一株甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152，伯克霍尔德氏菌CZ08152的分类命名为伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)CZ08152，菌株的16S rDNA基因序列表如SEQ ID NO.1所示，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.5743。本发明专利技术能够应用于生产具有促进农作物生长以及抑制植物病害、提高植物抗逆境胁迫的微生物菌剂和生物有机肥，增强植物对逆境胁迫的抗性，对于减少化肥农药的使用、保护生态环境具有重要意义，具有广阔的应用前景。

An endophytic Burke Holder bacterium CZ08152 from sugarcane and its application

The invention discloses a sugarcane endophytic Burke Holder strain CZ08152, and Burke Holder CZ08152 is named as Burke Holder sp. CZ08152, and the 16S rDNA sequence table of the strain is shown as SEQ ID ID NO.1, the preservation unit: the common microorganism center of the China microbe preservation management committee. The preservation number: CGMCC No.5743. The invention can be applied to the production of microbial agent and bio organic fertilizer which can promote the growth of crops, inhibit plant disease, improve plant resistance to stress and enhance plant resistance to stress. It is of great significance for reducing the use of chemical fertilizers and pesticides and protecting the ecological environment. It has a broad application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一株甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152及其应用
本专利技术涉及生物
，特别涉及一株甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152及其应用。
技术介绍
广西是我国最大的蔗糖生产产区，甘蔗及蔗糖产量占全国60％以上。但是，一直以来我国甘蔗生产成本高，缺乏国际竞争力。在甘蔗生产的各项农资投入中，化肥尤其是氮肥所占比重最大，其对甘蔗产量的影响也最为显著。此外，我国甘蔗主产区蔗地90％以上为旱坡地，土壤保水、保肥能力差，化肥利用率很低。甘蔗梢腐病是一种普遍发生的甘蔗病害，原菌为串珠镰刀菌(FusariummoniliformeSheldon)，在我国的广西、广东、福建、云南等省蔗区均有该病害的发生。甘蔗梢腐病主要发病部位在甘蔗的梢头嫩叶，感病蔗叶不能正常伸展，严重时导致甘蔗梢头腐烂，致使梢头坏死，最终蔗株枯死。近年来，梢腐病在我国主要蔗区的发生呈逐渐加重的趋势，已成为甘蔗伸长期的一种主要病害，并且对甘蔗的产量和品质造成了严重的影响。蔗田里的病株残余和病株是该病害的主要初侵染源，蔗田高温高湿、长期干旱后遇雨水或灌水过多的情况下容易诱发该病害，甚至导致该病害大面积爆发流行。在我国该病害高发时期为每年的7-9月，这个时期天气高温多雨，该病害病原菌产生的分生孢子极易通过气流、雨水等在田间进行传播扩散，在适宜的温湿度条件下侵入幼嫩叶部导致蔗株发病。一直以来，我国关于甘蔗梢腐病的防治研究并不多，只是随着近年来该病发生为害的日益严重，该病害的防治及相关研究才逐步得到重视。当前，开发和使用具有生防作用的农业微生物资源已成为现代农业发展的一个方向。结合合理的农业措施、种植抗病品种以及利用生物防治方法控制甘蔗梢腐病的为害，促进甘蔗产业的健康发展是目前亟待解决的问题。洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderiacepacia)是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的革兰氏阴性杆菌，因其可以产生多种抗菌成分而成为生物防治中的主要成员。近年来的研究表明，洋葱伯克霍尔德氏菌不是一个种，而是一组表型相近但基因型不同的复合物，称为洋葱伯克霍尔德氏菌群(Burkholderiacepaciacomplex，简称BCC)，至今已发现BCC包括20个不同的基因型，由于这些基因型之间有很低的DNA杂交率，因此可代表不同的种。上个世纪80年代初，人们在研究中发现部分BCC菌株可降解农药和除草剂中一些长期存在且对人有潜在致癌作用的化学物质，还可净化污水，具有非常好的生态和经济价值；同时还发现有些BCC菌株具有防治植物病虫害和促进植物生长的作用，被制成生物杀虫剂和生物杀菌剂，在农业生产中起着重要作用。但是，与此同时，人们又发现该菌的一些菌株是人体条件致病菌。欧美一些国家因其部分菌株为条件致病菌而放弃或者限制BCC生物农药的使用，但目前仍有不少国家在生产和使用以它为原料制成的生物农药，我国也于1996年注册了该类产品。目前已研究发现，BCC致病菌株与特定的毒力基因(BCESM基因)存在相关性。BCESM基因被认为是BCC菌中一种与人体致病性/毒性连锁的遗传标记，对已经注册的洋葱伯克霍尔德氏菌株，一旦发现该类标记的存在，则撤销注册。因此，通过致病因子BCESM基因的检测，可以区分BCC的致病菌株和非致病菌株。当然，为了确保BCC生防菌株使用的安全性，利用动物模型(小白鼠)或植物模型来进一步检测菌株是否有致病性也是必要的。苜蓿是用于医院呼吸道感染细菌致病性测定的模式植物。人们研究发现，苜蓿可以代替老鼠作为模式植物测定BCC菌群对哺乳动物的毒性，苜蓿模型甚至表现出了比老鼠模型更高的灵敏度。因此，用苜蓿模型可简单快捷地检测出BCC菌株对哺乳动物是否具有致病性，为安全利用BCC菌株奠定了基础。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152及其应用，能有效的防治甘蔗梢腐病，并且具有较高联合固氮以及拮抗多种病原真菌特性。为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：一株甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152，伯克霍尔德氏菌CZ08152的分类命名为伯克霍尔德氏菌(Burkholderiasp.)CZ08152，菌株的16SrDNA基因序列表如SEQIDNO.1所示，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2012年02月07日，保藏号：CGMCCNo.5743。本专利技术所提出的菌株是从广西壮族自治区崇左市郊种植的甘蔗品种新台糖22号的茎基部组织分离筛选出来的，通过无氮培养基筛选、固氮酶活性测定、固氮酶基因nifH扩增及序列分析，确定其为甘蔗内生固氮菌。菌株固氮酶活性采用乙炔还原乙烯法(acetylenereductionassay，ARA)测定，实验结果表明，本专利技术菌株具有较高固氮酶活性，其乙炔还原乙烯活性约为1752nmolC2H4/h。优选的是，所述的伯克霍尔德氏菌CZ08152在防治植物真菌性病害的病原菌中的应用，对植物真菌性病害病原菌生长具有抑制作用。优选的是，所述的伯克霍尔德氏菌CZ08152在防治植物真菌性病害的病原菌中的应用：利用平板对峙培养法测定伯克霍尔德氏菌CZ08152菌株对多种植物病原菌的拮抗作用。优选的是，所述的植物真菌性病害的病原菌为甘蔗梢腐病菌(FusariummoniliformeSheldon)、甘蔗凤梨病菌[Ceratocystisparadoxa(Dode)Moreau]、甘蔗赤腐病菌(ColletotrichumFalcatum)、甘蔗虎斑病菌(RhizoctoniasolaniKühn)、玉米大斑病菌[Exserohilumturcicum(Pass.)LeonardetSuggs]或玉米小斑病菌[Cochliobolusheterostrophus(Drechsler)Drechsler]中的一种。优选的是，所述的伯克霍尔德氏菌CZ08152在促进农作物生长中的应用。优选的是，所述的农作物为玉米或甘蔗。优选的是，所述的伯克霍尔德氏菌CZ08152在促进农作物生长中的应用，操作为：将活化后的伯克霍尔德氏菌CZ08152在LB液体培养基上培养过夜，离心收集菌体，用无菌水悬浮离心清洗2次后稀释到每毫升1×108-2×108个细胞，即得伯克霍尔德氏菌CZ08152接种菌悬液，根据不同作物将接种军悬液分别作用于作物，即得。优选的是，当农作物为玉米时，将第二片真叶完全展开的玉米秧苗置于所得接种菌悬液浸泡20分钟并移栽，即得；伯克霍尔德氏菌CZ08152促进玉米生长主要是提高了玉米对干旱胁迫的抗性，促进植株的干物质积累。优选的是，当农作物为甘蔗时，将100ml所得接种菌悬液倒入每株甘蔗苗中，即得；伯克霍尔德氏菌CZ08152促进甘蔗生长主要是提高了甘蔗的固氮作用；将甘蔗幼苗移栽到含(15NH4)2SO4的栽培基质上，并于移栽当天以及移栽7d、15d分别以伯克霍尔德氏菌CZ08152接种菌悬液接种，每株每次的接种菌液量为100mL，80d后收获植株并测定植株干重、含氮量及15N含量，计算固本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152，其特征在于：甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152的分类命名为伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)CZ08152，菌株的16S rDNA基因序列表如SEQ ID NO.1所示，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2012年02月07日，保藏号：CGMCC No.5743。

【技术特征摘要】
1.一株甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152，其特征在于：甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152的分类命名为伯克霍尔德氏菌(Burkholderiasp.)CZ08152，菌株的16SrDNA基因序列表如SEQIDNO.1所示，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2012年02月07日，保藏号：CGMCCNo.5743。2.一株如权利要求1所述的伯克霍尔德氏菌CZ08152在防治植物真菌性病害的病原菌中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152在防治植物真菌性病害的病原菌中的应用为利用平板对峙培养法测定伯克霍尔德氏菌CZ08152菌株对多种植物病原菌的拮抗作用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的植物真菌性病害的病原菌为甘蔗梢腐病菌、甘蔗凤梨病菌、甘蔗赤腐病菌、甘蔗虎斑病菌、玉米大斑病菌或玉米小斑病菌中的一种。5.根据权利要求1所述的甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152，其特征在于：所述的甘蔗内生伯克霍尔德氏菌CZ08152在促...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡春锦，曾泉，史国英，农泽梅，岑贞陆，叶雪莲，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45