一种评估家族性乳腺癌风险的标记物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种评估家族性乳腺癌风险的标记物，所述标记物为CNDP1基因或CNDP1蛋白，并进一步证实CNDP1在乳腺癌样本中表达上调。利用该分子标记物制备家族性乳腺癌早期诊断试剂或试剂盒，能够更早期、更便捷地检测乳腺癌高危人群中乳腺癌变的发生、发展趋势。同时利用该分子标记物检测乳腺癌还为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。

A marker for assessing familial breast cancer risk and its application

The present invention discloses a marker for assessing the risk of familial breast cancer, which is a CNDP1 gene or a CNDP1 protein, and further confirms that CNDP1 is up - regulated in breast cancer samples. Using this molecular marker to prepare the early diagnosis reagent or kit of familial breast cancer, it can be more early and more convenient to detect the occurrence and development trend of breast cancer in high risk population of breast cancer. At the same time, using this molecular marker to detect breast cancer also provides therapeutic targets and important basis for gene therapy, drug therapy and other clinical applications.

【技术实现步骤摘要】
一种评估家族性乳腺癌风险的标记物及其应用
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种评估家族性乳腺癌风险的标记物及其应用。
技术介绍
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率、死亡率逐年递增，远高于全国平均增长水平，且发病年龄呈现年轻化趋势(高发年龄段比世界平均发病年龄提前了10岁)，为威胁女性健康的头号杀手。然而，由于大部分乳腺癌缺乏针对性治疗靶点，目前临床上多采用传统手段进行干预，不能有效地降低其复发、转移及死亡风险，给家庭社会带来沉重负担。遗传因素在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用。研究表明，约10％的乳腺癌与遗传相关。在早发性乳腺癌案例(＜35岁)中，30％以上由遗传因素所致。BRCA1和BRCA2是最早被鉴定，也是最常见的家族遗传性乳腺癌特征基因。随着相关新技术的应用，已有大量基因陆续被报道与乳腺癌相关。这些基因大致可以分为“高风险”与“低至中度风险”乳腺癌易感基因，其中“高风险”易感基因包括：BRCA1和BRCA2(在年轻人中发病率高得多)；而PTEN,TP53,CHEK2,TGFβ1,PALB2和ATM属于“中度风险”乳腺癌易感基因。研究表明，40岁以前被诊断为乳腺癌患者的女性中，约1％被发现携带p53基因的突变；30岁以前被诊断为乳腺癌患者的女性中，多达4％携带p53基因的突变。携带PTEN同源缺失突变的女性，其患乳腺癌的风险为25-50％，这在年轻女性中更为常见。PALB2基因突变的女性，患乳腺癌和胰腺癌的风险增高。另外还有90个常见“低度风险”突变。上述这些变异仅仅解释了37％的家族性乳腺癌的风险。尚有接近三分之二的家族性乳腺癌发病风险找不到对应的致病基因。家族性乳腺癌是指一个家族中有两个或以上具有血缘关系的成员患乳腺癌，占乳腺癌总体的5-7％。与散发性乳腺癌相比，家族性乳腺癌的发病率更高，且年轻(＜40岁)早发性患者，预后更差，存活率更低。大规模的流行病学研究表明，有一个一级亲属患病的个体，其乳腺癌发病的概率为5.5％；有两个一级亲属患病的个体，其发病率为13.3％。Evans等人进一步的回顾分析表明，与正常对照人群相比，有一级亲属患乳腺癌的家族个体，其发病率增加2-4倍。家族遗传性在年轻早发乳腺癌群体中较为常见。可见，探索寻找族性乳腺癌相关基因，将为家族性乳腺癌的早期诊断、治疗和预后提供新的理论依据和临床指导。CNDP1(Carnosinedipeptidase1，肌肽二肽酶1)位于人染色体18q22.3，是肌肽(Carnosine)水解为β-丙氨酸和组氨酸的限速酶。研究表明，其与糖尿病性肾病密切相关，在前列腺癌和胶质母细胞瘤中表达下调；一项大规模的临床研究表明，低水平表达的CNDP1与前列腺癌的淋巴结转移密切相关。ArnerP团队的研究发现，在胃肠道肿瘤中，低水平表达的CNDP1与患者体内的分解代谢和不良预后密切相关，综合前列腺癌和胶质瘤中外周血CNDP1的低表达，提示CNDP1可构成侵袭性肿瘤及癌症恶病质的标志物。但目前尚无该基因与家族性乳腺癌发生发展相关的报道。
技术实现思路
为了实现乳腺癌的早期诊断、早期治疗，本专利技术的目的在于提供一种评估家族性乳腺癌风险的标记物及其在诊断试剂、试剂盒中的应用。本专利技术的目的是通过下列技术方案实现的：首先，本专利技术提供一种评估家族性乳腺癌风险的标记物，所述标记物为CNDP1基因或CNDP1蛋白。优选的，所述CNDP1基因或CNDP1蛋白在乳腺癌样本中表达上调。优选的，所述检测表达上调的方法包括基因水平检测和蛋白水平的检测；优选的，所述检测CNDP1基因表达上调的方法包括qRT-PCR、全外显子组测序、基因芯片；所述检测CNDP1蛋白表达上调的方法包括免疫组化、Westernblot、iTRAQ技术。优选的，所述CNDP1基因在乳腺癌患者中发生突变，所述突变位点为NM_032649:exon6:c.G724A:p.G242R。优选的，所述CNDP1基因突变为错义突变。进一步地，本专利技术提供一种筛选评估家族性乳腺癌风险的标志物CNDP1的方法，所述方法如下：(1)通过iTRAQ联合质谱方法筛选家族性乳腺癌外周血样本中差异表达的蛋白；(2)利用全外显子组测序技术筛选家族性乳腺癌外周血样本中差异表达的基因；(3)通过联合iTRAQ蛋白组学数据和全外显子组测序数据，结合生物学分析，筛选到在家族性乳腺癌外周血样本中既在蛋白水平又在基因水平表达差异的CNDP1；(4)通过RT-PCR和Westernblot进一步验证CNDP1基因或CNDP1蛋白的表达情况。本专利技术通过联合iTRAQ和全外显子组测序技术，筛选到在家族性乳腺癌外周血样本中既在蛋白水平又在基因水平表达差异的CNDP1作为评估家族性乳腺癌风险的标记物；并通过Westernblot技术验证了家族性乳腺癌患者外周血中CNDP1蛋白表达上调；同时验证人乳腺癌细胞中CNDP1基因或蛋白的表达上调。进一步，本专利技术提供了CNDP1基因或蛋白在制备评估、诊断或预后乳腺癌产品中的应用。优选的，所述产品包括试剂、试剂盒或芯片。进一步，本专利技术提供了一种用于测定CNDP1基因表达水平的试剂，所述试剂包括特异性扩增CNDP1的引物，所述引物序列如下：正向引物如SEQIDNO.1所示；反向引物如SEQIDNO.2所示。优选的，所述试剂还包括RNA提取试剂、反转录试剂、定量PCR试剂、正常对照样本RNA。具体为：(1)RNA提取试剂：Trizol、氯仿、异丙醇和75％乙醇等。(2)反转录试剂：逆转录缓冲液、逆转录酶、和T重复寡核苷酸OligodT或Random6mers。(3)定量PCR试剂：PCR缓冲液、SYBRGreen荧光染料、dNTPs组成的SYBRGreen聚合酶链式反应体系和RNaseFreeH2O。本专利技术所述的乳腺癌样本包括乳腺癌患者外周血、组织等。优选的，所述乳腺癌样本为乳腺癌患者外周血。进一步，本专利技术提供了用于测定样本中CNDP1基因表达水平的试剂在制备诊断或预示乳腺癌的试剂盒或试剂中的应用。本专利技术有益效果：1、本专利技术通过联合分析家族性乳腺癌家系样本蛋白质组和全外显子测序的数据，筛选到了同时在蛋白质和基因水平差异表达的新致病基因CNDP1；2、进一步，在乳腺癌患者外周血中和体外细胞学实验均证实CNDP1表达显著升高；上述实验表明CNDP1基因与乳腺癌发生发展密切相关；3、在患者外周血中检测到CNDP1基因突变，表明CNDP1基因表达差异是可以遗传的；本专利技术公开了一种与乳腺癌相关的标记物CNDP1，并进一步证实CNDP1在乳腺癌样本中表达上调。利用该分子标记物制备乳腺癌早期诊断试剂或试剂盒，能够更早期、更便捷地检测乳腺癌高危人群中乳腺癌变的发生、发展趋势。同时利用该分子标记物检测乳腺癌还为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。附图说明图1为家系1图谱；图2RT-PCR检测CNDP1基因在人乳腺癌细胞中的表达水平；图3Westernblot检测CNDP1蛋白在人乳腺癌细胞中的表达水平；图4Westernblot检测CNDP1蛋白在家系外周血中的表达水平。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种评估家族性乳腺癌风险的标记物，其特征在于，所述标记物为CNDP1基因或CNDP1蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种评估家族性乳腺癌风险的标记物，其特征在于，所述标记物为CNDP1基因或CNDP1蛋白。2.如权利要求1所述的标记物，其特征在于，所述CNDP1基因或CNDP1蛋白在乳腺癌样本中表达上调。3.如权利要求1所述的标记物，其特征在于，所述CNDP1基因在乳腺癌患者中发生突变，所述突变位点为NM_032649:exon6:c.G724A:p.G242R。4.如权利要求3所述的标记物，其特征在于，所述CNDP1基因突变为错义突变。5.一种筛选评估家族性乳腺癌风险的标志物CNDP1的方法，其特征在于，所述方法如下：(1)通过iTRAQ联合质谱方法筛选家族性乳腺癌外周血样本中差异表达的蛋白；(2)利用全外显子组测序技术筛选家族性乳腺癌外周血样本中差异表达的基因；(3)通过联合iTRAQ蛋白组学数据和全外显子组测序数据...

【专利技术属性】
技术研发人员：何劲松，韦伟，罗雪莹，李锋，刘宝儿，阳莉萍，高睿，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院北京大学深圳临床医学院，
类型：发明
国别省市：广东,44