用于区分胰腺癌和慢性胰腺炎的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种用于体外检测胰腺癌/慢性胰腺炎的组合物，所述组合物包括：1)用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化水平的核酸，所述目标基因选自人类碱性核蛋白1基因或其片段，和人类去解联金属蛋白酶1基因或其片段；2)用于检测β‑肌动蛋白基因的至少一个区域的核酸；和3)用于检测CA‑199抗原在血清/血浆中的浓度的试剂。本发明专利技术还提供了包括所述组合物的试剂盒。以及一种对胰腺癌进行体外检测的方法。本发明专利技术提供的方法，能够有效区分胰腺癌和非胰腺癌(包括正常和慢性胰腺癌)，避免了对慢性胰腺炎的误判，提高了检测的准确性，有效增强了临床应用性。因此本发明专利技术，提供了一种无创、快速的胰腺癌的体外检测方法。

Compositions for the differentiation of pancreatic cancer and chronic pancreatitis and their uses

The present invention provides a composition for detection of pancreatic cancer / chronic pancreatitis in vitro, including: 1) nucleic acid for detection of methylation level in at least one region of the target gene, the target gene is selected from the human basic nuclear protein 1 gene or its fragment, and the human demorylation of the metalloproteinase 1 gene or its tablet. Paragraph 2; nucleic acids used to detect at least one region of the beta actin gene; and 3) a reagent for detecting the concentration of antigen CA 199 in serum / plasma. The invention also provides a kit comprising the compositions. And a method for in vitro detection of pancreatic cancer. The method provided by the present invention can effectively distinguish pancreatic cancer and non pancreatic cancer (including normal and chronic pancreatic cancer), avoid the misjudgment of chronic pancreatitis, improve the accuracy of the detection, and effectively enhance the clinical application. Therefore, the invention provides a non-invasive and rapid detection method for pancreatic cancer in vitro.

【技术实现步骤摘要】
用于区分胰腺癌和慢性胰腺炎的组合物及其用途
本专利技术属于医学检测领域，涉及一种组合物在疾病检测中的用途，具体地涉及一种组合物及其相应试剂盒在制备用于区分胰腺癌和慢性胰腺炎的装置中的用途。
技术介绍
胰腺癌是一种恶性程度高，检测和治疗困难的消化道恶性肿瘤。胰腺癌死亡率高的原因是早期胰腺癌的确诊率极低。从胰腺癌病灶开始形成到患者出现临床症状的过程平均需要2-3年。充分利用这个窗口期，提高早期胰腺癌的确诊率，有望提高胰腺癌治疗效果、降低胰腺癌死亡率。申请号为201510884161.6的中国专利申请“用于检测胰腺癌的组合物及其用途”公开了一种用于检测胰腺癌的组合物及其相应的试剂盒和用途。这种组合物及其相应的试剂盒检测胰腺癌的灵敏性为78.9％，检测正常对照的特异性为75％。胰腺癌的检测方法需要良好的敏感性和特异性，同时也需要能够区分胰腺癌和胰腺良性病变，如：慢性胰腺炎。慢性胰腺炎在胰腺癌检测时被误诊为胰腺癌，将会导致进一步的过度诊断，甚至过度治疗，给患者带来不必要的生理、心理和经济负担。但是现有的研究中，往往专注于胰腺癌检测的敏感性，忽略了其检测中可能存在的由于对胰腺炎的错误判断而导致的假阳性较高的问题，给患者带来不必要的生理、心理和经济负担。基于此，提供一种能够有效区分胰腺癌和慢性胰腺炎辅助检测手段，以有效区分胰腺癌和慢性胰腺炎是十分必要的。
技术实现思路
基于以上目的，本专利技术提供了一种组合物和相应试剂盒，本专利技术还提供了该组合物和试剂盒在制备用于区分胰腺癌和慢性胰腺炎的装置中的用途。此外，本专利技术还提供了基于上述组合物及其相应的试剂盒来区分胰腺癌和慢性胰腺炎方法。根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种组合物在制备用于区分胰腺癌和慢性胰腺炎的装置中的用途，所述组合物包括：1)用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化水平的核酸，所述目标基因选自人类碱性核蛋白1基因(Basonuclin1，BNC1)或其片段，和人类去解联金属蛋白酶1基因(ADAMmetallopeptidasewiththrombospondintype1motif1，ADAMTS1)或其片段；2)用于检测β-肌动蛋白基因(actinbeta，ACTB)的至少一个区域的核酸；和3)用于检测CA-199抗原在血清/血浆中的浓度的试剂。根据本专利技术的某些优选的实施方案，所述组合物包括用于检测BNC1基因或其片段，和ADAMTS1基因或其片段中的每一个的至少一个区域内甲基化水平的核酸。通过对目标基因的甲基化检测结果来检测胰腺癌/慢性胰腺炎。优选地，所述BNC1基因或其片段的至少一个区域包括所述基因的至少15个核苷酸的片段，其中包含至少一个CpG二核苷酸序列；所述ADAMTS1基因或其片段的至少一个区域包括所述基因的至少15个核苷酸的片段，其中包含至少一个CpG二核苷酸序列。CpG的甲基化状态表明所述疾病的检测结果。优选地，所述核酸选自引物和/或探针，优选地，所述引物和/或探针选自以下序列：BNC1正向引物:SEQIDNO:1:AATAAGTGTTTTTAAGTTCGGCGGGBNC1反向引物：SEQIDNO:2:AACGCAACTAAAACGAAACCGTAACBNC1探针:SEQIDNO:3:TTCGCGTCGGTCGTCGGCGTADAMTS1正向引物:SEQIDNO:4:GTGAGTAATATCGTAGTTAAGGCGGADAMTS1反向引物：SEQIDNO:5:CTAAAACAAAAAACGCTCTAAAACGADAMTS1探针:SEQIDNO:6:GGCGTTAGGTATTAATTTTCGCGTTACTB正向引物:SEQIDNO:7:GGTGATGGAGGAGGTTTAGTAACTB反向引物：SEQIDNO:8:CCAATAAAACCTACTCCTCCCTTACTB探针：SEQIDNO:9:CCACCACCCAACACACAATAACAAAC优选地，所述组合物还包括将基因的5位未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶或在杂交性能方面可检测地不同于胞嘧啶的其他碱基的试剂。优选的试剂是亚硫酸氢盐。优选地，所述用于检测CA-199抗原在血清/血浆中的浓度的试剂为酶联免疫吸附试剂(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)；其中，所述试剂包括CA-199抗原的特异性抗体；更优选地，所述试剂为“三明治式”酶联免疫吸附试剂；进一步优选地，所述试剂包括CA-199抗原的特异性抗体包被的反应板、CA-199抗原酶结合物、底物液、洗液、终止液。根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种综合评估BNC1基因甲基化水平、ADAMTS1基因甲基化水平和CA-199抗原在血清/血浆中的浓度的方法，其采用包括上述组合物的装置，例如试剂盒对BNC1基因甲基化水平、ADAMTS1基因甲基化水平和CA-199抗原在血清/血浆中的浓度的检测结果，进行综合评估来区分胰腺癌和和慢性胰腺炎。根据本专利技术的某些优选的实施方案，所述目标基因的甲基化水平是通过测量目标基因甲基化DNA在总DNA中的含量来评估的。优选地，目标基因甲基化是利用上述核酸混合物，通过实时定量PCR对目标基因(BNC1和ADAMTS1)进行测量的；总DNA是利用上述核酸混合物，通过利用实时定量PCR对内参基因(ACTB)进行测量的；目标基因甲基化DNA在总DNA中的含量是通过目标基因PCR检测的循环阈值(Ct)和内参基因PCR检测的循环阈值(Ct)之差(delta-CT，ΔCT)来评估的。根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种对胰腺癌和慢性胰腺炎进行体外区分的方法，所述方法包括以下步骤：1)分离待测生物样品中BNC1基因、ADAMTS1基因和ACTB基因的核酸；2)定量检测BNC1基因和ADAMTS1基因中至少一个区域内的甲基化水平；优选地，使用实时定量PCR方法；3)定量检测ACTB基因；优选地，使用实时定量PCR方法；4)检测CA-199抗原在血清/血浆中的浓度水平；优选地，使用ELISA方法检测；5)通过所述BNC1、ADAMTS1和ACTB检测结果和CA-199抗原在血清/血浆中的浓度水平检测结果来对胰腺癌和慢性胰腺炎进行体外区分；判断公式为Logit＝Constant-A*ΔCT(BNC1)-B*ΔCT(ADAMTS1)+C*CA199；其中，0.107<Constant<57.966、0.746<A<1.140、0.689<B<1.117、0.949<C<1.102；优选的，Constant＝2.495，A＝0.922，B＝0.877，C＝1.023。优选地，对逻辑回归的结果的判读是通过受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve，简称ROC曲线)来选择的；优选地，作为判读阈值的logit＝0.80：当logit≥0.80，检测结果为阳性；当logit<0.80，检测结果为阴性。利用多种标记物联合检测的常用方法为：定量(或定性)检测多种标记物指标，之后与各检测指标的评估阈值比较而得到各项检测的逻辑判断值，最后对多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物在制备用于区分胰腺癌和慢性胰腺炎的装置中的用途，所述组合物包括：1)用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化水平的核酸，所述目标基因选自人类碱性核蛋白1基因(Basonuclin 1，BNC1)或其片段，和人类去解联金属蛋白酶1基因(ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif 1，ADAMTS1)或其片段；2)用于检测β‑肌动蛋白基因(actin beta，ACTB)的至少一个区域的核酸；和3)用于检测CA‑199抗原在血清/血浆中的浓度的试剂。

【技术特征摘要】
1.一种组合物在制备用于区分胰腺癌和慢性胰腺炎的装置中的用途，所述组合物包括：1)用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化水平的核酸，所述目标基因选自人类碱性核蛋白1基因(Basonuclin1，BNC1)或其片段，和人类去解联金属蛋白酶1基因(ADAMmetallopeptidasewiththrombospondintype1motif1，ADAMTS1)或其片段；2)用于检测β-肌动蛋白基因(actinbeta，ACTB)的至少一个区域的核酸；和3)用于检测CA-199抗原在血清/血浆中的浓度的试剂。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述组合物包括用于检测BNC1基因或其片段，和ADAMTS1基因或其片段中的每一个的至少一个区域内甲基化水平的核酸；优选地，所述BNC1基因或其片段的至少一个区域包括所述基因的至少15个核苷酸的片段，其中包含至少一个CpG二核苷酸序列；所述ADAMTS1基因或其片段的至少一个区域包括所述基因的至少15个核苷酸的片段，其中包含至少一个CpG二核苷酸序列。3.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述核酸选自引物和/或探针；优选地，所述引物和/或探针选自以下序列：BNC1正向引物:SEQIDNO:1:AATAAGTGTTTTTAAGTTCGGCGGGBNC1反向引物：SEQIDNO:2:AACGCAACTAAAACGAAACCGTAACBNC1探针:SEQIDNO:3:TTCGCGTCGGTCGTCGGCGTADAMTS1正...

【专利技术属性】
技术研发人员：马竣，周光朋，韩晓亮，宋乐乐，王建铭，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，博诚研究中心，
类型：发明
国别省市：北京,11