猪瘟病毒截短E2蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于蛋白空间结构设计的猪瘟病毒截短E2蛋白及其应用。本发明专利技术根据牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的晶体结构，模拟出猪瘟病毒E2蛋白的空间结构并对其进行截短表达，截短蛋白E2

【技术实现步骤摘要】
猪瘟病毒截短E2蛋白及其应用
本专利技术涉及猪瘟病毒截短E2蛋白，还涉及猪瘟病毒截短E2蛋白在检测猪瘟病毒抗体中的应用，属于猪瘟病毒E2蛋白的截短表达及应用领域。
技术介绍
猪瘟(classicalswinefever,CSF)是由猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)引起的一种严重危害全球养猪业的高度传染性疾病。CSFV属于黄病毒科、瘟病毒属成员。瘟病毒属的其它成员包括牛病毒性腹泻病毒(bovineviraldiarrheavirus,BVDV)和边界病病毒(borderdiseasevirus,BDV)。BVDV不仅可以感染牛，也可以感染猪。CSFV是有囊膜的单股正链RNA病毒，基因组全长12.3kb。基因组包含一个大的开放阅读框，编码一个约3,900个氨基酸组成的多聚蛋白，该多聚蛋白在病毒自身及宿主蛋白酶的作用下加工水解产生4种结构蛋白(C、Erns、E1和E2)和8种非结构蛋白(Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)(MeyersG,ThielHJ.Molecularcharacterizationofpestiviruses.AdvVirusRes.1996,47:53–118.)。CSFVE2蛋白锚定在病毒粒子的表面，在感染过程中诱导机体产生中和抗体。在E2蛋白N端存在4个抗原结构区，依次为B/C/D/A，除D区外均含有中和性抗原表位(WensvoortG.Topographicalandfunctionalmappingofepitopesonhogcholeraviruswithmonoclonalantibodies.JGenVirol.1989,70(11):2865–76；HuangYL,DengMC,WangFI,HuangCC,ChangCY.Thechallengesofclassicalswinefevercontrol:modifiedliveandE2subunitvaccines.VirusRes.2014,179:1–11.)。B、C区之间通过C693和C737之间的二硫键形成一个独立的抗原结构域(B/C)；D、A区之间通过C792和C856以及C818和C828之间的二硫键形成一个独立的抗原结构域(D/A)(WensvoortG,TerpstraC,BoonstraJ,BloemraadM,VanZaaneD.Productionofmonoclonalantibodiesagainstswinefevervirusandtheiruseinlaboratorydiagnosis.VetMicrobiol.1986,12(2):101–8；WensvoortG,BoonstraJ,BodzingaBG.ImmunoaffinitypurificationandcharacterizationoftheenvelopeproteinE1ofhogcholeravirus.JGenVirol.1990,71(3):531–40；WensvoortG.Topographicalandfunctionalmappingofepitopesonhogcholeraviruswithmonoclonalantibodies.JGenVirol.1989,70(11):2865–76；vanRijnPA,MiedemaGK,WensvoortG,vanGennipHG,MoormannRJ.AntigenicstructureofenvelopeglycoproteinE1ofhogcholeravirus.JVirol.1994,68(6):3934–42.)。CSFV和BVDV在病毒粒子结构和基因组构成等方面很相似，在序列上具有较高的同源性，导致二者存在血清学交叉反应(KumarR,RajakKK,ChandraT,MuthuchelvanD,SaxenaA,ChaudharyD,KumarA,PandeyAB.Sequence-basedcomparativestudyofclassicalswinefevervirusgenogroup2.2isolatewithpestivirusreferencestrains.VetWorld.2015,8(9):1059–62.)。另外，目前中国主要通过广泛接种猪瘟兔化弱毒疫苗(C株)来防控猪瘟，细胞源猪瘟活疫苗生产中需要用到胎牛血清，但由于缺乏有效的监测，很多BVDV污染的胎牛血清被用于猪瘟疫苗生产，导致猪瘟疫苗接种猪群产生BVDV抗体(徐国栋.国内猪用疫苗中牛病毒性腹泻污染状况.中国动物保健.2017b,19(4):5–8.)，从而干扰CSFV抗体的检测(LinGZ,ZhengFY,ZhouJZ,CaoXA,GongXW,WangGH,QiuCQ.AnindirectELISAofclassicalswinefevervirusbasedonquadrupleantigenicepitopepeptideexpressedinE.coli.VirolSin.2010,25(1):71–6.)。因此，急需一种能够有效鉴别CSFV和BVDV抗体的诊断抗原及检测方法。目前，BVDVE2蛋白的晶体结构已得以解析，鉴定出两个免疫球蛋白样结构域和一个细长的β折叠结构域，推测这种独特的蛋白质结构也可能存在于同属的CSFV(LiY,WangJ,KanaiR,ModisY.CrystalstructureofglycoproteinE2frombovineviraldiarrheavirus.ProcNatlAcadSciUSA.2013,110(17):6805–10.)。因此，参考BVDVE2蛋白晶体结构，模拟出CSFVE2蛋白的空间结构，并基于模拟的结构将CSFVE2蛋白进行截短表达，以获得保留E2蛋白的抗原性、且与BVDV抗体无交叉反应的截短E2蛋白，将对于特异性检测CSFV抗体具有重要的意义和应用价值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的第一个技术问题是提供一种基于蛋白空间结构设计的猪瘟病毒截短E2蛋白；本专利技术所要解决的第二个技术问题是提供一株稳定表达所述猪瘟病毒截短E2蛋白的CHO细胞系；本专利技术所要解决的第三个技术问题是提供所述的猪瘟病毒截短E2蛋白在特异性检测CSFV抗体中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术基于已解析的BVDVE2蛋白晶体结构，通过同源建模分析，模拟出CSFVE2蛋白的空间结构，并基于模拟的蛋白结构对CSFVE2蛋白进行了不同位点的截短表达，以期在保证截短蛋白抗原性的同时，降低或消除与BVDV的血清学交叉反应。截短位点分别为：aa690-aa1030、aa690-aa879和aa770-aa879，不同位点的截短蛋白分别为：E2aa690-1030、E2aa690-879和E2aa770-879。应用ELISA对各截短蛋白的反应性进行初步验证显示，E2aa690-1030与E2aa690-879与CSFV抗体具有良好的反应性，而E2aa770-879反应性相对较低。本专利技术进一步对反应性良好的E2aa690-1030和E本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪瘟病毒截短E2蛋白，其特征在于，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种猪瘟病毒截短E2蛋白，其特征在于，其氨基酸序列为SEQIDNO：1所示。2.权利要求1所述猪瘟病毒截短E2蛋白的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列为SEQIDNO：2所示。3.含有权利要求2所述编码基因的重组表达载体或重组宿主细胞。4.一株稳定表达权利要求1所述猪瘟病毒截短E2蛋白的CHO细胞系，其特征在于，其微生物保藏编号为：CGMCCNo.14722。5.权利要求1所述的猪瘟病毒截短E2蛋白在制备诊断、预防或治疗猪瘟的试剂或药物中的应用。6.权利要求1所述的猪瘟病毒截短E2蛋白在...

【专利技术属性】
技术研发人员：仇华吉，罗玉子，孙元，孟星宇，李素，李永锋，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23