抗体多肽及其用途制造技术

本发明专利技术提供了对前列腺特异性抗原(PSA)具有结合特异性的抗体多肽，其中所述抗体多肽包含(a)包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和/或(b)包含SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变区，且其中所述重链可变区和轻链可变区包含来自一种或多种人抗体的框架氨基酸序列。本发明专利技术还提供了所述抗体多肽在诊断和治疗前列腺癌中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体多肽及其用途
一般而言，本专利技术属于治疗和诊断试剂和方法的领域，具体而言在前列腺癌的领域中。
技术介绍
目前，前列腺癌是男性中最常见的癌症形式。前列腺是男性中的一种核桃大小的腺，其生成作为精液中的组分的流体。前列腺具有被组织外层包围的两个或更多个叶或部分。前列腺位于直肠前面并且刚好在膀胱下方，并且围绕尿道。前列腺癌的发生在欧洲西北部和美国是最高的。肿瘤的生长通常是长时间段期间发生的过程。前列腺癌通常是癌症的轻度形式。实际上，大多数诊断出前列腺癌的男性存活并恢复，仅少数男性遇到前列腺癌的更有侵袭性的形式，其在早期阶段中转移。前列腺癌的此种侵袭性形式仅当它在早期阶段、在癌症已经扩散至囊外组织以前得到诊断时才可以是能治愈的。现今，通常通过测量患者血液中的前列腺特异性抗原(PSA)的浓度实施前列腺癌的诊断和监测。如果PSA的浓度在不同时间点实施的几次连续测量中明显较高，则评估是存在前列腺癌的可能性。在此时间点，可以实施活组织检查以确认前列腺癌。PSA(也被称作激肽释放酶III)是一种由237个氨基酸的单链构成的蛋白质，其在前列腺的分泌细胞中生成。可以在整个前列腺腺体中发现这些分泌细胞。PSA是就前列腺癌而言完善建立并且彻底研究的标志物。通过与健康细胞比较，PSA的生成在恶性细胞中更低并且在增生细胞中更高。相当矛盾的是，实际上，PSA的浓度在患有前列腺癌的男性的血液中较高。但是，一种解释可以是恶性细胞具有恶化的细胞结构，并且因此对PSA更能透过。适合作为前列腺癌疗法的靶标的另一种重要的丝氨酸蛋白酶是人腺激肽释放酶2(hK2)。编码hK2的基因与编码PSA的基因一起位于染色体19上。就像PSA一样，hK2主要在前列腺组织中表达。在前列腺中，PSA以无活性的原形式存在，并且通过hK2的肽酶作用而活化。就hK2而言的免疫组织化学研究已经表明，hK2相对于分化水平表达。这意味着，hK2在低分化的组织(诸如经受前列腺癌的组织)中以较高的产率表达，而在高分化的组织(诸如经受良性前列腺增生(BPH)的组织，所述良性前列腺增生是另一种常见的前列腺问题)中以较低的产率表达。现今的前列腺癌疗法是外科手术(例如根治性前列腺切除术)、放射疗法(包括氯化镭-223施用、近距离放射疗法和外线束放射疗法)、高强度聚焦超声(HIFU)、化学疗法、口服化学治疗药物、冷冻手术(冷冻肿瘤)、激素疗法(诸如抗雄激素疗法)、去势或前述项的组合。但是，这些疗法(外科手术和外部放射疗法)中的大多数仅(或主要)可用于治疗原发性肿瘤和大转移灶。化学疗法用于癌症的弥散性，但是对于这些患者中的大多数，它是姑息效果和/或延长的存活。因此，其它或互补的治疗方式是必需的，以实现弥散性恶性疾病的相当大的改善，特别是在微转移灶的情况下。使用靶向性分子(诸如抗体及其片段)疗法(诸如免疫疗法或放射免疫疗法)可以给出治疗弥散性疾病的可能性。因而，需要用于治疗和诊断前列腺癌的新的治疗剂和方法。
技术实现思路
因而，本专利技术寻求单独地或以任何组合缓解、减轻或消除本领域中的一个或多个上文鉴定的缺陷和缺点，并且通过提供根据所附专利权利要求的治疗剂和方法至少解决上述问题。本专利技术的第一个方面提供了对前列腺特异性抗原(PSA)具有结合特异性的抗体多肽，其中所述抗体多肽包含：(a)包含SEQIDNO：1和SEQIDNO：2和SEQIDNO：3的氨基酸序列的重链可变区CDRH1：TTGMGVSSEQIDNO：1CDRH2：HIYWDDDKRYSTSLKSEQIDNO：2CDRH3：KGYYGYFDYSEQIDNO：3和/或(b)包含SEQIDNO：4和SEQIDNO：5和SEQIDNO：6的氨基酸序列的轻链可变区CDRL1：RASQNVNTDVASEQIDNO：4CDRL2：STSYLQSSEQIDNO：5CDRL3：QQYSNYPLTSEQIDNO：6且其中重链可变区和轻链可变区包含来自一种或多种人抗体的框架氨基酸序列。以上6种氨基酸序列代表本专利技术的抗体多肽的互补决定区(CDR)，如根据Kabat等人，(1991)SequencesofImmunologicalInterest，第5版，NIH，Bethesda，MD(其公开内容通过引用并入本文)定义的。通过“抗体多肽”，我们包括基本上完整的抗体分子、单链抗体、双抗体、双特异性抗体、抗体重链、抗体轻链、抗体重链和/或轻链的同源二聚体和异源二聚体、及其抗原结合片段和衍生物。本文中使用的术语“氨基酸”包括标准的20种遗传编码的氨基酸和它们的相应的“D”形式(与天然的“L”形式相比)的立体异构体、ω-氨基酸、其它天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如α，α-双取代的氨基酸、N-烃基氨基酸，等等)和化学上衍生的氨基酸(见下文)。当明确列举氨基酸诸如“丙氨酸”或“Ala”或“A”时，该术语表示L-丙氨酸和D-丙氨酸，除非另外明确地阐明。其它非常规氨基酸也可以是本专利技术的多肽的合适组分，只要期望的功能特性被所述多肽保留。对于显示的肽，每种编码的氨基酸残基在适当的情况下用单字母名称表示，所述单字母名称对应于常规氨基酸的俗名。在一个实施方案中，如本文中定义的多肽包含L-氨基酸或由L-氨基酸组成。本专利技术的抗体多肽表现出对PSA(且优选人PSA的成熟活性形式)的特异性。人PSA的氨基酸序列显示在下面APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP[SEQIDNO：7](其中成熟的活性PSA蛋白的序列加下划线，也参见UniProtKB登记号P07288)。在精浆中发现的大部分PSA是无活性的，并且与蛋白C抑制剂(PCI)形成复合物。也可能的是，PSA与其它胞外蛋白酶抑制剂形成复合物。体外研究表明，PSA可以结合α2-抗纤维蛋白溶酶(α2-AP)、ACT、AMG、抗-凝血酶III(ATIII)、C1-灭活剂和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)。在一个实施方案中，与PSA的复合异形体相比，所述抗体多肽对PSA的游离(即非复合)异形体具有特异性。对PSA的游离异形体具有特异性的结合部分可以对在PSA的游离异形体上暴露、但是在PSA的复合异形体上未暴露的表位具有结合特异性，并且这可以是直链或构象(也就是说，非直链)表位。例如，所述抗体多肽可以对在游离PSA中暴露并且在复合异形体(诸如在PSA与PCI形成复合物时存在于精液中的形式)中未暴露的表位具有特异性，所述表位包含作为PSA的催化裂隙的一部分的一个或多个氨基酸残基。通过“特异性”，我们意指所述抗体多肽能够在体内(即在PSA存在于人体内的生理学条件下)结合PSA。优选地，所述抗体多肽在体内不结合任何其它蛋白质。通过本领域众所周知的方法，诸如ELISA、免疫组织化学、免疫沉淀、蛋白质印本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对前列腺特异性抗原(PSA)具有结合特异性的抗体多肽，其中所述抗体多肽包含(a)包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的氨基酸序列的重链可变区；和/或(b)包含SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6的氨基酸序列的轻链可变区，且其中所述重链可变区和轻链可变区包含来自一种或多种人抗体的框架氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.05 GB 1517550.8;2015.10.29 GB 1519105.91.一种对前列腺特异性抗原(PSA)具有结合特异性的抗体多肽，其中所述抗体多肽包含(a)包含SEQIDNO：1和SEQIDNO：2和SEQIDNO：3的氨基酸序列的重链可变区；和/或(b)包含SEQIDNO：4和SEQIDNO：5和SEQIDNO：6的氨基酸序列的轻链可变区，且其中所述重链可变区和轻链可变区包含来自一种或多种人抗体的框架氨基酸序列。2.根据权利要求1的抗体多肽，其中所述抗体多肽表现出与鼠5A10抗体相比增强的肿瘤摄取。3.根据权利要求1或2的抗体多肽，所述抗体多肽包含完整抗体或由完整抗体组成。4.根据权利要求1-3中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽包含抗原结合片段或由抗原结合片段组成，所述抗原结合片段选自Fv片段(例如单链Fv和二硫键键合的Fv)、Fab-样片段(例如Fab片段、Fab’片段和F(ab)2片段)和结构域抗体(例如单个VH可变结构域或VL可变结构域)。5.根据权利要求4的抗体多肽，其中所述抗原结合片段是scFv。6.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，其中所述框架包含来自人免疫球蛋白VH4基因家族的序列。7.根据权利要求6的抗体多肽，其中所述框架序列来自VH4-28种系基因。8.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，其中所述重链可变区和/或所述轻链可变区的框架序列是非天然存在的。9.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO：8的氨基酸序列或由SEQIDNO：8的氨基酸序列组成。10.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或由SEQIDNO：9的氨基酸序列组成。11.根据权利要求9或10的抗体多肽，所述抗体多肽包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO：8的氨基酸序列或由SEQIDNO：8的氨基酸序列组成，所述轻链可变区包含SEQIDNO：9的氨基酸序列或由SEQIDNO：9的氨基酸序列组成。12.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽还包含重链恒定区或其部分。13.根据权利要求12的抗体多肽，其中所述重链恒定区属于选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的免疫球蛋白亚型。14.根据权利要求12的抗体多肽，其中所述重链恒定区属于免疫球蛋白亚型IgG1。15.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽包含重链恒定区或其部分，所述重链恒定区包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或由SEQIDNO：10的氨基酸序列组成。16.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽还包含轻链恒定区或其部分。17.根据权利要求16的抗体多肽，其中所述轻链恒定区属于κ或λ轻链。18.根据权利要求17的抗体多肽，其中所述轻链恒定区属于κ轻链。19.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽包含轻链恒定区或其部分，所述轻链恒定区包含SEQIDNO：11的氨基酸序列或由SEQIDNO：11的氨基酸序列组成。20.根据权利要求18或19的抗体多肽，所述抗体多肽包含重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或由SEQIDNO：10的氨基酸序列组成，所述轻链恒定区包含SEQIDNO：11的氨基酸序列或由SEQIDNO：11的氨基酸序列组成。21.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽包含重链，所述重链包含SEQIDNO：12的氨基酸序列或由SEQIDNO：12的氨基酸序列组成。22.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，所述抗体多肽包含轻链，所述轻链包含SEQIDNO：13的氨基酸序列或由SEQIDNO：13的氨基酸序列组成。23.根据权利要求21或22的抗体多肽，所述抗体多肽包含重链和轻链，所述重链包含SEQIDNO：12的氨基酸序列或由SEQIDNO：12的氨基酸序列组成，所述轻链包含SEQIDNO：13的氨基酸序列或由SEQIDNO：13的氨基酸序列组成。24.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，其中所述抗体多肽与治疗性部分直接地或间接地连接。25.根据权利要求24的抗体多肽，其中所述治疗性部分是细胞毒性部分，所述细胞毒性部分包含一种或多种放射性同位素或者由一种或多种放射性同位素组成。26.根据权利要求25的抗体多肽，其中所述一种或多种放射性同位素是或各自独立地选自：β-发射体、auger-发射体、转换电子-发射体、α-发射体、和低光子能量-发射体。27.根据权利要求26的抗体多肽，其中所述一种或多种放射性同位素各自独立地具有在药剂附近创建高剂量吸收的局部吸收能量的发射样式。28.根据权利要求26或27的抗体多肽，其中所述一种或多种放射性同位素各自独立地选自：长程β-发射体，诸如90Y、32P、186Re/188Re；166Ho、76As/77As、153Sm；中程β-发射体，诸如131I、177Lu、67Cu、161Tb；低能量β-发射体，诸如45Ca、35S或14C；转换或auger-发射体，诸如51Cr、67Ga、99Tcm、111In、123I、125I、201Tl、135La；和α-发射体，诸如212Bi、213Bi、223Ac和221At。29.根据权利要求28的抗体多肽，其中所述放射性同位素是111In。30.根据权利要求24的抗体多肽，其中所述治疗性部分是细胞毒性部分，所述细胞毒性部分包含一种或多种细胞毒性药物或者由一种或多种细胞毒性药物组成。31.根据权利要求30的抗体多肽，其中所述一种或多种治疗性部分各自独立地选自：细胞抑制性药物；抗雄激素药物；可的松及其衍生物；膦酸盐；睾酮-5-α-还原酶抑制剂；硼附加物；细胞因子；毒胡萝卜内酯及其代谢物；毒素(诸如皂草素或卡奇霉素)；化学治疗剂(诸如抗代谢物)；或可用于治疗前列腺癌的任何其它细胞毒性药物。32.根据权利要求24的抗体多肽，其中所述治疗性部分包含一种或多种适合于在活化疗法中使用的部分或者由一种或多种适合于在活化疗法中使用的部分组成，所述活化疗法诸如光子活化疗法、中子活化疗法、中子诱导的Auger电子疗法、同步加速器照射疗法、或低能量X-射线光子活化疗法。33.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，其中所述抗体多肽还包含可检测部分。34.根据权利要求33的抗体多肽，其中所述可检测部分包含放射性同位素或由放射性同位素组成。35.根据权利要求34的抗体多肽，其中所述放射性同位素选自99mTc、111In、67Ga、68Ga、72As、89Zr、123I和201T1。36.根据权利要求34的抗体多肽，其中所述放射性同位素是89Zr。37.根据前述权利要求中的任一项的抗体多肽，其中所述抗体多肽包含一对可检测的和细胞毒性的放射性核素，诸如86Y/90Y或124I/211At。38.根据权利要求37的抗体多肽，其中所述放射性同位素能够作为可检测部分及还作为细胞毒性部分以多模态方式同时起作用。39.根据权利要求33的抗体多肽，其中所述可检测部分包含顺磁同位...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·T·特伦，A·阿克塞尔松，C·AC·马尔姆伯格海格，K·斯约斯特罗姆，SE·斯特兰德，U·J·拉姆马克，
申请(专利权)人：弗雷达克斯有限责任公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE