一种从乳制品中提取低分子肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种从乳制品中提取低分子肽的方法，其具体步骤为：向脱脂乳制品中加入蒸馏水、复合酶和酪氨酸，酶解，灭酶，离心上清液即为酶解液；将酶解液依次用超滤膜进行超滤，滤液冻干；将经过超滤处理的冷冻样品用双蒸水配制溶液，上柱，用乙醇溶液进行洗脱，洗脱液冷冻干燥，即得低分子肽。有益效果为：本发明专利技术低分子活性炭的提取方法简单可行，提取效率、得率和纯度高，制得的低分子肽的生物活性高、无苦味，具有乳制品香味、较好的酸碱稳定性和抗消化性，不易再被消化酶进一步消化酶解，能够直接被机体使用。

A method of extracting low molecular peptide from dairy products

The present invention discloses a method for extracting low molecular peptide from dairy products. The concrete steps are as follows: adding distilled water, compound enzyme and tyrosine to the skimmed dairy products, enzymolysis, enzyme elimination, and centrifuge supernatant are enzymatic hydrolysates; ultrafiltration, filtrate freeze-drying, and ultrafiltration of frozen samples by ultrafiltration membrane are carried out in turn. The product is made of double distilled water solution, the upper column is eluted by ethanol solution, and the eluent is freeze-dried. The beneficial effect is as follows: the extraction method of the low molecular activated carbon is simple and feasible, the extraction efficiency, the yield and the purity are high, the bioactivity of the low molecular peptide is high, the taste is no bitterness, the flavour of the dairy products, the good acid base stability and the anti digestibility, and it is not easy to be digested by the digestive enzyme again, and can be directly affected by the body. Use.

【技术实现步骤摘要】
一种从乳制品中提取低分子肽的方法
本专利技术涉及生物提取
，特别涉及一种从乳制品中提取低分子肽的方法。
技术介绍
源于蛋白质的低分子肽是一种多功能因子，组成结构包括几个氨基酸残基的短肽链的小肽以及寡肽（5～10个氨基酸）和多肽（11～50个氨基酸）；这类肽能直接被机体吸收利用，具有吸收效率高、免疫原性低等特点。此外，它们还在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用，这些调节作用几乎涉及到人体所有的生理活动，如神经系统、消化系统、循环系统、内分泌系统等。不仅如此，其中许多肽还具有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的新功能。特别是以数个氨基酸结合生成的低肽不仅有比蛋白质更好化吸收性能，还具有促进免疫、调节激素、抗菌、抗病毒、降血压和降血脂等生理机能，迄今短肽的发现已经成为多肽类药物和功能性食品添加剂的开发热点，而且也是当前食品科技界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。高血压严重威胁着人类的健康，而高血压患者对于自身病情的知晓率和控制率却极低，并且即便接受了降压治疗，各类降压药物对于人体也具有一定的毒副作用。因此迫切需要开发出安全有效、无毒副作用的降血压产品，ACE抑制肽即满足这样的需求。乳制品中富含多种蛋白质、脂质和矿物质等营养物质，且具有延缓衰老、促进新陈代谢等作用，是极佳的功能性保健食品。可是我国目前对于乳制品的开发利用却较少，乳制品产业的加工和生产也主要停留在乳粉和液态乳，对于功能性乳制品的开发更是少之又少，乳制品资源亟待深度开发利用。而利用乳制品资源作为ACE抑制肽的原料乳，开发具有ACE抑制功能的乳制品低分子肽，对乳制品资源的开发利用和附加值的提高起到了促进作用。现有技术如授权公告号为CN103329992B的中国专利技术专利，公开了一种脱脂多肽牛乳的制备方法。通过酶解脱脂乳，制作一种富含乳蛋白肽的高品质功能性液态乳制品。最佳酶解条件：即是用加酶量为750U/g蛋白的木瓜蛋白酶与中性蛋白酶以1U:1U比例复合，在55℃水解脱脂乳25min，将使乳蛋白的水解度达到最高（44～45%），该制备方法在产生乳肽的同时保持乳的胶体特性，改善乳中蛋白营养状态，提高产品品质，使之更易被肠道吸收，具有恢复体力，促进肌肉快速补充能量的功效，上述功能性多肽牛乳适于各种消费人群，包括康复病人、消化功能衰退的老年人和胃肠功能较弱的婴幼儿等饮用。但是该制备方法得到的低分子肽有苦味，不易于被消费者接受。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提取方法简单可行，提取效率、得率和纯度高，制得的低分子肽的生物活性高、无苦味的从乳制品中提取低分子肽的方法。本专利技术针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种从乳制品中提取低分子肽的方法，包括复合酶水解、超滤分离、大孔树脂脱盐，其具体步骤为：复合酶水解：按料液比为1:15-25（g/mL）向脱脂乳制品中加入蒸馏水，混合均匀，调节pH至8.0-9.0，按加酶量为4-6%（w/w）加入复合酶，再加入酪氨酸，混合均匀后在45-55℃的条件下酶解4-6h，然后置于沸水中灭酶8-15min，再在4000-6000r/min的条件下离心15-25min，上清液即为酶解液，上述复合酶为碱性蛋白酶、地衣芽孢杆菌蛋白酶和风味蛋白酶的混合，其重量比为1:1.1-1.3:0.3-0.5，该步骤采用复合酶进行酶解，能从不同的氨基酸位点进行酶切，产生的小分子肽的组成和活力也会不同，效果优于单酶水解，同时酶之间因具有协同增效作用而导致加强效应，相应产生的多肽片段功能会进一步增强，最终提高脱脂乳制品的酶解效率和活性肽的活性；超滤分离：将酶解液依次用8-10kDa、4-6kDa和1kDa截断分子量的超滤膜进行超滤，滤液冻干，备用，该步骤要时刻保证入口压力不超过0.2MPa，使得超滤能够顺利进行，超滤膜超滤纯化属于物理方式，没有引入化学试剂，较好的保存了小分子蛋白狀的原有特性，且超滤对脱脂乳制品酶解液具有较好分离纯化效果；大孔树脂脱盐：将经过超滤处理的冷冻样品用双蒸水配制浓度为0.7-1.2mg/mL的溶液，上柱，用浓度为70-80%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1-3mL/min，洗脱液冷冻干燥，即得低分子肽，该步骤能把溶液中的无机盐、糖类等杂质被很好的除去，大孔树脂对超滤液的分离纯化效果较好，提高低分子肽纯度和生物活性，该低分子肽具有乳制品香味、较好的酸碱稳定性和抗消化性，不易再被消化酶进一步消化酶解，能够直接被机体使用，且该低分子肽具有清除活性氧自由基、预防疾病、延缓衰老与广谱杀菌的作用，可应用于食品、医药、保健品领域。作为优选，复合酶水解步骤中酪氨酸的添加量为风味蛋白酶重量的0.03-0.04%，酪氨酸中含有0.4-0.5%的右旋酪氨酸，该酪氨酸能协助酶快速将疏水性氨基酸从蛋白质或肽的末端切除或包裹起来，且使得酶解产物中的亲水性基团暴露出来，进而快速溶于水中，避免酶解产物积累而对酶产生竞争性抑制性，使得酶解过程中能够一直保持较高的酶解速率进行酶解，同时可避免游离的肽段又重新聚合，提高酶解效率，且可避免蛋白过分水解而产生苦味，提高活性肽的口感。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1）本专利技术低分子肽的提取方法简单可行，提取效率、得率和纯度高，制得的活性肽的生物活性高、无苦味，易于工业化规模生产，具有良好的应用价值和市场潜力；2）本专利技术采用复合酶进行酶解，效果优于单酶水解，相应产生的多肽片段功能会进一步增强，最终提高脱脂乳制品的酶解效率和活性肽的活性；3）本专利技术能避免酶解产物积累而对酶产生竞争性抑制性，使得酶解过程中能够一直保持较高的酶解速率进行酶解，同时可避免游离的肽段又重新聚合，提高酶解效率，且可避免蛋白过分水解而产生苦味；4）本专利技术制得的低分子肽具有乳制品香味、较好的酸碱稳定性和抗消化性，不易再被消化酶进一步消化酶解，能够直接被机体使用，且该低分子肽具有清除活性氧自由基、预防疾病、延缓衰老与广谱杀菌的作用，可应用于食品、医药、保健品领域。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术方案作进一步说明：实施例1：一种从乳制品中提取低分子肽的方法，包括复合酶水解、超滤分离、大孔树脂脱盐，其具体步骤为：1）复合酶水解：按料液比为1:25（g/mL）向脱脂乳制品中加入蒸馏水，混合均匀，调节pH至8.0，按加酶量为6%（w/w）加入复合酶，再加入酪氨酸，混合均匀后在45℃的条件下酶解6h，然后置于沸水中灭酶8min，再在6000r/min的条件下离心15min，上清液即为酶解液，上述复合酶为碱性蛋白酶、地衣芽孢杆菌蛋白酶和风味蛋白酶的混合，其重量比为1:1.3:0.3，该步骤采用复合酶进行酶解，能从不同的氨基酸位点进行酶切，产生的小分子肽的组成和活力也会不同，效果优于单酶水解，同时酶之间因具有协同增效作用而导致加强效应，相应产生的多肽片段功能会进一步增强，最终提高脱脂乳制品的酶解效率和活性肽的活性；2）超滤分离：将酶解液依次用10kDa、4kDa和1kDa截断分子量的超滤膜进行超滤，滤液冻干，备用，该步骤要时刻保证入口压力不超过0.2MPa，使得超滤能够顺利进行，超滤膜超滤纯化属于物理方式，没有引入化学试剂，较好的保存了小分子蛋白狀的原有特性，且超滤对脱脂乳制品酶解液具有较好分离纯化效果；3）大孔树脂脱盐：将经过超滤处理的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从乳制品中提取低分子肽的方法，包括预处理、酶解、脱腥、超滤、分离纯化，其特征在于：所述复合酶水解步骤为：向脱脂乳制品中加入蒸馏水，混合均匀，加入复合酶和酪氨酸，混合均匀后酶解，灭酶，离心，上清液即为酶解液。

【技术特征摘要】
1.一种从乳制品中提取低分子肽的方法，包括预处理、酶解、脱腥、超滤、分离纯化，其特征在于：所述复合酶水解步骤为：向脱脂乳制品中加入蒸馏水，混合均匀，加入复合酶和酪氨酸，混合均匀后酶解，灭酶，离心，上清液即为酶解液。2.根据权利要求1所述的一种从乳制品中提取低分子肽的方法，其特征在于：所述脱脂乳制品和蒸馏水的料液比为1:15-25（g/mL），pH为8.0-9.0，加酶量为4-6%（w/w），酶解温度为45-55℃、时间为4-6h。3.根据权利要求1所述的一种从乳制品中提取低分子肽的方法，其特征在于：所述复合酶为碱性蛋白酶、地衣芽孢杆菌蛋白酶和风味蛋白酶的混合，其重量比为1:1.1-1.3:0.3-0.5。4.根据权利要求1所述的一种从乳制品中提取低分子肽的方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：全盈园，
申请(专利权)人：金华市铁骑士生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33