The invention discloses a preparation method of a human prolactin PRL homogeneous detection kit, including: preparing a component containing a receptor and a first binding unit in combination with it, the receptor can react with the single state oxygen to produce a detectable signal, and the first binding unit can combine the first epitope of the PRL; the first marker is prepared and combined with it. The second combined unit second components, the second binding unit can combine the second epitope of the PRL, the second epitope and the first epitope are the epitopes of the same binding properties of the epitopes or different locations of the PRL. The donor and the donor and the specific binding of the first marker, which are combined with the epitope, are prepared, and the donor is prepared. A single state of oxygen can be produced in the excitation state. The kit prepared by this method can detect PRL efficiently. One
【技术实现步骤摘要】
人泌乳素检测试剂盒及其制备方法与应用
本专利技术属于生物分子检测
,涉及一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒,具体涉及一种用于检测人泌乳素的均相免疫检测试剂盒及其制备方法与应用。
技术介绍
泌乳素又称催乳素(Prolactin,PRL),由垂体前叶细胞分泌,是维持乳房正常发育和妇女哺乳期的必需条件。PRL分子量约22500Da,是一种由198个含3个链间二硫键的氨基酸组成的单链多肽。泌乳素的分泌主要由丘脑下部释放的催乳素抑制因子(多巴胺)和催乳素释放因子(五羟色胺)来控制。下丘脑促甲状腺激素释放激素(TRH)也会刺激PRL分泌,此作用可用于检测PRL存量和垂体引起的PRL不正常分泌的激发试验。泌乳素广泛参与生殖、妊娠哺乳、生长发育、物质代谢、应激反应、免疫调节等。在人类主要是促进乳腺分泌组织的发育和生长,启动和维持泌乳、使乳腺细胞合成蛋白增多。目前,血清PRL定量分析的主流方法是化学发光免疫分析,包括酶促化学发光(贝克曼公司产品)、吖啶酯化学发光(西门子公司产品)和电化学发光(罗氏公司产品)。酶促化学发光采用酶作为标记物,配合使用发光底物;吖啶酯为直接化学发光,在双氧水和碱性条件下诱导发光;电化学发光采用三联吡啶钌作为标记物,配合使用三丙胺和电极诱导发光。以上三种主流发光免疫分析方法,虽然所用标记物不同,但是具备共同特点即均属于非均相免疫分析(Heterogeneousimmunoassay)。非均相免疫分析是指抗体-抗原反应后、检测信号前,需要分离去除未参加反应的、游离状态的标记抗体。分离结合标记物和游离标记物常用的方法是固相吸附分离技术。针对PRL ...
【技术保护点】
1.一种人泌乳素均相检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述方法包括:
【技术特征摘要】
1.一种人泌乳素均相检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述方法包括:制备第一组分,所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元,所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号,所述第一结合单元能够结合人泌乳素的第一表位;制备第二组分,所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元,所述第二结合单元能够结合人泌乳素的第二表位,所述第二表位与所述第一表位是人泌乳素的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位;制备第三组分,所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物,所述供体能够在激发状态产生单线态氧。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与所述人泌乳素具有结合特异性的单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体、两种或更多种单克隆抗体混合物和多克隆抗体,优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述标记物为生物素,所述标记物的所述特异结合物为链霉亲和素。4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物,其为非粒子形式,且在含水介质中可溶;或,所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒;和/或,所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂,其为非粒子形式,且在含水介质中可溶;和/或,所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒,在光激发下能够产生单线态氧。5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法还包括:制备第一组合物,所述第一组合物包括所述第一组分和第一缓冲液;制备第二组合物,所述第二组合物包括所述第二组分和第二缓冲液;制备第三组合物,所述第三组合物包括所述第三组分和第三缓冲液;优选地,所述第一缓冲液、所述第二缓冲液与所述第三缓冲液分别独立地选自pH8.0,0.1MTris-HCl溶液。6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于:所述第一组合物的制备方法包括:步骤S1,利用碳酸盐缓冲液将所述受体稀释至4~6mg/mL,获得受体溶液;步骤S2,在所述受体溶液中加入第一抗人泌乳素抗体或其结合片段,静止后再加入用碳酸盐缓冲液稀释至8~12mg/mL的BSA溶液,获得与所述第一抗人泌乳素抗体或其结合片段结合的受体溶液;步骤S3,分离与所述第一抗人泌乳素抗体或其结合片段结合的受体溶液中的与所述第一抗人泌乳素抗体或其结合片段结合的所述受体,并加入第一缓冲溶液,获得所述第一组合物。7.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于:所述第二组合物的制备方法包括:步骤T1,将第二抗人泌乳素抗体或其结合片段置于透析袋内利用标记缓冲液进行透析,透析结束后加入生物素溶液,并补入透析缓冲液,静止,获得与生物素结合的第二抗人泌乳素抗体或其结合片段;步骤T2,将与生物素结合的第二抗人泌乳素抗体或其结合片段置于透析袋内利用透析缓冲液进行透析,透析结束后加入第二缓冲液,获得所述第二组...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵宏,强中华,李会强,刘宇卉,李临,
申请(专利权)人:北京科美生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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