一种银香菊组织培养快繁体系建立的方法技术

本发明专利技术涉及一种银香菊茎段组织培养快繁体系建立的方法，属于生物技术领域植物组织培养范畴。包括以下几个步骤：(1)外植体的选取与灭菌；(2)愈伤组织的诱导；(3)丛生芽的分化与增殖；(4)生根培养；(5)银香菊再生植株炼苗与移栽。本方法采用银香菊茎段为外植体，通过调节MS培养基中特定激素的种类与浓度，成功建立了银香菊组织培养快繁体系。该方法获得外植体容易，组培操作简单，具有培养周期短，繁殖系数高等特点，为进一步实现工业化生产奠定基础。

Establishment of a rapid propagation system for tissue culture of Chrysanthemum Chrysanthemum

The invention relates to a method for establishing a rapid propagation system for stem tissue culture of Chrysanthemum morifolium, and belongs to the field of plant tissue culture in biotechnology. The following steps are included: (1) the selection and sterilization of explants; (2) induction of callus; (3) differentiation and proliferation of cluster buds; (4) rooting culture; (5) regenerated plantlets of chrysanthemum chrysanthemum and transplanting. In this method, the stem segments of chrysanthemum chrysanthemum were used as explants. The rapid propagation system of Chrysanthemum Chrysanthemum tissue culture was successfully established by regulating the species and concentration of specific hormones in the MS medium. It is easy to obtain explants, simple tissue culture, short period of culture and high propagation coefficient, which lays the foundation for further industrialization.

【技术实现步骤摘要】
一种银香菊组织培养快繁体系建立的方法
本专利技术涉及一种银香菊组织培养快速繁育方法，属于植物组织培养

技术介绍
植物组织培养技术，又称为离体培养，是指在无菌环境下利用人工培养条件，对植物器官、细胞、原生质体等组织进行培养，并使之生长、发育再生出完整植株的过程。其原理是根据植物细胞的全能性，既植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。植物组织培养具有生长周期短，繁殖率高，培养条件可以人为控制，管理方便等优点。由于其生产方法的独特，使组织培养技术对植物资源的保质、保纯和反季节生产有着特殊作用，同时，采用组织培养技术可以直接诱变和筛选出具有抗病、抗炎等优良性状的品种，因而为植物资源的工厂化生产奠定基础。银香菊[Santolinachamaecyparissus]，别名为银灰菊，俗称圣麻菊、香绵菊、棉杉菊。菊科，神圣亚麻属植物，银灰菊原产于地中海地区，在原产地国家有较多的野生种及自然群落分布，一些银灰菊品种在印度等南亚国家广有栽培(高橋章，1998)，我国长江以南的部分地区也有栽植。银香菊为常绿多年生草本，株高50厘米，枝叶密集，新梢柔软，具灰白柔毛，叶银灰色花黄色。喜光，耐热，忌土壤湿涝。在遮荫和潮湿环境叶片淡绿色。花朵黄色，如纽扣，花期6-7月。由于银香菊植株具有刺激性香味，因此常被作为具有驱蚊功效的传统芳香植物来种植，欧洲一些国家很早就有用银香菊做香囊防蚊虫叮咬的习惯，也有在住宅或者牲畜棚周围种植银香菊以驱蚊的记载(刘禺卿，2008)。目前银香菊在中国主要作为园林地被植物或盆栽芳香花草来种植，其繁殖方法主要以种子繁殖、扦插繁殖为主，因其繁殖方法受到季节限制，且扦插繁殖需要大量的母本，难以满足日益增长的市场需求，因此，植物组织培养技术作为一种快速繁殖的培养方式不仅可以克服自然气候的影响，而且能够为植物育种研究提供材料和技术支持而受到越来越多的关注。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种银香菊的组培快繁方法。本专利技术以银香菊的茎段为外植体，通过不定芽和愈伤组织的诱导培养、分化培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了银香菊的离体再生植株，建立了有效的银香菊组培快繁技术体系，具有较高的应用价值。为达到上述目的，本专利技术包括以下的步骤：(1)外植体的消毒：选择生长状况较好的幼嫩枝条为外植体，置于自来水下流动冲洗30min，自然风干后放在超净台中，首先用75％乙醇浸洗30s，无菌水漂洗4次，再用0.1％HgCl2溶液浸洗8min，无菌水漂洗4次。将枝条修剪成1cm左右的茎段接种于诱导培养基中，培养温度为25℃，每天光照16h，光照强度1800Lx，培养10天后统计污染率；(2)愈伤组织诱导：将无菌外植体接种至愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养，培养温度为25℃，每天光照16h，光照强度1800Lx，培养30天后统计愈伤组织诱导率；(3)分化诱导与增殖培养：将步骤(2)中诱导出的愈伤组织接种到分化培养基中进行分化培养，接种后在温度为25℃，每天光照16h，光照强度1800Lx条件下，培养40天后统计愈伤组织生长情况；当分化出的芽长至1-2cm高时，将其分成单株后转入增殖培养基中进行增殖培养，培养条件不变，30天后统计增殖情况；(4)生根培养：待步骤(3)增殖培养获得的丛生芽长至4cm高时，将其转移至生根培养基中进行生根培养，培养条件为每天光照16h，光照强度1800Lx，培养温度为25℃，30后统计生根率；(5)再生植株炼苗与移栽：将银香菊再生植株移栽入无菌基质(蛭石：珍珠岩：黏土＝3:2:1)中进行培养。根据苗的状态适量浇水，经炼苗30天后的组培苗可移到室外自然生长。附图说明图1为本专利技术所述银香菊组织培养的外植体；图2为本专利技术所述银香菊组织培养诱导的愈伤组织；图3为本专利技术所述银香菊愈伤组织分化丛生芽；图4为本专利技术所述银香菊经壮苗培养的丛生芽；图5为本专利技术所述银香菊组织培养诱导生根；图6为本专利技术所述银香菊组织培养再生植株移栽。具体实施方式本专利技术提供一种银香菊的组织培养快速繁育方法,结合以下具体实施例，对本专利技术进行详细说明。实施例1MS培养基母液的配制及银香菊组培苗培养条件的确定。(1)MS25倍大量元素母液的配制：称取硝酸钾47.5g，硝酸铵41.25g，硫酸镁9.25g，磷酸二氢钾4.25g，分别添加适量的蒸馏水，搅拌使其完全溶解，溶液混合后定容至1000mL，置于4℃保存。(2)MS100倍钙盐母液的配制：称取氯化钙22g，加入蒸馏水搅拌使其完全溶解，定容至500mL，置于4℃保存。(3)MS100倍铁盐母液的配制：称取乙二胺四乙酸二钠1.865g和硫酸亚铁1.39g，先将乙二胺四乙酸二钠加热煮沸，然后边搅拌边慢慢的倒入含有硫酸亚铁的溶液，使其成透亮的黄色液体，加入蒸馏水定容至500mL，避光置于4℃保存。(4)MS1000倍微量元素母液的配制：分别称取硼酸3.1g，硫酸锰8.45g，硫酸锌4.3g，钼酸钠0.125g，硫酸铜12.5mg，氯化钴12.5mg，碘化钾0.415g，加入蒸馏水搅拌使其完全溶解，定容至500mL，避光置于4℃保存。(5)MS200倍有机元素母液的配制：分别称取甘氨酸200mg，盐酸硫胺素10mg，盐酸吡哆素50mg，加入蒸馏水搅拌使其完全溶解，定容至250mL，置于4℃保存。(6)MS200倍肌醇母液的配制：称取肌醇5g，加入蒸馏水搅拌使其完全溶解，定容至250mL，置于4℃保存。(7)培养基的灭菌：将分装好的培养基经121℃，20min高温高压灭菌后，放入超净工作台中静置使其凝固。(8)组培苗培养条件：光照时间16h/天，光照强度1800Lx，培养温度为25℃。实施例2不同消毒方法对银香菊组培苗的影响。表1不同消毒方法对银香菊组培苗的影响选择健康生长的银香菊幼嫩枝条为外植体，自来水流动冲洗30min，自然风干后放入超净台中，如表1所示，采用不同方法对银香菊茎段表面进行消毒，当使用75％乙醇消毒10s、0.1％升汞消毒4min时，银香菊组培苗的污染率达到25％。当使用75％乙醇消毒30s、0.1％升汞消毒8min时，银香菊组培苗的污染率为0，说明不同时间对银香菊外植体消毒效果会产生显著影响。因此，银香菊茎段的最佳消毒方法为75％乙醇消毒30s、0.1％升汞消毒8min。实施例3不同种类及浓度的植物生长调节剂对银香菊愈伤组织分化的影响。表2不同种类及浓度的植物生长调节剂对银香菊愈伤组织分化的影响由表2可以看出不同种类及浓度的植物生长调节剂的结合对银香菊愈伤组织及不定芽诱导会产生显著影响，当6-BA和2，4-D结合使用时，既可诱导出愈伤组织又可诱导出不定芽；当使用6-BA0.5mg/L+2，4-D2.0mg/L时，愈伤组织诱导率为83.3％，虽然愈伤组织不能被完全诱导，但其生长快速且状态良好，因此，选择该浓度的植物生长调节剂进行愈伤组织的诱导。当使用6-BA0.5mg/L+2，4-D0.1mg/L时，诱导出少量愈伤组织，同时，这一激素浓度下的银香菊不定芽的诱导率也较高，且不定芽生长速度快，因此，选择该浓度的植物生长调节剂进行银香菊不定芽的诱导。实施例4不同种类和浓度的植物细胞分裂素对银香菊愈伤组织分化的影响。表3不同浓度的植物细胞分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种银香菊的组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：外植体的消毒；愈伤组织诱导；分化诱导与增殖培养；生根培养；再生植株炼苗与移栽。

【技术特征摘要】
1.一种银香菊的组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：外植体的消毒；愈伤组织诱导；分化诱导与增殖培养；生根培养；再生植株炼苗与移栽。2.根据权利要求1所述的一种银香菊组培快繁方法，其特征在于所述愈伤组织诱导培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+2，4-D0.05-2.0mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH值为5.8。3.根据权利要求1所述的一种银香菊组培快繁方法，其特征在于所述的分化培养基为：MS+0.1-2.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+8...

【专利技术属性】
技术研发人员：付玉杰，牛丽丽，焦骄，盖庆岩，秦启萍，王微，王慧梅，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23