂和溶质组成的无菌溶液，溶剂为DEPC水，溶质及其浓度分别为NaCl175.3g/L，一水合柠檬酸钠63g/L，pH7.0；2×SSC和0.4×SSC分别由无菌DEPC水将20×SSC稀释10倍和50倍得到，三种试剂均室温保存。杂交缓冲液为由溶剂和溶质组成的无菌溶液，溶剂为DEPC水，溶质及其浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.成套探针，包括名称为ERBB2‑1、ERBB2‑16和ERBB2‑18的探针；所述ERBB2‑1、所述ERBB2‑16和所述ERBB2‑18的序列分别为序列表中序列1、16和18。

【技术特征摘要】
1.成套探针，包括名称为ERBB2-1、ERBB2-16和ERBB2-18的探针；所述ERBB2-1、所述ERBB2-16和所述ERBB2-18的序列分别为序列表中序列1、16和18。2.根据权利要求1所述的成套探针，其特征在于：所述成套探针由ERBB2-1、ERBB2-16和ERBB2-18以及名称分别为ERBB2-2、ERBB2-3、ERBB2-4、ERBB2-5、ERBB2-6、ERBB2-7、ERBB2-8、ERBB2-9、ERBB2-10、ERBB2-11、ERBB2-12、ERBB2-13、ERBB2-14、ERBB2-15、ERBB2-17、ERBB2-19和ERBB2-20这17种探针中的至少一种组成；所述ERBB2-2、所述ERBB2-3、所述ERBB2-4、所述ERBB2-5、所述ERBB2-6、所述ERBB2-7、所述ERBB2-8、所述ERBB2-9、所述ERBB2-10、所述ERBB2-11、所述ERBB2-12、所述ERBB2-13、所述ERBB2-14、所述ERBB2-15、所述ERBB2-17、所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：董长贵，王婷飞，张佩琢，黄春晓，李琴，陈丹丹，
申请(专利权)人：苏州吉玛基因股份有限公司，上海吉玛制药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32