The invention provides a new colorimetric sensing method based on ultra fast PCR for visual super sensitive detection of Hg2+. This new method designs the amplification primers and templates for ultra fast polymerase chain reaction (Polymerase Chain Reaction, PCR) based on the mismatch of mercury ion thymine, and the new method for the establishment of a new functional nucleic acid detection method based on the mismatch mercury ion target by combining the primer with the self assembled chromogenic module of the enzyme linked nucleic acid. And biosensors. The detection method and biosensor established by the invention are faster and more sensitive than the traditional method. It has the advantages of strong specificity, high sensitivity and reliable detection results. It can simplify the analysis and detection steps, shorten the analysis time, and more importantly, make the on-line real-time detection possible, easy to carry and field operation, The field of heavy metal rapid detection has a very good application prospect.
【技术实现步骤摘要】
一种重金属离子的可视化定量检测新方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种检测重金属的方法和生物传感器。
技术介绍
汞在自然中极少以纯金属的状态存在，通常在矿藏中以硫化汞、氯硫汞矿、硫锑汞矿等状态存在。汞是一种有巨毒的重金属元素，随着工业化进展的不断加速，越来越多的汞通过食物链集聚，对人体的危害越发严重。通过水、空气、食物、药物、化妆品等多种途径浸入人体，对人体造成伤害。特别是孕妇要特别注意避免接触汞，因为无论是有机汞(甲基化汞)和无机汞都会对胎儿的健康产生影响。传统的Hg2+检测方法主要包括原子吸收光谱法(AAS)、原子荧光光谱法(AFS)、电感耦合等离子体质谱法、电化学分析方法、原子吸收分光光度法等，这些方法检测灵敏、准确，但一般需要较长的检测周期和专业人员操作。由于有机染料、蛋白、DNA、薄膜的化学传感器的优点，使其在汞检测分析方面迅速发展，但也存在着水溶性、灵敏度、稳定性、选择性等各方面的不足。伴随着新型纳米材料应用于比色法的不断发展，在很大程度上弥补了传统方法的不足。由于比色法操作简单、对仪器要求低，作为一种快速、有效检测汞的方法得到了广泛发展。...
【技术保护点】
1.一种金属的检测方法，其特征在于，所述方法包括体外核酸扩增技术,所述体外核酸扩增技术的反应体系包括下述1)‑2)中的至少一种：1)上游引物，所述上游引物包括：互补序列A、连接臂、互补序列B、可特异性扩增模板的核苷酸序列和可与待测金属结合的核苷酸；所述连接臂位于所述互补序列A和互补序列B之间，所述可特异性扩增模板的核苷酸序列和可与待测金属结合的核苷酸位于所述上游引物的5’端或3’端；所述互补序列A和所述互补序列B的核苷酸序列互补和/或反向互补；所述连接臂包括可抑制聚合酶结合的结构和/或可抑制体外核酸扩增过程中新链延伸的结构；2)模板，所述模板包括与待测金属结合的核苷酸相互补的核苷酸。
【技术特征摘要】
1.一种金属的检测方法，其特征在于，所述方法包括体外核酸扩增技术,所述体外核酸扩增技术的反应体系包括下述1)-2)中的至少一种：1)上游引物，所述上游引物包括：互补序列A、连接臂、互补序列B、可特异性扩增模板的核苷酸序列和可与待测金属结合的核苷酸；所述连接臂位于所述互补序列A和互补序列B之间，所述可特异性扩增模板的核苷酸序列和可与待测金属结合的核苷酸位于所述上游引物的5’端或3’端；所述互补序列A和所述互补序列B的核苷酸序列互补和/或反向互补；所述连接臂包括可抑制聚合酶结合的结构和/或可抑制体外核酸扩增过程中新链延伸的结构；2)模板，所述模板包括与待测金属结合的核苷酸相互补的核苷酸。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括下述1)-3)中的至少一种：1)所述体外核酸扩增技术包括超快速PCR反应，所述超快速PCR反应的反应过程包括：90-98℃，2-6s；50-60℃，2-8s；共20-40个循环；2)所述连接臂包括具长链结构的化合物；3)所述可与待测金属结合的核苷酸具体包括含胸腺嘧啶或胞嘧啶的核苷酸。3.根据权利要求1和/或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括下述1)-4)中的至少一种：1)当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述上游引物时，所述上游引物包括：将序列表中SEQID№：1和SEQID№：2所示的核苷酸序列通过连接臂连接后得到的引物；2)当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述上游引物时，所述上游引物包括：将序列表中SEQID№：1和/或SEQID№：2所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQID№：1和/或SEQID№：2所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列通过连接臂连接后得到的引物；3)当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述模板时，所述模板包括：序列表中SEQID№：4所示的核苷酸序列；4)当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述模板时，所述模板包括：将序列表中SEQID№：4所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQID№：4所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；具体的，当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述下游引物时，所述下游引物包括：序列表中SEQID№：3所示的核苷酸序列、和/或将序列表中SEQID№：3所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQID№：3所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；具体的，所述连接臂为oxyethyleneglycolbridge，oxyethyleneglycol的化学结构为：具体的，所述上游引物包括：AGAGAGAGAGAGGGAAAGAGAGAG-oxyethyleneglycolbridge-CTCTCTCTTTCCCTCTCTCTCTCTGTGAAATTATCGCCACGTTCGGTTTT；具体的，所述下游引物还包括在所述下游引物上标记免疫标记；所述免疫标记包括生物素；所述生物素标记在所述下游引物的5’端第一个核苷酸上；再具体的，所述下游引物为Biotin-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC。4.根据权利要求1、2和/或3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括核酸自组装显色反应,所述核酸自组装显色反应的反应体系包括发卡序列，所述发卡序列包括发卡序列一和/或发卡序列二，所述发卡序列一包括：互补序列C、互补序列D和3个以上的任意核苷酸，所述3个以上的任意核苷酸位于所述发卡序列的5’端和/或3’端；所述发卡序列二包括互补序列E和互补序列F；所述互补序列D与互补序列F互补和/或反向互补；所述互补序列C与所述互补序列A和/或互补序列B互补和/或反向互补，所述互补序列C与所述互补序列E互补和/或反向互补。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发卡序列包括下述1)-4)中的至少一种：1)所述发卡序列一包括序列表中SEQID№：5所示的核苷酸序列；2)所述发卡序列二包括序列表中SEQID№：6所示的核苷酸序列；3)所述发卡序列一包括将序列表中SEQID№：5所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQID№：5所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；4)所述发卡序列二包括将序列表中SEQID№：6所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQID№：6所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列。6.根据权利要求4和/或5所述的方法，其特征在于，所述核酸自组装显色反应还包括下述1)-2)中所述的至少一种：1)将权利要求1、2和/或3所述方法制备得到是反应体系与权利要求4和/或5所述方法中的发卡序列混合，于37℃孵育20...
【专利技术属性】
技术研发人员：许文涛，罗云波，黄昆仑，杜再慧，田晶晶，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11
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