一种长链非编码RNA及其组合物在诊断/治疗胃癌中的应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程领域，特别涉及一种长链非编码RNA，NFIA‑AS1及其组合物，在制备诊断胃癌及靶点药物治疗中的应用。同时，本发明专利技术还涉及其引物，在制备诊断胃癌试剂中的应用。通过研究该长链非编码RNA细胞水平的表达，揭示了其与胃癌发病机理的关系。

Application of a long chain non coding RNA and its combination in diagnosis / treatment of gastric cancer

The invention belongs to the field of genetic engineering, especially a long chain non coding RNA, NFIA AS1 and its composition, and its application in the preparation of the diagnosis of gastric cancer and target drug therapy. Meanwhile, the invention also relates to its primers in the preparation of diagnostic gastric cancer reagents. By studying the expression of the long chain non coding RNA cells, the relationship between the long chain and the pathogenesis of gastric cancer was revealed.

【技术实现步骤摘要】
一种长链非编码RNA及其组合物在诊断/治疗胃癌中的应用
本专利技术属于基因工程领域，特别涉及一种长链非编码RNA，NFIA-AS1及其组合物，在制备诊断胃癌及靶点药物治疗中的应用。同时，本专利技术还涉及其引物，在制备诊断胃癌试剂中的应用。
技术介绍
胃癌(GC)的是导致死亡的全球第二大癌症。病情的快速发展和转移导致其预后较差。为了提高GC的早期诊断和靶向治疗，迫切需要了解其潜在的分子机制并确定新的、有效的新的生物标记物和治疗靶点。长链非编码RNA(lncRNAs)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，有别于其他小分子非编码RNA，其可以顺式(incis)或反式(intrans)作用的方式调节RNA代谢、蛋白质功能活性、组蛋白修饰及染色质重塑，在表观遗传学、转录以及转录后水平广泛参与细胞生物学过程。非编码RNA(ncRNA)是无法被翻译成蛋白质的RNA。分为两大类：小RNA(＜200NT)和lncRNAs。小ncRNA包括小分子RNA，siRNA和DNA，已经被证明在胃癌发生中起着重要的作用。近年来，许多研究表明lncRNAs参与多种疾病的发生，在广泛的生物过程具有多种功能，特别是与人类癌证发病相关。研究显示：除这些已被广泛研究的编码基因外,长非编码RNA(longnoncodingRNAs,lncRNAs)的异常表达也参与肿瘤恶性进展。越来越多的研究证实，lncRNAs不仅在维持机体的正常生理功能及发育过程中发挥重要的调控作用,其异常表达与疾病的发生发展尤其是肿瘤的恶性进展有着密切的联系。一个众所周知的致癌lncRNA参与肿瘤的发病机理为HOTAIR(HOX转录反义基因RNA)，它一直被上调，确定为病人的结果强烈的预后标志物，如影响多种人类肿瘤患者的生存率。近来，有很多研究显示，lncRNA在胃癌组织中高表达，同时，表现为低表达。因此急需寻找新的lncRNAs，并探讨其对胃癌的生物学效应，以获得用于诊断和胃癌基因治疗的潜在治疗靶点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种长链非编码RNA在制备诊断胃癌的试剂以及在制备治疗胃癌药物中的应用。本专利技术采用以下技术方案：一种长链非编码RNA，NFIA-AS1，其特征在于，长度为392bp，其核苷酸序列如>NR_104180.1HomosapiensNFIAantisenseRNA1(NFIA-AS1),longnon-codingRNASEQIDNO:1GGCCATGAGAAGCTCAAGTTCACCATGAGCCACAGCAGTAAGCCATGCTTTAGCCTCTGACCTGTGCTCCAATTTTGGTACAATGATTTCTGCCATGTTCTCCAACAGGGTGAGGAAACAGACAGCACTAAGAGAAAAAGCTGGAACTCAAAACCAAATTAACTCCAAACTTAAGTTTTCCCACTTCGACAAGAAAAGGAACTGCATGTGTTTTTCTGCCTCTTGCAGATGTATGTCATAAAAGTTGGATGCCTTCCTTTCAAGACATTTGAATGGATCACCAAATAATTACCTACTTTTCTCTCACAACTCAGATAAATAATTAAAAGGAGATATACACAGATTGGTTGCATACTTAAGAGTGAGAATCAATTAAAACAAAATTGTATGCA本专利技术还提供一种检测上述长链非编码RNA的试剂在制备诊断胃癌试剂中的应用。本专利技术还提供一种组合物，包括诊断权利要求1所述的长链非编码RNA的检测试剂。本专利技术还提供一种检测NFIA-AS1的引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO：2、3所示，即：SEQIDNO:2NFIA-AS1FACCATGAGCCACAGCAGTAA，SEQIDNO：3NFIA-AS1RCTGTTTCCTCACCCTGTTGGA。检测NFIA-AS1的引物在制备诊断胃癌药物试剂中的应用。一种试剂盒，包括上述引物；优选的，所述试剂盒中引物的浓度为0.01～0.1mol/L。一种治疗结胃癌的药物组合物，其中包括NFIA-AS1的抑制剂。进一步的，所述药物组合物中，NFIA-AS1的激动剂为NFIA-AS1的过表达质粒载体，即由限制性核酸内切酶修饰过的质粒DNA序列。技术思路本专利技术从临床组织标本、细胞、动物体内实验三个层面研究NFIA-AS1调控胃癌细胞恶性进程的作用机制，运用qPCR等分子生物学技术手段对NFIA-AS1与靶基因之间的关系作验证。有益效果1.在胃癌组织中lncRNA的表达显著下调；2.胃癌患者总生存期较短与NFIA-AS1水平下降相关(P＜0.001)；3.NFIA-AS1的表达具有抑制胃癌细胞在体外和体内增殖的作用；4.NFIA-AS1的抑制胃癌细胞的增殖是通过抑制蛋白P15的表达发挥作用的。本专利技术具有显著的科学意义：NFIA-AS1的表达在胃癌组织中显著下调；本研究的成功实施将丰富lncRNAs调控胃癌发生发展的分子机制，揭示了NFIA-AS1可作为胃诊断、预后的标志物，为临床早期胃癌临床诊治提供实验和理论依据。附图说明图1：分析NFIA-AS1在GC患者组织中的表达和及临床参数图2：NFIA-AS1与GC患者的不良预后相关图3：在体外促进胃癌细胞迁移及细胞周期图4：NFIA-AS1影响P15和P16表达水平图5：NFIA-AS1对体内肿瘤发生的影响具体实施方式下面用实施例来进一步说明本专利技术，但本专利技术并不受其限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。一、组织收集基于组织病理学分析(依据《第七版AJCC癌症分期手册》)，我们收集了42例2006年至2008年在江苏省人民医院接受诊断和手术治疗的胃癌患者。组织样本收集的均为第一时间液氮或储存在-80℃，直至RNA提取。该研究经过南京医科大学伦理委员会批准。获得所有病人的书面知情同意。二、实验设备和试剂本专利技术所使用的实验方法和研究技术：如总RNA的提取、MTT及克隆技术、细胞转染、Transwell技术、EdU实验、荧光实时定量PCR、生物信息学数据库的使用等；所需要的实验材料如抗体、试剂盒等均可商购。本专利技术团队依托南京医科大学，所需各设备，如荧光定量PCR仪、流式细胞仪、酶标仪、CO2孵箱、低温高速离心机、荧光倒置显微镜、激光共聚焦显微镜等，以及实验动物，均可直接使用。三、细胞实验1.细胞系和培养条件4种胃癌细胞(SGC7901、BGC823、HGC27，AGS)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)均购于中国科学院生物化学和细胞生物学研究所(上海，中国)。细胞培养：培养为RPMI1640或DMEM培养基，其中均含10％胎牛血清，100U/ml的青霉素，链霉素100mg/ml的链霉素；在5％CO2，37℃恒温培养箱中常规培养，每2-3天更换新鲜培养基，当细胞融合度达到80％-90％时传代。所有细胞系被短串联重复序列的DNA分析验证。2.细胞转染基于lncRNANFIA-AS1的完整序列(NCBI中NR_104180)合成NFIA-AS1的引物序列，然后克隆到载体PDNA(Invitrogen，上海，中国)。根据说明书的使用方法，以空白载体为对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长链非编码RNA，NFIA‑AS1，其特征在于，长度为392bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1GGCCATGAGAAGCTCAAGTTCACCATGAGCCACAGCAGTAAGCCATGCTTTAGCCTCTGACCTGTGCTCCAATTTTGGTACAATGATTTCTGCCATGTTCTCCAACAGGGTGAGGAAACAGACAGCACTAAGAGAAAAAGCTGGAACTCAAAACCAAATTAACTCCAAACTTAAGTTTTCCCACTTCGACAAGAAAAGGAACTGCATGTGTTTTTCTGCCTCTTGCAGATGTATGTCATAAAAGTTGGATGCCTTCCTTTCAAGACATTTGAATGGATCACCAAATAATTACCTACTTTTCTCTCACAACTCAGATAAATAATTAAAAGGAGATATACACAGATTGGTTGCATACTTAAGAGTGAGAATCAATTAAAACAAAATTGTATGCA。

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNA，NFIA-AS1，其特征在于，长度为392bp，其核苷酸序列如SEQIDNO:1GGCCATGAGAAGCTCAAGTTCACCATGAGCCACAGCAGTAAGCCATGCTTTAGCCTCTGACCTGTGCTCCAATTTTGGTACAATGATTTCTGCCATGTTCTCCAACAGGGTGAGGAAACAGACAGCACTAAGAGAAAAAGCTGGAACTCAAAACCAAATTAACTCCAAACTTAAGTTTTCCCACTTCGACAAGAAAAGGAACTGCATGTGTTTTTCTGCCTCTTGCAGATGTATGTCATAAAAGTTGGATGCCTTCCTTTCAAGACATTTGAATGGATCACCAAATAATTACCTACTTTTCTCTCACAACTCAGATAAATAATTAAAAGGAGATATACACAGATTGGTTGCATACTTAAGAGTGAGAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆志斌，
申请(专利权)人：南京市浦口区中心医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32