一种制备4-羟基-L-苏氨酸的工艺制造技术

本发明专利技术涉及生化技术领域，公开了一种固定化酶串联法制备4‑羟基‑L‑苏氨酸的工艺。本发明专利技术利用L‑苏氨酸致活酶耦合L‑苏氨酸醛缩酶至完全转化，采用Adk和PaP或其融合蛋白酶与廉价的多聚磷酸适时循环再生ATP，反应过程简单、操作方便、产品质量稳定，较好的实现了原料的连续转化以及辅酶ATP的再生，配合稳定的固定化酶，能循环利用多次，从而大大的降低了生产成本。本发明专利技术工艺有效的避免了化学合成技术里的多步基团保护、手性拆分等繁琐过程，同时也避免了微生物发酵所带来的代谢物、蛋白等杂质对后期产品纯化的影响，非常适合工业化大规模生产。

A process for the preparation of 4- hydroxyl -L- threonine

The invention relates to the field of biochemical technology, and discloses a process for preparing 4 hydroxyhydroxyl L threonine by immobilized enzyme series method. The invention utilizes the L threonine induced enzyme coupling L threonine aldolase to complete transformation, uses Adk and PaP or its fusion protease and cheap polyphosphoric acid to recycle ATP in time. The reaction process is simple, the operation is convenient, the quality of the product is stable, and the continuous conversion of raw materials and the regeneration of coenzyme ATP are achieved, and the coordination is stable. The immobilized enzyme can be recycled many times, thus greatly reducing the production cost. The process of the invention effectively avoids the complicated process of multi step group protection and chiral separation in chemical synthesis technology, and also avoids the influence of the metabolites and proteins caused by microbial fermentation on the purification of the later product, which is very suitable for large-scale industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种制备4-羟基-L-苏氨酸的工艺
本专利技术涉及生化
，具体涉及一种制备4-羟基-L-苏氨酸的工艺。
技术介绍
4-羟基-L-苏氨酸是一种羟基化的氨基酸，分子式为C4H9NO4，分子量为135。L-苏氨酸是一种必需的氨基酸，主要用于医药、化学试剂、食品强化剂、饲料添加剂等方面。而羟基化的苏氨酸在自然界不多，主要存在于假单胞菌(pseudomonas)生物体内。不少文献报道羟基化的氨基酸也可以被广泛用作食品、饲料添加剂，治疗糖尿病的有效成分，以及一些化学工业品的起始原料；因此廉价、批量生产此类化合物为其推广应用打好基础。4-羟基-L-苏氨酸的合成主要有化学合成法、氧化酶合成法、生物发酵法等，工业上常用的化学合成法利用甘油醛或者D-甘露糖醇经过多步保护、功能化以及手性拆分制备，合成工艺繁琐、最终收率低、环境污染大(化学路线I，II)；少量文献报道利用特定氧化酶直接羟基化L-苏氨酸生成4-羟基-L-苏氨酸，但是该方法由于氧化酶自身结构的不稳定、活性中心铁(FeII)循环再生的复杂性以及高产物浓度对酶活性的抑制作用等缺陷而严重的制约其放大应用；个别文献也报道了利用绿脓杆菌(pseud本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备4‑羟基‑L‑苏氨酸的工艺，其特征在于，包括：步骤1、羟基乙醛与甘氨酸在L‑苏氨酸醛缩酶的催化下生成4‑羟基‑L‑苏氨酸；步骤2、步骤1中的4‑羟基‑L‑苏氨酸在ATP、苏氨酸致活酶的催化下生成4‑羟基磷酸‑L‑苏氨酸和ADP；步骤3、步骤2中的ADP在多聚磷酸、腺苷酸激酶与多聚磷酸‑AMP磷酸转移酶的催化下生成ATP，重新进入到步骤2中；步骤2中的4‑羟基磷酸‑L‑苏氨酸与钠盐生成4‑羟基磷酸‑L‑苏氨酸钠，然后在焦磷酸水解酶的催化下生成4‑羟基‑L‑苏氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种制备4-羟基-L-苏氨酸的工艺，其特征在于，包括：步骤1、羟基乙醛与甘氨酸在L-苏氨酸醛缩酶的催化下生成4-羟基-L-苏氨酸；步骤2、步骤1中的4-羟基-L-苏氨酸在ATP、苏氨酸致活酶的催化下生成4-羟基磷酸-L-苏氨酸和ADP；步骤3、步骤2中的ADP在多聚磷酸、腺苷酸激酶与多聚磷酸-AMP磷酸转移酶的催化下生成ATP，重新进入到步骤2中；步骤2中的4-羟基磷酸-L-苏氨酸与钠盐生成4-羟基磷酸-L-苏氨酸钠，然后在焦磷酸水解酶的催化下生成4-羟基-L-苏氨酸。2.根据权利要求1所述工艺，其特征在于，步骤1为：羟基乙醛与甘氨酸在L-苏氨酸醛缩酶以及吡哆醛磷酸盐的催化下生成4-羟基-L-苏氨酸。3.根据权利要求1所述工艺，所述步骤1-3以Tris-盐酸缓冲液为反应溶剂。4.根据权利要求1所述工艺，所述步骤1-3在pH值6.0-8....

【专利技术属性】
技术研发人员：黄华，王俊梅，张新帅，何遂平，刘建，
申请(专利权)人：深圳瑞德林生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44