一株球托霉菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株球托霉菌菌株及其应用，属于微生物应用技术领域。该菌株为球托霉菌w5菌株，保藏编号为CCTCC：M2017787。本发明专利技术将球托霉菌w5孢子配成菌剂，在植物种子萌发并长出2对真叶后，对植物进行根系浇灌，所制得的球托霉菌菌剂可以有效促进植物幼苗的生长，提高作物的抗病能力，在农业生产过程中具有应用潜力。

A strain of Aspergillus Aspergillus and its application

The invention discloses a sphere fungus and its application, belonging to the field of microbial application technology. The strain is W5, and its preservation number is CCTCC:M2017787. In this invention, the W5 spores of tubpora Aspergillus are used as a bacterial agent. After the plant seeds germinate and 2 pairs of true leaves grow, the roots of the plants are irrigated. The obtained fungi can effectively promote the growth of plant seedlings, improve the disease resistance of the crops, and have the potential of application in the process of agricultural production.

【技术实现步骤摘要】
一株球托霉菌菌株及其应用
本专利技术属于微生物应用
，涉及一株球托霉菌菌株及其应用，特别是涉及球托霉菌w5菌剂的发酵制备方法及其在促进植物生长中的应用。
技术介绍
目前，我国人均农业耕地不足1.3亩，仅为美国人均耕地面积的1/6。随着工业化、城镇化步伐加快，我国耕地数量仍在不断减少。另外，由于土壤肥力低等因素，农民为了确保高产而过量施用化学肥料。例如，当前我国粮食产量占世界的16％，化肥用量占世界的31％，每公顷用量是世界平均水平的4倍以上。长期不合理过量使用化肥，造成土壤结构变差、土壤板结、地力下降、农作物减产，农产品硝酸盐含量过高、重金属含量超标等缺陷，而大量和过量的氮肥和重金属流失于环境中，污染土壤、水体、空气，威胁人类的食物安全和健康。微生物菌肥又称作微生物接种剂，是指含有微生物活体的特定制剂，主要分为两大类，即微生物菌剂类和微生物肥料类。其中，菌剂类主要有固氮菌、根瘤菌、光合菌、解钾菌和复合菌剂等；肥料类产品即生物有机肥和复合微生物菌肥。因微生物的生命活动及其代谢产物使得植物得到特定肥效，微生物菌肥在农业可持续发展，保护生态环境方面有着良好的发展前景。与普通化学肥料比较，微生物菌肥应用于农业生产中有着独特的优势：(1)不破坏土壤结构，对人、畜等无毒无害；(2)肥效持久；(3)提高作物产量和改善其品质；(4)成本低廉。近年来，我国微生物肥料等新型肥料产业正在快速成长，年产量达到900万吨以上。目前，我国生产应用的微生物肥料按照微生物功能类别可分为固氮菌类、解磷菌类、解钾菌类、光合细菌类、菌根菌类、抗生菌类、复合菌类等，但以固氮菌类、解磷菌类、解钾菌类和复合菌类为主，而光合细菌类、菌根菌类、抗生菌类的研究较少，仅有个别有关促进植物生长的根际微生物的报道。总体上，应用细菌如细菌和放线菌作为材料开发的菌肥远远超过真菌菌肥。球托霉菌属于小克银汉霉科(FamilyCunninghamellaceae)真菌。目前，对该属真菌的研究主要集中于其壳聚糖的编码基因、壳聚糖的合成、以及部分糖苷水解酶如β-葡萄糖苷酶等的研究。在农业生物
，因该属真菌对土壤中有效氮和磷较敏感，被用于测定土壤中有效氮或磷的储存量。然而，目前为止，还没有球托霉菌属来源真菌用于促进植物生长应用的报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一株球托霉菌菌株，具有有效促进植物幼苗生长、提高作物抗病能力的作用。一种球托霉菌菌株，该菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉大学，其保藏名称为球托霉菌w5菌株，保藏编号为CCTCC：M2017787，保藏日期为2017年12月12日。依据形态学特征和分子数据分析，该菌株的分类命名为Gongronellasp.w5。本专利技术提供上述球托霉菌菌株在促进植物生长中的应用。本专利技术还提供了一种促进植物生长的球托霉菌菌剂的制备方法，制备步骤如下：取孢子浓度为1～5×108个/mL的球托霉菌菌剂，在苗木种子萌发并长出2对真叶后，按照5～15mL/株苗木浇灌根部，后续苗木按照正常田间管理即可。作为优选，本专利技术所述球托霉菌w5菌剂的孢子数为3×108/mL。作为优选，本专利技术所述制备步骤中的浇灌量为10mL/株。进一步的，制备孢子使用的发酵菌株为球托霉菌w5，经培养基发酵培养获得发酵液，发酵液经分级分离后获得所述孢子。更进一步的，所述发酵培养是指将球托霉菌w5接种在经灭菌的发酵培养基中，在温度为25～31℃、摇床转速为100～150rpm条件下培养3～7天后收集发酵液备用；所述发酵培养基为每升液体培养基中含10～20g蔗糖、1～2g酵母提取物、0.7～1.5gKH2PO4、0.02～0.15gNa2PO4·7H2O、0.01～0.05gCaCl2。作为优选，所述的发酵培养基为每升液体培养基中含15g蔗糖、1.5g酵母提取物、1gKH2PO4、0.1gNa2PO4·7H2O、0.01gCaCl2。进一步的，所述分级分离依次包括以下步骤：制备的发酵液先经过4～8层纱布过滤；再将滤液经过1000～5000×g离心力离心收集沉淀孢子。本专利技术还提供了一种采用上述制备方法制得的球托霉菌菌剂。附图说明图1是球托霉菌w5菌株处理组和对照组猕猴桃植株株高实验结果对比图；图2为JF8接种后15天植株叶片感染情况，其中，从左至右分别a为清水对照组、b为球托霉菌w5菌株处理组、c为未施用球托霉菌w5菌剂组；图3为JF8接种后15天植株枝条感染情况，其中，从左至右分别A为清水对照组，B为球托霉菌w5菌株处理组、C为未施用球托霉菌w5菌剂组。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但应该理解这些实施例并非限制本专利技术的范围。实施例1含有本专利技术球托霉菌菌剂的发酵制备1、球托霉菌w5菌株的活化斜面保藏的球托霉菌w5挑取至CPDA斜面上，28℃静置培养3天以活化菌株。2、培养基的配制及灭菌配制发酵培养基(15g蔗糖、1.5g酵母提取物、1gKH2PO4、0.1gNa2PO4·7H2O、0.01gCaCl2)，115℃灭菌20min备用。3、球托霉菌w5菌株孢子的发酵制备挑取直径活化的4mm球托霉菌w5菌丝体5块，接种到灭菌的发酵培养基中，28℃，120rpm振荡培养4d，4层纱布过滤菌丝体，收集的发酵液在2400×g离心力条件下离心收集孢子，孢子使用磷酸盐缓冲液(pH7.5)稀释成3×108/mL备用。实施例2含有本专利技术球托霉菌菌剂在促进猕猴桃植株生长方面的应用1、猕猴桃植株的盆栽种植取园艺营养土(购于裕丰花市)和普通土(安徽农业大学农翠园)按照1:1混合。培养基质于0.14MPa，120℃灭菌2小时备用。将“红阳”猕猴桃种子播种于装灭菌土的栽培盆中，共120盆。待猕猴桃长出2对真叶后进行间苗移栽，每盆留存高矮一致，生长整齐的实生苗3-5棵。2、球托霉菌w5菌剂的施用间苗移栽后，立即将球托霉菌w5孢子悬液(3×108/mL)按照10mL/株直接浇灌处理60盆猕猴桃植株根部，60盆浇灌无菌水作为对照。3、生物学性状考察记载间苗后每隔一月随机抽取对照组与处理组猕猴桃6盆，用常规方法测定植株高度，处理与对照株高有差异后，测定猕猴桃植株叶片数，茎粗，地上部分和根系鲜重，并使用根系扫描仪扫描测定猕猴桃叶面积、根面积等。施用球托霉菌w5菌剂后60天，球托霉菌w5菌株处理组和对照组猕猴桃植株株高实验结果对比图见图1，实验结果表明，处理组猕猴桃植株生长显著优于对照组。施用球托霉菌w5菌剂后60天，球托霉菌w5菌株处理组和对照组猕猴桃植株各生理指标见表1。注：t检验法进行分析，处理组与对照组相比，**表示差异极显著(P<0.01)，*表示差异显著(P<0.05)。实验结果表明，处理组猕猴桃植株叶片数、茎粗、地上部分和根系鲜重、叶面积、根面积等指标均显著优于对照组猕猴桃植株。叶绿素的测定选择从顶叶开始倒数第2对叶片，用SPAD-502叶绿素仪通过测量叶片在两种波长650nm和940nm光学浓度差方式来确定叶片当前叶绿素的相对含量；叶绿素荧光测定选择从顶叶开始倒数第2对叶片，使用叶绿素荧光仪器PAM-2000测定猕猴桃叶片叶绿素初始荧光(F0，是PSⅡ反应中心处于完全开放时的荧光产量)、最大荧光(Fm，是PSⅡ反应中心处于完全关本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株球托霉菌菌株，其特征在于，该菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏名称为球托霉菌w5菌株，保藏编号为CCTCC：M2017787。

【技术特征摘要】
1.一株球托霉菌菌株，其特征在于，该菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏名称为球托霉菌w5菌株，保藏编号为CCTCC：M2017787。2.如权利要求1所述的球托霉菌菌株在促进植物生长中的应用。3.一种促进植物生长的球托霉菌菌剂的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：取孢子浓度为1～5×108个/mL的球托霉菌菌剂，在苗木种子萌发并长出2对真叶后，按照5～15mL/株苗木浇灌根部，后续苗木按照正常田间管理即可。4.根据权利要求3所述的促进植物生长的球托霉菌菌剂的制备方法，其特征在于，制备孢子使用的发酵菌株为球托霉菌w5，经培养基发酵培养获得发酵液，发酵液经分级分离后获得所述孢子。5.根据权利要求4所述的促进植物生长...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖乐天，方泽民，王小洁，房伟，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34