一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法，该方法提取时耗时少，且重复性好，属于毛蕊异黄酮葡萄糖苷的提取领域。该方法将黄芪样品粉碎，过四号筛，取1g与3g石英砂混合；将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；用乙醇萃取，结束后，将其蒸干后，再用乙醇定容至10ml，过滤。本发明专利技术可以代替药典方法对黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行提取，以及含量检测。 1

【技术实现步骤摘要】
一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法
本专利技术属于毛蕊异黄酮葡萄糖苷的提取领域，尤其是一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法。
技术介绍
《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：供试品溶液的制备取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加乙醇溶解，转移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。该方法回流时间较长，且对技术人员的专业水平较高。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法，该方法提取时耗时少，且重复性好。为了实现上述技术效果，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法，依次包括下述步骤：步骤1：将黄芪样品粉碎，过四号筛，取1g与3g石英砂混合；步骤2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤3：用乙醇萃取，结束后，将其蒸干后，再用乙醇定容至10ml，过滤。优选地，步骤3所述的萃取参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为3次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60％。优选地，所述的ASE萃取池的体积为10ml。优选地，步骤3所述的过滤步骤所使用的滤膜为0.22μm。本专利技术与传统方法相比，具有下述优点：本专利技术曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，有论文提到使用50％乙醇提取毛蕊异黄酮葡萄糖苷相对含量较高，杂质较少，故对使用乙醇和50％乙醇进行了溶剂考察，结果显示乙醇与50％乙醇提取毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。本专利技术采用3因素3水平正交实验方案L9(33)安排实验，考察了3个因素对加速溶剂萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷过程的影响。并最终确定最佳的葡萄糖苷的快速溶剂萃取工艺。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求书做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术的权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围内。实施例11、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、ThermoU3000UHPLC液相色谱仪1.2试剂：水：符合GB/T6682规定的一级水；乙醇(CH4O)：色谱纯(液相色谱用)；醋酸(CH3COOH)：分析纯。1.3材料黄芪(产地内蒙古，批号1511100；产地甘肃，批号15081901；产地内蒙古，批号150718)均购于梧州或玉林药材市场，经广西梧州食品药品检验所副主任中药师黄蘅鉴别。对照品毛蕊异黄酮葡萄糖苷由中国生物制品检定研究院提供，批号：111920-201505。2、方法2.1对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：供试品溶液的制备取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加乙醇溶解，转移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：样品经粉碎机粉碎，过四号筛，约1g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的ASE10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移至蒸发皿中蒸干后用乙醇溶解并定容至10mL容量瓶，溶液过0.22微米滤膜后进入HPLC测定。2.3ASE萃取条件压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为3次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60％。2.4色谱条件与系统适用性试验a)仪器：Agilent1290高效液相色谱仪；b)色谱柱：ThermoSyncronisDim.(mm)AQ，1.7μm，50×2.1mm；c)柱温：40℃；d)流速：0.3mL/min；e)流动相：：乙醇-醋酸-水(35:4:65)；f)检测波长：283nm；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3000。2.5测定法照高效液相色谱法(通则0512)测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.6标准限值要求本品按干燥品计算，含毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)不得少于0.020％。2.7计算(外标法)式中CR—对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；AX—供试品的峰面积；AR—对照品峰面积。注意：使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。3、结果3.1线性关系取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液(0.06358mg/ml),分别精密吸取该溶液0.1μl、0.3μl、0.5μl、1.0μl、1.2μl进入LC测定，并依照上述方法测定。以浓度(ng)-峰面积进行线性回归，求得回归方程：y＝11.334x+22.62、R2＝0.9914,毛蕊异黄酮葡萄糖苷在6.358～76.296ng范围内呈良好的线性关系。表1毛蕊异黄酮葡萄糖苷的线性实验结果3.2重复性试验取相同批号的样品(批号：1511100)1.0g，共5份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品结果见表1，RSD为1.9％。表2重复性实验结果批号重复性1重复性2重复性3重复性4重复性5RSD％15111000.02850.02890.02770.02850.02911.9％3.3精密度和稳定性试验取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液(0.06358mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为2.3％，表明仪器精密度良好。取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，8，12h依法测定。结果黄芪甲苷峰面积的RSD为2.7％，表明供试品溶液在12h内稳定。3.4样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(3批)表3表44、讨论：4.1ASE提取溶剂的选择：在实验中曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，有论文提到使用50％乙醇提取毛蕊异黄酮葡萄糖苷相对含量较高，杂质较少，故对使用乙醇和50％乙醇进行了溶剂考察，结果显示乙醇与50％乙醇提取毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。4.2ASE提取条件的优化在上述实验基础上，我们采用3因素3水平正交实验方案L9(33)安排实验，考察了3个因素对加速溶剂萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷过程的影响。本实验确定萃取温度、静态萃取时间、循环次数为考察因素(见表5)。确定l从黄芪中提取毛蕊异黄酮葡萄糖苷的最佳快速溶剂萃取工艺，结果见表6。表5因素水平表6正交实验极差分析结果由极差分析可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法，其特征在于，依次包括下述步

【技术特征摘要】
1.一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：将黄芪样品粉碎，过四号筛，取1g与3g石英砂混合；步骤2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤3：用乙醇萃取，结束后，将其蒸干后，再用乙醇定容至10ml，过滤。2.根据权利要求1所述的一种ASE法萃取黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈学松，韦日伟，欧妮，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45