The present invention provides a method for identifying a living bacterial cell in a sample, including the culture of a sample and a DNA conjugate, in which the DNA conjugate can not pass through a complete cell membrane, but can be combined with the DNA exposed to the cell membrane damage; secondly, a universal positive primer and reverse primer are used for asymmetric polymerase chain reaction. Reaction (Polymerase Chain Reaction; PCR), in which the primers have the function of amplifying multiple DNA target sequences; finally, perform high resolution dissociation (HRM) analysis, and identify viable species of living bacteria cells by analyzing the dissociation patterns of high resolution dissociation analysis.
【技术实现步骤摘要】
一种识别一样本中活菌细胞的方法
本专利技术涉及一种识别一样本中活菌细胞的方法。
技术介绍
病原微生物是食品安全问题的重要原因之一，我们可以通过检测食物样本中的病原微生物数量，得知该食物是否已受到污染。像是通过检测培养基中病原微生物的菌落数量，例如大肠杆菌，可以推测该食物受到肠道病原体污染的可能性。因此，许多国家定有各种食品中的大肠杆菌数量限制的标准。虽然食物基质非常复杂，但目前的检测技术已能通过细菌培养估算出食物中微生物的数量。即便如此，由于该检测是根据细菌培养所做的估算，导致检测时间需要超过1-2天才能完成。若是采用国际标准的培养方法，则需要48小时才能完成。即便是使用3M大肠菌群试纸，最快也需要24小时才能确认结果。因此，目前迫切需要一种快速检测食品中大肠杆菌数的方法。
技术实现思路
本专利技术便是提供一种快速又准确的识别样本中活菌的方法。本专利技术提供了一种识别样本中一活菌细胞的方法，包括将样本与DNA缀合物一起培养，其中DNA缀合物无法通过完整的细胞膜，但能与因细胞膜受损而曝露的DNA结合；其次，使用一通用正向引物和反向引物进行不对称的聚合酶连锁反应（PCR）...
【技术保护点】
1.一种识别一样本中活菌细胞的方法，包括：（a）将样本与DNA缀合物一起培养，其中DNA缀合物无法通过完整的细胞膜，但能与因细胞膜受损而曝露的DNA结合；（b）使用一通用正向引物和反向引物进行不对称的聚合酶链式反应，其中所述的引物具有能够一次扩增多个DNA目标序列的功能；及（c）执行高分辨率解离分析，通过分析高分辨率解离分析的解离模式，识别存活的特定种类的活菌细胞。
【技术特征摘要】
2017.01.05 US 62/442,4551.一种识别一样本中活菌细胞的方法，包括：（a）将样本与DNA缀合物一起培养，其中DNA缀合物无法通过完整的细胞膜，但能与因细胞膜受损而曝露的DNA结合；（b）使用一通用正向引物和反向引物进行不对称的聚合酶链式反应，其中所述的引物具有能够一次扩增多个DNA目标序列的功能；及（c）执行高分辨率解离分析，通过分析高分辨率解离分析的解离模式，识别存活的特定种类的活菌细胞。2.根据权利要求1所述的识别一样本中活菌细胞的方法，其中所述DNA缀合物是选自由丙啶单叠氮化物（propidiummonoazide;PMA）或溴化乙啶单叠氮化物（ethidiummonoazidebromide;EMA）或其他具有相同功能的分子或化合物所组成的群组。3.根据权利要求1所述的识别一样本中活菌细胞的方法，其中所述通用正向引物和反向引物能够与细菌的16S...
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