簇集蛋白同种型的特异性检测制造技术

本发明专利技术提供用于检测特定同种型的簇集蛋白的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】簇集蛋白同种型的特异性检测优先权本申请要求于2015年4月30日提交的美国序列号62/155,175的权益，其通过引用以其整体结合到本文中。专利技术背景簇集蛋白或载脂蛋白J为75-80kDa的连接有二硫化物的异二聚体蛋白。簇集蛋白是许多生理过程的部分，包括精子成熟、脂质运输、补体抑制、组织重塑、膜再循环、稳定应激蛋白和促进凋亡抑制。簇集蛋白在肾近端和远端管损害期间过表达，已经在多种癌中注意到，并且在肾损伤中上调。已经开发了若干免疫测定并推向市场，用于测量多种体液中的簇集蛋白，包括血浆、血清和尿。肾特异性簇集蛋白可用作肾损害或疾病的标志。然而，由于感染、创伤、瘤形成、炎症以及置管和膀胱穿刺期间的意外污染，尿样品的血液污染是普遍观察到的事件。这在兽医学中是更深奥的问题。在健康群体中血清簇集蛋白浓度(60-100µg/ml)是尿中浓度(<100ng/ml)的1000倍。血液污染将非肾特异性簇集蛋白同种型带至尿中。因此，确保肾特异性簇集蛋白同种型的定量不受来自血液的血清簇集蛋白污染影响很重要。不能做到此可导致尿簇集蛋白测定中假阳性检验结果。本领域需要方法以区别身体样品中的簇集蛋白同种型。专利技术概述本专利技术提供特异性检测第一簇集蛋白同种型的方法。所述方法包括使样品接触特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至第一簇集蛋白同种型的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子。检测第一簇集蛋白、特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至第一簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子的复合体。本专利技术还提供检测肾特异性簇集蛋白的方法。所述方法包括使样品接触特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型(例如，血浆簇集蛋白、血清簇集蛋白或血源、非肾特异性簇集蛋白)的碳水化合物部分的一种或多种分子。检测肾特异性簇集蛋白、特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子的复合体。所述特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型(例如，血浆簇集蛋白、血清簇集蛋白或血源、非肾特异性簇集蛋白)的碳水化合物部分的一种或多种分子可为一种或多种外源凝集素或特异性结合N-乙酰氨基葡萄糖的一种或多种分子。所述一种或多种外源凝集素可为特异性结合N-乙酰氨基葡萄糖的外源凝集素。外源凝集素可为菜豆(Phaseolusvulgaris)白细胞凝集素(PHA-L)、麦胚凝集素(WGA)、WGA1、WGA2、WGA3、sWGA、菜豆凝集素-E(PHA-E)、番茄(Lycopersiconesculentum)外源凝集素(LEL)、曼陀罗(Daturastramonium)外源凝集素(DSL)、菜豆白细胞凝集素(PSA)或双花扁豆(Dolichosbiflorus)外源凝集素(DBA)。一种或多种抗体或其抗原结合片段可固体到载体上。样品和可检测地标记的特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子(可为外源凝集素)可加至载体。特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子(可为外源凝集素)可固定到载体。样品和可检测地标记的一种或多种抗体或其抗原结合片段可加至载体。一种或多种抗体或其抗原结合片段、特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不结合至其它簇集蛋白同种型(例如，血浆簇集蛋白、血清簇集蛋白或血源、非肾特异性簇集蛋白)的碳水化合物部分的一种或多种分子或二者可用可检测的标记标记。上述一种或多种外源凝集素可为不特异性结合血清和血浆簇集蛋白的外源凝集素。样品可为尿样品。检测可通过选自侧流测定、化学发光标记的夹心测定和酶联免疫吸附测定(ELISA)、竞争测定、凝集测定、化学发光测定、生物发光测定、凝胶电泳免疫测定方法、免疫组织化学测定、放射免疫测定(RIA)、无标记生物传感器测定或免疫放射测定的方法完成。抗体可特异性结合血浆簇集蛋白、血清簇集蛋白、重组簇集蛋白、肾特异性簇集蛋白或MDCK衍生的簇集蛋白。肾特异性簇集蛋白可为人的、猫的或犬的。本专利技术的其它实施方案提供用于检测哺乳动物中的肾疾病、肾损伤或肾损害的方法。所述方法包括使来自哺乳动物的样品接触特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型(例如，血浆簇集蛋白、血清簇集蛋白或血源、非肾特异性簇集蛋白)的碳水化合物部分的一种或多种分子。检测肾特异性簇集蛋白、特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至其它簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子的复合体。如果检测到复合体，那么哺乳动物具有肾疾病、肾损伤或肾损害。如果哺乳动物具有肾疾病、肾损害或肾损伤，给予哺乳动物肾疗法或肾治疗学。肾疾病可为尿路感染。哺乳动物可为人、猫或犬。本专利技术的其它实施方案提供区别一种或多种簇集蛋白同种型与其它类型的簇集蛋白同种型的方法。所述方法包括使样品接触特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至一种或多种簇集蛋白同种型的碳水化合物部分并且不结合至其它簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子。检测一种或多种簇集蛋白同种型、特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至一种或多种簇集蛋白同种型的碳水化合物部分并且不结合其它簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子的复合体。所述一种或多种簇集蛋白同种型可为肾特异性簇集蛋白并且其它簇集蛋白同种型可为，例如，血浆簇集蛋白、血清簇集蛋白或血源、非肾特异性簇集蛋白。所述一种或多种簇集蛋白同种型可为人的、猫的或犬的簇集蛋白同种型。本专利技术的其它实施方案提供包含一种或多种簇集蛋白分子、特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和一种或多种外源凝集素的复合体。所述复合体可包含一种或多种肾特异性簇集蛋白分子、特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不结合至其它簇集蛋白同种型(例如，血浆簇集蛋白、血清簇集蛋白或血源、非肾特异性簇集蛋白)的碳水化合物部分的一种或多种分子。复合体可固定在任何类型的固体载体上。复合体可额外包含一种或多种可检测标记，其可与复合体的一种或多种分子关联。本专利技术的其它实施方案提供试剂盒，其包括特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不结合其它簇集蛋白同种型(例如，血浆簇集蛋白、血清簇集蛋白或血源、非肾特异性簇集蛋白)的碳水化合物部分的一种或多种分子。所述一种或多种抗体或其抗原结合片段、特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测肾特异性簇集蛋白的方法，包括使样品接触特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子，和检测肾特异性簇集蛋白、所述特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和所述特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子的复合体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.30 US 62/1551751.检测肾特异性簇集蛋白的方法，包括使样品接触特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子，和检测肾特异性簇集蛋白、所述特异性结合簇集蛋白的一种或多种抗体或其抗原结合片段和所述特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子的复合体。2.权利要求1的方法，其中所述特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子为一种或多种外源凝集素。3.权利要求1的方法，其中所述特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子为特异性结合N-乙酰氨基葡萄糖的分子。4.权利要求2的方法，其中所述一种或多种外源凝集素为特异性结合N-乙酰氨基葡萄糖的外源凝集素。5.权利要求2的方法，其中所述一种或多种外源凝集素为菜豆(Phaseolusvulgaris)白细胞凝集素(PHA-L)、麦胚凝集素(WGA)、WGA1、WGA2、WGA3、sWGA、菜豆(Phaseolusvulgaris)凝集素-E(PHA-E)、番茄(Lycopersiconesculentum)外源凝集素(LEL)、曼陀罗(Daturastramonium)外源凝集素(DSL)、菜豆(Phaseolusvulgaris)白细胞凝集素(PSA)、木菠萝外源凝集素、STL外源凝集素(马铃薯(Solanumtuberosum))、LCA外源凝集素(兵豆(Lensculinaris))、鸡冠刺桐(Erythinacristagalli)外源凝集素(ECL)、蓖麻(Ricincommunis)外源凝集素(RCA)、SBA外源凝集素(大豆)、CONA外源凝集素(伴刀豆凝集素)或双花扁豆(Dolichosbiflorus)外源凝集素(DBA)。6.权利要求1的方法，其中将所述一种或多种抗体或其抗原结合片段固体到载体。7.权利要求6的方法，其中将所述样品和可检测地标记的特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子加至所述载体。8.权利要求7的方法，其中所述可检测地标记的特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子为外源凝集素。9.权利要求1的方法，其中将所述特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子固定到所述载体。10.权利要求9的方法，其中将所述样品和可检测地标记的一种或多种抗体或其抗原结合片段加至所述载体。11.权利要求9的方法，其中所述特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不特异性结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子为外源凝集素。12.权利要求1的方法，其中所述一种或多种抗体或其抗原结合部分、所述特异性结合至肾特异性簇集蛋白的碳水化合物部分并且不结合至非肾特异性、血源簇集蛋白同种型的碳水化合物部分的一种或多种分子或这二者用可检测的标记标记。13.权利要求2的方法，其中所述一种或多种外源凝集素不特异性结合血清和血浆簇集蛋白。14.权利要求1的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：JJ奎因，MVSN耶拉米利，
申请(专利权)人：艾德克斯实验室公司，
类型：发明
国别省市：美国,US