一种NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的制备方法，属于基因工程和遗传修饰技术领域。本发明专利技术首次将NOD遗传背景小鼠中的ApoE和LDLR基因进行同时敲除，获得了NOD遗传背景小鼠的能产生动脉粥样硬化的基因敲除小鼠模型。本发明专利技术获得NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的主动脉有明显的动脉粥样硬化斑块形成，与传统经典的动脉粥样硬化模型C57B/L6背景ApoE基因敲除小鼠相比，其发病程度一致，本发明专利技术的方法为研究者提供一种全新的NOD遗传背景动脉粥样硬化的基因敲除小鼠模型，对动脉粥样硬化的基础理论研究和临床诊断治疗具有十分重要的应用价值。

Preparation of an atherosclerotic mouse model with NOD genetic background

The invention relates to a method for preparing an atherosclerotic mouse model with NOD genetic background, which belongs to the field of genetic engineering and genetic modification. For the first time, the ApoE and LDLR genes in the NOD genetic background mice were knocked out at the same time, and the gene knockout mice model that could produce atherosclerotic atherosclerosis in the NOD genetic background mice was obtained. The aorta of the atherosclerotic mouse model of the NOD genetic background has obvious atherosclerotic plaques in the aorta, which is the same as that of the traditional classic atherosclerotic model C57B/L6 background ApoE gene knockout mice. This method provides a new NOD genetic background movement for the researchers. The atherosclerotic knockout mouse model is of great value to the basic theory research and clinical diagnosis and treatment of atherosclerosis.

【技术实现步骤摘要】
一种NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的制备方法
本专利技术涉及一种NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的制备方法，属于基因工程和遗传修饰

技术介绍
动脉粥样硬化是心脑血管疾病发生的主要原因之一，对其机理进行深入研究将有助于解决心脑血管疾病治愈困难、死亡率高的难题。NOD小鼠为非肥胖糖尿病品系，30周龄时糖尿病累计发病率雌雄分别为60～80％和20～30％，雌鼠有胰岛素依赖性糖尿病，临床症状与人类I型糖尿病相当类似，NOD小鼠是I型糖尿病研究和人源化模型建立中使用最为广泛的小鼠品系，但NOD遗传背景小鼠基因敲除模型仍极其缺乏，特别是在动脉粥样硬化研究领域。已经有研究结果表明，NOD遗传背景小鼠对动脉粥样硬化疾病具有很强的抗性(KerenP,GeorgeJ,KerenG,HaratsD:Non-obesediabetic(NOD)miceexhibitanincreasedcellularimmuneresponsetoglycated-LDLbutareresistanttohighfatdietinducedatherosclerosis.Atherosclerosis本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的制备方法，其特征在于：包括：将NOD小鼠中ApoE基因和LDLR基因同时敲除后，即得。

【技术特征摘要】
1.一种NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的制备方法，其特征在于：包括：将NOD小鼠中ApoE基因和LDLR基因同时敲除后，即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在敲除所述ApoE基因时采用CRISPR/Cas9系统，选择3个靶序列，分别如下所示：ApoE-sgRNA1：5‘-CCTAGCCGAGGGAGAGCCGGAGG-3’；ApoE-sgRNA2：5‘-GTAATCCCAGAAGCGGTTCAGGG-3’；ApoE-sgRNA3：5‘-CTTCTGGGATTACCTGCGCTGGG-3’。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：在敲除所述LDLR基因时采用CRISPR/Cas9系统，选择3个靶序列，分别如下所示：LDLR-sgRNA1：5‘-TCCATCACACACAAACTGCGGGG-3’；LDLR-sgRNA2：5‘-AGTTGCAGCGGAAGTGGGCGGGG-3’；LDLR-sgRNA3：5‘-CAGTCTTTGGGCCTGCGACGGGG-3’。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：在共同敲除ApoE基因和LDLR基因时，合成7条引物，通过PCR扩增得到6个双链DNA；将所述6个双链DNA转录成6个sgRNAmRNA，将所述6个sgRNAmRNA与Cas9mRNA共同注射入小鼠受精卵细胞中，得到双基因敲除受精卵细胞；将所述双基因敲除受精卵细胞移植进入假孕雌鼠输卵管，出生后获得F0小鼠；所述引物分别如下所示：ApoE-IVT-1：TTAATACGACTCACTATAGGGCCTAGCCGAGGGAGAGCCGGGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAG；ApoE-IVT-2：TTAATACGACTCACTATAGGGGTAATCCCAGAAGCGGTTCAGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAG；ApoE-IVT-3：TTAATACGACTCACTATAGGGCTTCTGGGATTACCTGCGCTGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAG；LDLR-IVT-1：TTAATACGACTCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁银明，张黎琛，卢燎勋，王旭刚，黄蓉，晁天柱，郑前前，罗静，谷妍蓉，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：河南,41