一种用于鉴定人体液的组织来源的miRNAs复合扩增体系及其专用引物组合制造技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定人体液的组织来源的miRNAs复合扩增体系及其专用引物组合。该引物组合包括引物组合甲和引物组合乙：引物组合甲由16个引物组成，核苷酸序列依次如序列21至序列28和序列31至序列38所示；引物组合乙由8个引物组成，核苷酸序列依次如序列11、序列12、序列13、序列14、序列16、序列17、序列18或序列19所示。采用本发明专利技术提供的miRNAs复合扩增体系可以有效的鉴定人体液的组织来源，大大简化了鉴定刑侦现场体液或其斑迹的组织来源的步骤，能为明确案件性质、确定犯罪嫌疑人以及定罪量刑等提供准确的科学依据。本发明专利技术具有重大应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定人体液的组织来源的miRNAs复合扩增体系及其专用引物组合
本专利技术涉及法医学
，具体涉及一种用于鉴定人体液的组织来源的miRNAs复合扩增体系及其专用引物组合。
技术介绍
人体液(如静脉血、精液、月经血、阴道分泌物、唾液、尿液和汗液等)是法医鉴定各类案件中涉及较多的生物检材，鉴定人体液的组织来源可为刑事侦查提供有力的证据。传统的鉴定体液的组织来源主要是基于酶促反应和免疫学检测，这种方法由于种属或组织特异性的限制，大部分实验均为假定实验和确证实验。此外，对于阴道分泌物、月经血及汗液的鉴定都是不确定的。随着分子生物学领域的不断发展，越来越多的基于分子领域的检测技术被用于鉴定体液的组织来源。大量mRNA标记被成功用于静脉血、唾液、精液、阴道分泌物、尿液及汗液的组织来源的鉴定。Xu等(XuY，XieJ，CaoY，etal.DevelopmentofhighlysensitiveandspecificmRNAmultiplexsystem(XCYR1)forforensichumanbodyfluidsandtissuesidentificantion[J].PLoSOne，2014，9：e100123.)建立了针对静脉血、尿液、汗液等10种体液，由16个mRNA位点组成的复合体系进行体液鉴定。宋凤(宋凤.法医学体液斑鉴定的RNA标记研究[D].四川：四川大学，2016.)通过逆转录-终点法PCR建立的19个mRNA位点的荧光复合体系在静脉血、精液、唾液、阴道分泌物及月经血五种体液样本中均获得了检测结果。然而，mRNA受湿度、紫外光、温度及环境影响易降解的特点限制了其在法医学体液来源鉴定领域的应用范围。miRNA是一类广泛存在于真核细胞中约由18-24个核酸组成的内源性非编码小分子RNA，在多数生物进程中扮演十分重要的调节作用，其具有组织特异性、分子小、拷贝数高且不易降解的特点，即使在极端温度、强酸、强碱条件下其含量和分子结构均无明显变化，满足检测降解检材的需求，成为继mRNA之后的用于解决法医学关注的热点；但其拷贝数高、分子量小的特点，使得其检测难度较大。目前，基于miRNAs进行的体液鉴定研究主要运用荧光定量PCR技术(qPCR)检测miRNAs在各体液中的表达差异，并借助统计学方法对结果进行分析。受到检测方法的局限，qPCR需针对每个目标基因进行逆转录或扩增反应。这不仅会消耗大量的检材和试剂，而且会加剧在反应过程中的可能性，对于结果判定造成混淆。荧光毛细管电泳可通过一个反应对多种体液的多个miRNA进行扩增和检测，从而用于体液鉴定。VanderMeer等(VANDERMEERD，UCHIMOTOML，WILLIAMSG.SimultaneousAnalysisofMicro-RNAandDNAforDeterminingtheBodyFluidOriginofDNAProfiles[J].JournalofForensicSciences，2013，58(4):967-971.)和Li等(LIY，ZHANGJ，WEIW，etal.Astrategyforco-analysisofmicroRNAsandDNA[J].ForensicScienceInternational：Genetics，2014，12:24-29.)研究了可同时获取DNA分型结果和体液鉴定结果的DNA和miRNA共提取分析方法，且在全部检测样本中，均得到完整的DNA分型结果和miRNA标记的特征峰。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何鉴定人体液的组织来源。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了引物组合，可包括引物组合甲和引物组合乙：所述引物组合甲可包括引物21、引物22、引物23、引物24、引物25、引物26、引物27、引物28、引物31、引物32、引物33、引物34、引物35、引物36、引物37和引物38；所述引物21可为如下A1)或A2)：A1)序列表中的序列21所示的单链DNA分子；A2)将序列21经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列21具有相同功能的DNA分子；所述引物22可为如下A3)或A4)：A3)序列表中的序列22所示的单链DNA分子；A4)将序列22经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列22具有相同功能的DNA分子；所述引物23可为如下A5)或A6)：A5)序列表中的序列23所示的单链DNA分子；A6)将序列23经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列23具有相同功能的DNA分子；所述引物24可为如下A7)或A8)：A7)序列表中的序列24所示的单链DNA分子；A8)将序列24经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列24具有相同功能的DNA分子；所述引物25可为如下A9)或A10)：A9)序列表中的序列25所示的单链DNA分子；A10)将序列25经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列25具有相同功能的DNA分子；所述引物26可为如下A11)或A12)：A11)序列表中的序列26所示的单链DNA分子；A12)将序列26经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列26具有相同功能的DNA分子；所述引物27可为如下A13)或A14)：A13)序列表中的序列27所示的单链DNA分子；A14)将序列27经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列27具有相同功能的DNA分子；所述引物28可为如下A15)或A16)：A15)序列表中的序列28所示的单链DNA分子；A16)将序列28经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列28具有相同功能的DNA分子；所述引物31可为如下A17)或A18)：A17)序列表中的序列31所示的单链DNA分子；A18)将序列31经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列31具有相同功能的DNA分子；所述引物32可为如下A19)或A20)：A19)序列表中的序列32所示的单链DNA分子；A20)将序列32经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列32具有相同功能的DNA分子；所述引物33可为如下A21)或A22)：A21)序列表中的序列33所示的单链DNA分子；A22)将序列33经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列33具有相同功能的DNA分子；所述引物34可为如下A23)或A24)：A23)序列表中的序列34所示的单链DNA分子；A24)将序列34经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列34具有相同功能的DNA分子；所述引物35可为如下A25)或A26)：A25)序列表中的序列35所示的单链DNA分子；A26)将序列35经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列35具有相同功能的DNA分子；所述引物36可为如下A27)或A28)：A27)序列表中的序列36所示的单链DNA分子；A28)将序列36经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列36具有相同功能的DNA分子；所述引物37可为如下A29)或A30)：A29)序列表中的序列37所示的单链DNA分子；A30)将序列37经过一个或几个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物组合，包括引物组合甲和引物组合乙：所述引物组合甲包括引物21、引物22、引物23、引物24、引物25、引物26、引物27、引物28、引物31、引物32、引物33、引物34、引物35、引物36、引物37和引物38；所述引物21为如下A1)或A2)：A1)序列表中的序列21所示的单链DNA分子；A2)将序列21经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列21具有相同功能的DNA分子；所述引物22为如下A3)或A4)：A3)序列表中的序列22所示的单链DNA分子；A4)将序列22经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列22具有相同功能的DNA分子；所述引物23为如下A5)或A6)：A5)序列表中的序列23所示的单链DNA分子；A6)将序列23经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列23具有相同功能的DNA分子；所述引物24为如下A7)或A8)：A7)序列表中的序列24所示的单链DNA分子；A8)将序列24经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列24具有相同功能的DNA分子；所述引物25为如下A9)或A10)：A9)序列表中的序列25所示的单链DNA分子；A10)将序列25经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列25具有相同功能的DNA分子；所述引物26为如下A11)或A12)：A11)序列表中的序列26所示的单链DNA分子；A12)将序列26经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列26具有相同功能的DNA分子；所述引物27为如下A13)或A14)：A13)序列表中的序列27所示的单链DNA分子；A14)将序列27经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列27具有相同功能的DNA分子；所述引物28为如下A15)或A16)：A15)序列表中的序列28所示的单链DNA分子；A16)将序列28经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列28具有相同功能的DNA分子；所述引物31为如下A17)或A18)：A17)序列表中的序列31所示的单链DNA分子；A18)将序列31经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列31具有相同功能的DNA分子；所述引物32为如下A19)或A20)：A19)序列表中的序列32所示的单链DNA分子；A20)将序列32经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列32具有相同功能的DNA分子；所述引物33为如下A21)或A22)：A21)序列表中的序列33所示的单链DNA分子；A22)将序列33经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列33具有相同功能的DNA分子；所述引物34为如下A23)或A24)：A23)序列表中的序列34所示的单链DNA分子；A24)将序列34经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列34具有相同功能的DNA分子；所述引物35为如下A25)或A26)：A25)序列表中的序列35所示的单链DNA分子；A26)将序列35经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列35具有相同功能的DNA分子；所述引物36为如下A27)或A28)：A27)序列表中的序列36所示的单链DNA分子；A28)将序列36经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列36具有相同功能的DNA分子；所述引物37为如下A29)或A30)：A29)序列表中的序列37所示的单链DNA分子；A30)将序列37经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列37具有相同功能的DNA分子；所述引物38为如下A31)或A32)：A31)序列表中的序列38所示的单链DNA分子；A32)将序列38经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列38具有相同功能的DNA分子；所述引物组合乙包括引物11、引物12、引物13、引物14、引物16、引物17、引物18和引物19；所述引物11为如下B1)或B2)：B1)序列表中的序列11所示的单链DNA分子；B2)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物12为如下B3)或B4)：B3)序列表中的序列12所示的单链DNA分子；B4)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子；所述引物13为如下B5)或B6)：B5)序列表中的序列13所示的单链DNA分子；B6)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物14为如下B7)或B8)：B7)序列表中的序列14所示的单链DNA分子；B8)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的D...

【技术特征摘要】
1.引物组合，包括引物组合甲和引物组合乙：所述引物组合甲包括引物21、引物22、引物23、引物24、引物25、引物26、引物27、引物28、引物31、引物32、引物33、引物34、引物35、引物36、引物37和引物38；所述引物21为如下A1)或A2)：A1)序列表中的序列21所示的单链DNA分子；A2)将序列21经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列21具有相同功能的DNA分子；所述引物22为如下A3)或A4)：A3)序列表中的序列22所示的单链DNA分子；A4)将序列22经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列22具有相同功能的DNA分子；所述引物23为如下A5)或A6)：A5)序列表中的序列23所示的单链DNA分子；A6)将序列23经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列23具有相同功能的DNA分子；所述引物24为如下A7)或A8)：A7)序列表中的序列24所示的单链DNA分子；A8)将序列24经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列24具有相同功能的DNA分子；所述引物25为如下A9)或A10)：A9)序列表中的序列25所示的单链DNA分子；A10)将序列25经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列25具有相同功能的DNA分子；所述引物26为如下A11)或A12)：A11)序列表中的序列26所示的单链DNA分子；A12)将序列26经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列26具有相同功能的DNA分子；所述引物27为如下A13)或A14)：A13)序列表中的序列27所示的单链DNA分子；A14)将序列27经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列27具有相同功能的DNA分子；所述引物28为如下A15)或A16)：A15)序列表中的序列28所示的单链DNA分子；A16)将序列28经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列28具有相同功能的DNA分子；所述引物31为如下A17)或A18)：A17)序列表中的序列31所示的单链DNA分子；A18)将序列31经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列31具有相同功能的DNA分子；所述引物32为如下A19)或A20)：A19)序列表中的序列32所示的单链DNA分子；A20)将序列32经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列32具有相同功能的DNA分子；所述引物33为如下A21)或A22)：A21)序列表中的序列33所示的单链DNA分子；A22)将序列33经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列33具有相同功能的DNA分子；所述引物34为如下A23)或A24)：A23)序列表中的序列34所示的单链DNA分子；A24)将序列34经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列34具有相同功能的DNA分子；所述引物35为如下A25)或A26)：A25)序列表中的序列35所示的单链DNA分子；A26)将序列35经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列35具有相同功能的DNA分子；所述引物36为如下A27)或A28)：A27)序列表中的序列36所示的单链DNA分子；A28)将序列36经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列36具有相同功能的DNA分子；所述引物37为如下A29)或A30)：A29)序列表中的序列37所示的单链DNA分子；A30)将序列37经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列37具有相同功能的DNA分子；所述引物38为如下A31)或A32)：A31)序列表中的序列38所示的单链DNA分子；A32)将序列38经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列38具有相同功能的DNA分子；所述引物组合乙包括引物11、引物12、引物13、引物14、引物16、引物17、引物18和引物19；所述引物11为如下B1)或B2)：B1)序列表中的序列11所示的单链DNA分子；B2)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物12为如下B3)或B4)：B3)序列表中的序列12所示的单链DNA分子；B4)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子；所述引物13为如下B5)或B6)：B5)序列表中的序列13所示的单链DNA分子；B6)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物14为如下B7)或B8)：B7)序列表中的序列14所示的单链DNA分子；B8)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子；所述引物16为如下B11)或B12)：B11)序列表中的序列16所示的单链DNA分子；B12)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具有相同功能的DNA分子；所述引物17为如下B13)或B14)：B13)序列表中的序列17所示的单链DNA分子；B14)将序列17经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列17具有相同功能的DNA分子；所述引物18为如下B15)或B16)：B15)序列表中的序列18所示的单链DNA分子；B16)将序列18经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列18具有相同功能的DNA分子；所述引物19为如下B17)或B18)：B17)序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：季安全，孙启凡，莫晓婷，胡胜，王乐，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京,11