一种磷酸肽固相萃取小柱及制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种基于离心辅助的磷酸肽固相萃取小柱的制备方法。通过离心辅助的方法，将合成的固定钛离子亲和色谱填料填入靠近吸液口处带有筛板的移液器吸头中制备成磷酸肽固相萃取小柱，并将小柱用于蛋白质组样品酶解液中磷酸肽的富集。该磷酸肽固相萃取小柱制备方法简单，成本低，容易操作，对磷酸肽的富集特异性高。

【技术实现步骤摘要】
一种磷酸肽固相萃取小柱及制备和应用
本专利技术属于蛋白质组学研究方向复杂生物样品预处理方法
，具体涉及磷酸肽固相萃取小柱的制备方法及其应用。
技术介绍
蛋白质磷酸化修饰是指由蛋白质激酶催化的，把ATP上的磷酸基转移到蛋白质氨基酸残基上的过程，是生物体内重要的共价修饰方式之一，也是目前研究的最为透彻的一种翻译后修饰。蛋白质的磷酸化与去磷酸化这一可逆过程调节着包括细胞的增殖、细胞分化、信号传导，细胞动态平衡等生命活动(文献1.Yi,T.；Zhai,B.etal.Quantitativephosphoproteomicanalysisrevealssystem-widesignalingpathwaysdownstreamofSDF-1/CXCR4inbreastcancerstemcells,PNAS,111,E2182-2190(2014).文献2.Humphrey,S.；Azimifar,S.etal.High-throughputphosphoproteomicsrevealsinvivoinsulin445signalingdynamics,Nat.Biotechnol.3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磷酸肽固相萃取小柱，其特征在于：将固定钛离子亲和色谱填料装填入靠近吸液口处带有筛板的移液器吸头中构成磷酸肽固相萃取小柱。

【技术特征摘要】
1.一种磷酸肽固相萃取小柱，其特征在于：将固定钛离子亲和色谱填料装填入靠近吸液口处带有筛板的移液器吸头中构成磷酸肽固相萃取小柱。2.根据权利要求1所述的磷酸肽固相萃取小柱，其特征在于：所述固定钛离子亲和色谱填料粒径为10-200μm；用于作为固相萃取柱管的移液器吸头体积是10μL-1mL,填料装填高度是0.1-2cm；筛板的材质为多聚四氟乙烯，直径为0.05-10cm，厚度0.1-0.5cm，孔径5-20μm，孔隙率5-30％。3.根据权利要求1所述的磷酸肽固相萃取小柱，其特征在于：所述移液器吸头为GELoader吸头。4.根据权利要求1或2所述磷酸肽固相萃取小柱，其特征在于，固定钛离子亲和色谱填料的制备方法如下：(1)将0.1-10g聚乙烯醇分散到10-500mL去离子水中得到分散介质；(2)将1-100mL甲苯，1-100mL乙二醇二甲基丙烯酸酯，1-100mL甲基丙烯酸缩水甘油酯和0.1-10g过氧化苯甲酰混合得到单体相；(3)将步骤(2)的单体相加入步骤(1)的分散介质中在10-200℃下加热并搅拌2-24h得到高分子微球；(4)将步骤(3)得到的高分子微球与10-300mL乙二胺反应得到表面带有氨基的高分子微球；(5)将步骤(4)得到的表面带有氨基的高分子微球与1-20mL磷酸反应，随...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶明亮，姚亚婷，董靖，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21