一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法技术

本发明专利技术公开了一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法，属于分子育种技术领域。本发明专利技术采用分子辅助选择方法鉴定了鸡隐性白羽基因和性连锁矮小基因的基因型，可以快速判定基因型，生产出基因型为cc/dwdw的节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系。本方法可以避免测交选育的繁琐，缩短世代间隔，仅2个世代就可以选育出节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系，有效降低了培育成本。采用本发明专利技术选育的节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系具有个体小、耗料少、基础代谢低、产蛋率高、肉味鲜美、饲养密度大、饲料报酬高、节约成本等优点，可作为商品鸡直接进行生产，也可以配套应用。

【技术实现步骤摘要】
一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法
本专利技术涉及一种节粮型青胫白羽肉鸡新品系的选育方法，具体涉及一种利用PCR技术快速鉴定基因型和基因片段缺失的方法，属于家禽分子育种

技术介绍
随着人们经济收入的不断增长和生活水平的提高，禽产品在口感、风味和安全性等方面的指标愈来愈受到消费者的重视。目前在肉鸡生产中，国外进口的快大型白羽肉鸡或有色羽肉鸡品种的饲养数量开始下降，优质黄羽肉鸡的饲养量在不断上升。特别是在我国大部分地区尤其以青脚、麻羽的优质肉鸡更加受到消费者的亲睐，市场售价比其它仿土鸡或快大肉鸡要高出15～40%左右，其市场应用前景十分广阔。就目前国内青腿麻鸡配套生产的现状来说，一般采用青腿麻羽的地方鸡种公鸡作第一父本与隐性白羽品系杂交，再采用另一青腿麻羽公鸡作第二父本组成三元配套。但在这些杂交配套中存在的主要问题是：由于在配套中采用了引进的速生型隐性白羽鸡种，首先是母本的耗料多，对生产不经济，其次是商品鸡具有较多的外血而直接影响了肉质风味，再者是制种复杂，增加商品代鸡的生产成本，同时，商品鸡的适应性较差，不适合我国目前生态放牧饲养方式。因此，培育小型优质高产的母本品系参与配套，是进行优质青腿麻鸡生产的技术关键和发展趋势。鸡的白羽分为显性白羽和隐性白羽，而其中隐性白羽又有多种，TYR（络氨酸酶）基因控制的隐性白羽是其中重要的一种。TYR基因位于常染色体上，正常的TYR基因控制的性状是有色羽，当TYR两等位基因中插入了一个逆转录病毒后导致出现隐性白羽。因此当等位基因含有正常TYR基因时多数是有色羽（携带有显性白羽的鸡种如白来航除外），若等位基因均为逆转录病毒插入的TRY基因时则为隐性白羽。鸡TYR基因的DNA结构包括5个外显子和4个内含子，据报道其第四内含子的5899处有一个大约为7.7kb的禽类逆转录病毒的插入片段，有这一片段插入的个体表现为全白的羽毛，没有插入的为非全白；邵伯鸡配套系由江苏省家禽科学研究所主持进行攻关，通过在我国优质地方鸡种中导入dw基因，在国内外首次育成矮小型青腿黄羽优质肉鸡品系（S3系）并参与配套。该配套系已通过国家级品种（配套系）审定（农09新品种证字第12号），是具有自主知识产权的首个国家级优质肉鸡配套系。经鉴定，该项技术成果达国际先进水平。性连锁矮小基因（dw）是生长激素受体（GHR）基因缺陷型，Dw基因是位于Z染色体上的伴性遗传基因，处于肝脏坏死基因in位点和无翼基因we位点之间，靠近银色（S）、金色（s）羽基因和慢羽（K）、快羽（k）基因。正常基因DW对dw为显性，因此只有矮小型纯合型公鸡和携带矮小型基因的母鸡表现出矮小性状。dw和DW为不完全等位基因，dw基因同时具有质量性状基因和数量性状基因的特性，矮小型鸡是纯合型性连锁矮小基因（dw）的表型，具有个体小、耗料少、基础代谢低、产蛋率高、饲养密度大、饲料报酬高、节约成本等优点。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于克服传统育种方法时间长的缺陷，寻找一种快速、可靠的用于鸡隐性白羽基因和矮小基因鉴定的分子生物学方法，快速培育出一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系，可用于优质青腿麻鸡的配套生产。本专利技术建立的方法，可以快速鉴定隐性白羽基因和矮小基因，扩大携带隐性白羽基因和矮小基因的繁殖群体，缩短育种时间。为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案如下：一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，包括以下步骤：（1）利用邵伯鸡S3系（黄羽、青矮胫）作为父本，隐性白羽鸡（隐性白羽、正常黄胫）作为母本进行杂交，生产出F1代；（2）在F1代中选择白羽、青矮胫的母鸡作为母本，选择白羽、正常青胫的公鸡作为父本；（3）利用AS-PCR方法测定留做公母鸡亲本F1代的羽色基因型根据鸡隐性白羽控制基因（插入逆转录病毒的TYR基因）和有色羽控制基因（TYR基因）的核苷酸序列分别设计引物对P1和引物对P2；其中，引物对P1用于检测有色羽C等位基因，引物对P2用于检测隐性白羽c等位基因；提取待鉴定鸡的基因组DNA，用引物对P1和引物对P2同时进行PCR扩增，根据电泳结果判断鸡的羽色基因型：若只有引物对P1扩增出产物或引物对P1和引物对P2同时扩增出产物，则是非隐性白羽纯合子（表型可能为有色或白羽），基因型表现为CC/Cc；若只有引物对2扩增出产物，则为隐性白羽纯合子（表型为白羽），基因型表现为cc。所述引物对P1的上游引物根据TYR基因第4内含子核苷酸序列设计，下游引物根据TYR基因第5外显子核苷酸序列设计；引物对P2上游引物根据TYR基因第4内含子核苷酸序列设计（与引物对P1相同），下游引物根据插入鸡TYR基因的逆转录病毒核苷酸序列设计。所述的引物对P1为：上游引物，P1-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；下游引物，P1-R：5’-agatctgatgggcttgcttgaggta-3’。所述引物对P2为：上游引物，P2-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；(同P1-F)下游引物，P2-R：5’-tgctgaaaggactgcttttggggct-3’。（4）将F1代中鉴定出的纯合隐性白羽、青矮胫的母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡进行自交，产生F2代。（5）利用普通PCR方法测定F2代中纯合隐性白羽，青胫公母鸡的矮小基因。根据dw基因（即GHR基因外显子9和3’非翻译区1.7kb的缺失片段）核苷酸序列设计引物对P3用于检测矮小基因，提取待鉴定鸡的基因组DNA，用引物对P3进行PCR扩增，根据电泳结果判断鸡的矮小基因型：若有扩增产物，说明GHR基因没有片段缺失，基因型为DWDW或DW/dw（表型为正常胫），若没有扩增产物，说明GHR基因有缺失片段，基因型为dwdw（表型为矮小胫）。所述引物对P3的上、下游引物均根据GHR基因外显子9和3’非翻译区1.7kb缺失片段的核苷酸序列设计。所述引物对P3为：上游引物P3-F：5’-cagcttgggcttgtgtgctgaaacca-3’下游引物P3-R：5’-tcataattaaactacatcatgtagt-3’（6）在F2代个体中挑选矮脚青胫隐性白羽个体用引物对P3进行矮小基因验证。确保矮小基因的导入。本专利技术提供的上述引物可以作为节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系分子鉴定标记的应用。此外，本专利技术还提供了一种快速鉴定隐性白羽和矮小基因的方法，以受测鸡种在血液中提取的DNA为模板，用权利要求所述引物P1和P2同时进行有色羽基因和隐性白羽基因PCR扩增，1.5%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，根据条带判断是否含有逆转录病毒的TYR基因，扩增片段为284bp或284/771bp条带，基因型为CC/Cc，表型为有色羽或白羽；扩增片段仅为771bp条带，基因型为cc，表型为隐性白羽。用权利要求所述引物3进行dw基因PCR扩增，扩增片段有483bp的条带，说明GHR基因没有缺失，表现为正常胫；若没有扩增片段则说明GHR基因有缺失，表现为矮小胫。所述AS-PCR扩增的反应体系为25.0μL，所述反应体系由以下成分组成：10×PCRBuffer2.5μL，dNTP2.0μL（2mmol/L），TaqDNA聚合酶(5U/μL)0.5μL，P1或P2上游引本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）利用邵伯鸡S3系作为父本，隐性白羽鸡作为母本进行杂交，生产出F1代；邵伯鸡S3系为黄羽、青矮胫，隐性白羽鸡为隐性白羽、正常黄胫；（2）在F1代中选择白羽、青矮胫的母鸡作为母本，选择白羽、正常青胫的公鸡作为父本；（3）利用AS‑PCR方法测定留做公母鸡亲本F1代的羽色基因型，选留基因型为cc型的纯合隐性白羽、青矮胫母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡，淘汰基因型为CC或Cc的有色羽或白羽公母鸡；（4）将F1代中鉴定出的纯合隐性白羽、青矮胫的母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡进行自交，产生F2代；（5）利用普通PCR方法测定F2代中青胫公母鸡的矮小基因的基因型，选留纯合矮小基因dwdw基因型个体，淘汰DWDW/DWdw基因型个体，得到节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系。

【技术特征摘要】
1.一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）利用邵伯鸡S3系作为父本，隐性白羽鸡作为母本进行杂交，生产出F1代；邵伯鸡S3系为黄羽、青矮胫，隐性白羽鸡为隐性白羽、正常黄胫；（2）在F1代中选择白羽、青矮胫的母鸡作为母本，选择白羽、正常青胫的公鸡作为父本；（3）利用AS-PCR方法测定留做公母鸡亲本F1代的羽色基因型，选留基因型为cc型的纯合隐性白羽、青矮胫母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡，淘汰基因型为CC或Cc的有色羽或白羽公母鸡；（4）将F1代中鉴定出的纯合隐性白羽、青矮胫的母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡进行自交，产生F2代；（5）利用普通PCR方法测定F2代中青胫公母鸡的矮小基因的基因型，选留纯合矮小基因dwdw基因型个体，淘汰DWDW/DWdw基因型个体，得到节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系。2.根据权利要求1所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法，其特征在于：所述步骤（1）中隐性白羽鸡为TYR基因第4内含子插入7.7kb逆转录病毒后产生的隐性白羽鸡。3.根据权利要求1所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法，其特征在于：所述步骤（3）中利用AS-PCR测定F1代留种的青胫白羽鸡羽色基因型的方法，包括以下步骤：以待测鸡基因组DNA为模板，以引物对P1和P2的混合引物扩增TYR基因和插入逆转录病毒基因，对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡羽色基因型；所述的引物对P1为：上游引物，P1-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；下游引物，P1-R：5’-agatctgatgggcttgcttgaggta-3’；所述引物对P2为：上游引物，同P1-F，P2-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；下游引物，P2-R：5’-tgctgaaaggactgcttttggggct-3’。4.根据权利要求1所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法，其特征在于：所述步骤（5）中利用普通PCR方法测定F2代留种的青矮胫隐性白羽鸡矮小基因的基因型方法，包括以下步骤：以待测鸡基因组DNA为模板，以引物对P3的混合引物扩增dw基...

【专利技术属性】
技术研发人员：李春苗，赵振华，黎寿丰，黄华云，王钱保，黄正洋，梁忠，薛龙岗，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，扬州翔龙禽业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32