一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及医疗制剂领域，更具体的涉及一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液及其制备方法和用途；一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液，包括葡聚糖衍生物、氧化铁颗粒和水，所述葡聚糖衍生物与氧化铁颗粒相结合形成纳米氧化铁杂化物，所述纳米氧化铁杂化物均匀分散在水中；所述纳米氧化铁杂化物由葡聚糖衍生物与铁盐通过共沉淀法制得；所述葡聚糖衍生物由5‑氨基乙酰丙酸与氧化葡聚糖通过席夫碱反应制得。本发明专利技术制备出的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液有望应用于胃肠癌转移淋巴结评估，并可通过葡聚糖的功能衍生，偶联抗肿瘤药物，达到诊疗一体化的目的。

Fluorescent specific nano iron oxide hybrid dispersion for cancer metastasis lymph node tracing and preparation method and use thereof

The invention relates to the field of medical preparation, more specifically a fluorescent specific nanometer iron oxide hybrid dispersing solution used for cancer metastasis lymph node tracer, the preparation method and use of the fluorescent specific nano iron oxide hybrid, a fluorescent specific nanometer iron oxide hybrid dispersing solution for cancer metastasis lymph node tracing, including the glucan derivative and iron oxide. Particles and water, the glucan derivative is combined with iron oxide particles to form a nano iron oxide hybrid, the nano iron oxide hybrid is evenly dispersed in the water. The nano iron oxide hybrid is obtained by a coprecipitation method from the glucan derivative and the iron salt; the glucan derivative is oxidized by 5 amino acetylpropionic acid and oxidation. The dextran is prepared by the Schiff base reaction. The fluorescence specific nano iron oxide hybrid dispersions prepared by the invention are expected to be applied to the evaluation of lymph node metastasis of gastric cancer, and can be derived from the function of glucan and coupling antitumor drugs to achieve the purpose of integration of diagnosis and treatment.

【技术实现步骤摘要】
一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液及其制备方法和用途
本专利技术涉及医用示踪诊断试剂领域，更具体地，涉及一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液及其制备方法和用途。
技术介绍
胃肠癌是当前世界范围内致死率最高的肿瘤之一。我国属于胃肠癌高发区，胃癌和结直肠癌分别居各类癌症死因的第三、四位，死亡率分别达17.96/10万、12.59/10万。淋巴结转移是胃肠癌主要的转移方式，其转移情况的评估是决定手术方式、精确病理分期、制定辅助治疗方案的最主要依据。术前医生多借助影像学方法对癌转移淋巴结进行评估。如B超、CT及磁共振等方法，但这些影像学方法都只能通过淋巴结的大小及形态来判断是否存在癌转移，准确率仅达到69-77%，越小的淋巴结越难以准确判断。近年来，FDG-PET已广泛应用于临床，但对胃肠癌淋巴结转移评估准确率也仅46-85%，且由于设备限制，无法进行术中实时定位及检测。另外，临床上还有一些染料如美兰、专利蓝、异硫蓝，核素如锝99，和外源性荧光剂如吲哚菁绿以及纳米炭悬浊液等淋巴结示踪剂相继运用于临床。虽然上述示踪剂实现了术中可视化淋巴结，但仍然无法实现术中辨认癌转移淋巴结。术中为了了解区域淋巴结的转移情况，外科医生尝试通过淋巴结示踪找出可疑的前哨淋巴结，再对其进行术中冰冻病理检测，以此判断区域淋巴结的转移情况，指导区域淋巴结清扫范围。这一技术在黑色素瘤和乳腺癌等肿瘤中取得了较好的效果。但推广至胃肠癌时却因为存在检测盲区及跳跃转移等因素，使得前哨淋巴结对胃肠癌淋巴结转移状态的预测敏感性并不尽如人意。因此，目前临床尚缺乏一种高特异性、高敏感性，且能在术中实时示踪癌转移淋巴结的示踪剂。2、国内外研究现状近年来研究证明，给予外源性5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulinicacid，ALA）可使肿瘤细胞内原卟啉积聚而产生远高于正常细胞的自体荧光，其荧光强度差别最大可达到30余倍，自体荧光差异可用于术中区别肿瘤细胞和正常细胞。但是临床实验显示，口服或静脉注射ALA诱导卟啉荧光对人体胃肠癌转移淋巴结诊断还停留于离体标本，虽然特异性较高，但敏感性却不尽如人意，容易出现假阳性及假阴性的结果。专利技术人分析原因在于：（1）由于ALA诱导的自体荧光在白光下不具有可视化示踪的效果，腹腔内活体组织中运用荧光检测器检测无法做到有的放矢，为了避免淋巴结遗漏，只能选择对离体标本进行荧光检测。（2）虽然口服或静脉给予外源性ALA可使淋巴结中原卟啉蓄积，产生强度高于正常细胞10倍的自体荧光，但同时淋巴结周围脂肪或结缔组织也会因为ALA浓度增高，而原卟啉继续代谢形成血红素所必须的游离铁离子相对不足，导致原卟啉蓄积，产生自体荧光，影响肿瘤转移淋巴结中卟啉荧光的观察，出现假阳性或假阴性的结果。（3）由于口服及静脉给予外源性ALA后经全身血循环进入淋巴结中ALA浓度的限制，微小淋巴结中小于200μm的转移灶几乎不可能产出足以检测到的自体卟啉荧光，出现假阴性结果。要解决上述口服及静脉使用外源性ALA的不足，可以通过两个途径：（1）在使用ALA诱发癌转移淋巴结自体荧光的基础上将区域淋巴结进行可视化染色，针对肉眼可见的淋巴结进行有的放矢的荧光检测，既可以最大程度上避免遗漏微小淋巴结的检测又可以缩短术中进行荧光检测的时间，使活体淋巴结的实时评估成为可能。（2）选择直径可控的纳米材料作为药物载体通过肿瘤周围粘膜下注射，将外源性ALA靶向运送至淋巴结中，既可以进一步增加淋巴结中ALA的浓度，提高癌转移淋巴结特别是微小癌转移淋巴结中自体荧光的强度，又可减少淋巴结周围组织中ALA蓄积，降低干扰自体荧光的强度，使癌转移淋巴结荧光对比度增加，提高检测的敏感性。为此，我们在前期工作中，利用葡聚糖及其衍生物与磁性氧化铁(SPIO)共沉淀技术合成了直径为100-150nm的纳米氧化铁杂化物分散液（DIONs）（专利申请号：CN201610078979.3），实现了黑染淋巴结的可视化效果，为携载ALA特异性示踪淋巴结提供良好载体。
技术实现思路
本专利技术为克服上述现有技术所述的至少一种缺陷（不足），提供一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液，并进一步提供一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液的制备方法和用途。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液，包括葡聚糖衍生物、氧化铁颗粒和水，所述葡聚糖衍生物与氧化铁颗粒相结合形成纳米氧化铁杂化物，所述纳米氧化铁杂化物均匀分散在水中；所述纳米氧化铁杂化物由葡聚糖衍生物与铁盐通过共沉淀法制得；所述葡聚糖衍生物由5-氨基乙酰丙酸与氧化葡聚糖通过席夫碱反应制得。进一步的，所述纳米氧化铁杂化物的直径为100-180nm之间。本专利技术还公开一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液的用途，所述用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液用于胃肠癌、乳腺癌、甲状腺癌等实体恶性肿瘤的术前、术中局部注射进行癌转移淋巴结示踪，使用时在胃肠癌粘膜或浆膜下、乳腺癌、甲状腺癌等实体恶性肿瘤组织周围局部注射使用。本专利技术还公开一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液的制备方法，包含以下步骤：S1、氧化葡聚糖的合成：取葡聚糖溶于去离子水中，加入高碘酸钠，于室温避光反应20-28h；滴加乙二醇或丙三醇，搅拌，透析冻干得到氧化葡聚糖；S2、葡聚糖衍生物的合成：取氧化葡聚糖溶于pH8.0的磷酸盐缓冲液中，加入5-氨基乙酰丙酸盐酸盐，避光反应20-28h后透析冻干得到葡聚糖衍生物；S3、荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液的制备：取葡聚糖衍生物与三价铁盐溶于水中形成溶液，将溶液冷却至0℃左右，低温下混合均匀待用；取二价铁盐溶于水中，过滤后与上述溶液在氮气氛围下搅拌充分后，加入一水合氨溶液，在0-4℃下充分反应1-3h；升高温度至70-100摄氏度，在氮气氛围下持续搅拌1-3h，搅拌速率为500-20000rpm；冷却至室温，超滤除去未反应的葡聚糖和氨水，透析冻干后得到纳米氧化铁杂化物分散液。进一步的，所述三价铁盐为FeCl3，所述二价铁盐为FeCl2。进一步的，二价铁盐与三价铁盐的化学计量摩尔比为1:1-2。进一步的，所述葡聚糖分子量为30~50KDa。进一步的，所述葡聚糖分子量为10~100KDa。与现有技术相比，本专利技术技术方案的有益效果是：（1）本专利技术采用葡聚糖及其衍生物修饰，多糖上具有丰富的官能团，可与其他药物，核素，染料等分子反应，进行功能化衍生。（2）本专利技术直接用葡聚糖及其衍生物修饰纳米氧化铁制备纳米杂化物分散液，实现胃肠癌转移淋巴结的特异性示踪，准确定位癌转移淋巴结，为精确手术清扫范围提供新思路，实验简单，省去了一系列繁琐操作，同时利用多糖上的羟基，分散稳定纳米杂化物分散液，提高其水溶性。（3）本专利技术制备出的荧光特异性纳米杂化物分散液可用于胃肠癌、乳腺癌、甲状腺癌等实体恶性肿瘤的术前、术中局部注射进行癌转移淋巴结示踪，使用时在胃肠癌粘膜或浆膜下、乳腺癌、甲状腺癌等实体恶性肿瘤组织周围局部注射即可。（4）本专利技术制备出的纳米杂化物分散液有望应用于胃肠癌转移淋巴结评估，并可通过葡聚糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液，其特征在于：包括葡聚糖衍生物、氧化铁颗粒和水，所述葡聚糖衍生物与氧化铁颗粒相结合形成纳米氧化铁杂化物，所述纳米氧化铁杂化物均匀分散在水中；所述纳米氧化铁杂化物由葡聚糖衍生物与铁盐通过共沉淀法制得；所述葡聚糖衍生物由5‑氨基乙酰丙酸与氧化葡聚糖通过席夫碱反应制得。

【技术特征摘要】
1.一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液，其特征在于：包括葡聚糖衍生物、氧化铁颗粒和水，所述葡聚糖衍生物与氧化铁颗粒相结合形成纳米氧化铁杂化物，所述纳米氧化铁杂化物均匀分散在水中；所述纳米氧化铁杂化物由葡聚糖衍生物与铁盐通过共沉淀法制得；所述葡聚糖衍生物由5-氨基乙酰丙酸与氧化葡聚糖通过席夫碱反应制得。2.根据权利要求1所述的一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液，其特征在于：所述纳米氧化铁杂化物的直径为100-180nm之间。3.根据权利要求1-2任一项所述的一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液的用途，其特征在于：所述用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液，可用于胃肠癌、乳腺癌、甲状腺癌实体恶性肿瘤的术前、术中局部注射进行癌转移淋巴结黑染及荧光示踪，从而辨别正常淋巴结和癌转移淋巴结，使用时在胃肠癌粘膜或浆膜下、乳腺癌、甲状腺癌实体恶性肿瘤组织周围局部注射使用。4.一种用于癌转移淋巴结示踪的荧光特异性纳米氧化铁杂化物分散液的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：S1、氧化葡聚糖的合成：取葡聚糖溶于去离子水中，加入高碘酸钠，于室温避光反应20-28h；滴加乙二醇或丙三醇，搅拌，透析冻干得到氧化葡聚糖；S2、葡聚糖衍生物的合成：取氧化葡聚糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：王亚楠，周海鹏，傅超萍，李国新，张黎明，邓海军，
申请(专利权)人：王亚楠，
类型：发明
国别省市：广东,44