一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器制造技术

本发明专利技术公开了一种蛋白定向固定化修饰的细胞培养容器。本发明专利技术首先构建了一种GMCSF与IL4的融合蛋白，以及一种内壁包被有蛋白的细胞培养容器。该细胞培养容器的制备方法为：给蛋白加上His标签；对细胞培养容器的内壁进行硅烷化处理；对细胞培养容器的内壁进行AB‑NTA孵育修饰；加入NiCl2溶液使AB‑NTA与Ni偶联；加入含有His标签的蛋白，与AB‑NTA中的镍离子进行亲和，使其固定在细胞培养容器的内壁。使用本发明专利技术的细胞培养容器培养细胞的过程中，包被的蛋白不会在更换培养液时损失掉，因此无需多次重新加入，也保证了所用蛋白质量的一致性，使得整个培养过程的不可控因素减小，保证细胞培养及分化的效果，同时，具有可逆性、多次利用的优点。

A protein immobilized cell culture container

The invention discloses a protein immobilized and modified cell culture container. The invention first constructs a fusion protein of GMCSF and IL4, and a cell culture container coated with protein in the inner wall. The preparation method of the cell culture container is: adding His label to the protein, silane the inner wall of the cell culture container, incubating the inner wall of the cell culture container by AB NTA, adding the NiCl2 solution to coupling the AB NTA with Ni, adding the protein containing the His label, and affinity with the nickel ions in the AB NTA. It is fixed to the inner wall of the cell culture container. During the process of cell culture in the cell culture container of the present invention, the coated protein will not be lost when the culture fluid is replaced, so it is not required to be rejoined many times, and the consistency of the quality of the protein is ensured, the uncontrollable factors of the whole culture process are reduced, the effect of cell culture and differentiation is ensured, at the same time, It has the advantages of reversible and multiple use.

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器
本专利技术涉及细胞培养
，更具体地，涉及一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器。
技术介绍
细胞培养也叫细胞克隆技术，是细胞生物学研究及相关生物制品生产中必不可少的过程。通过对细胞进行基因编辑、药物处理、诱导分化等不同的处理，进行细胞培养可以达到细胞生命过程研究、疾病及药物机理、定向分化为其他细胞等目的，细胞大规模培养还可以用于制备细胞因子、抗体等生物蛋白类药物。细胞培养是生物领域必不可少的技术。当细胞培养过程中涉及到需要额外添加某种蛋白的时候，往往需要研究人员表达和纯化该蛋白，在每次更换培养基的时候都需加入纯化后的蛋白，经济上花费比较大，实验操作上也比较繁琐。另外，由于蛋白表达纯化后的产品稳定性、蛋白分装和保存时间等问题，都会影响细胞培养以及分化的效果。树突状细胞，是免疫系统中特异的抗原呈递细胞，能够激活特异抗原的T细胞免疫。2011年的诺贝尔生理学或医学奖被授予了加拿大免疫学家RalphM.Steinman，以表彰他在获得性免疫中树突细胞及其功能的发现。越来越多的研究表明树突状细胞在自身免疫、癌症、炎症等疾病治疗中发挥重要功能，用树突状细胞治疗疾本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为蛋白GMCSF与蛋白IL4的融合蛋白，蛋白GMCSF的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，蛋白IL4的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为蛋白GMCSF与蛋白IL4的融合蛋白，蛋白GMCSF的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，蛋白IL4的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示。2.一种编码权利要求1所述的融合蛋白的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:5或SEQIDNO:6所示。3.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求2所述的基因。4.一种重组菌株，含有权利要求3所述的重组载体。5.权利要求1所述融合蛋白、权利要求2所述基因、权利要求3所述重组载体或权利要求4所述重组菌株在诱导单核细胞分化为树突状前体细胞中的应用。6.一种蛋白定向固定化修饰的细...

【专利技术属性】
技术研发人员：周亚凤，王绪德，申兆兴，刘雪宾，
申请(专利权)人：上海晶诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31