【技术实现步骤摘要】
一种固液结合制备索玛鲁肽的方法
本专利技术属于多肽药物制备
，特别涉及一种固液结合制备索玛鲁肽的方法。
技术介绍
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是由人肠道L细胞分泌的一种肽类激素，能够促进胰岛素的分泌、抑制胰高血糖素的分泌，具有降低血糖浓度的功效，被用于II型糖尿病的治疗。然而天然GLP-1在体内不稳定，易被二肽基肽酶-IV(DPP-IV)快速降解。索玛鲁肽，英文名称为Semaglutide，是由丹麦诺和诺德公司开发生产的一种新型长效胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，用于治疗II型糖尿病。索玛鲁肽具有降血糖、减肥和保护心血管的功效，已于2017年10月18日被FDA建议批准上市。索玛鲁肽的Lys侧链经PEG、Glu和十八碳二羧酸修饰后，亲水性大大提高、与白蛋白的结合力增强；同时N端第2位的Ala突变为Aib后，有效的避免了被DPP-IV酶解而失活，半衰期达到40h，患者每周只需注射一次，目前该药物的口服剂型也正在研制当中。索玛鲁肽的CAS号为910463-68-2，分子式为C187H291N45O59，分子量为4113.64g/mol，其结构如下专利...
【技术保护点】
一种固液结合制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，包括步骤如下：1)缩合反应Ⅰ：将Alloc‑Lys(Fmoc)‑OH与树脂进行缩合，得Alloc‑Lys(Fmoc)‑树脂，并封闭；2)缩合反应Ⅱ：脱除步骤1)制得的Alloc‑Lys(Fmoc)‑树脂上Lys侧链的Fmoc保护基后，在缩合体系Ⅱ中，依次缩合Fmoc‑PEG‑OH、Fmoc‑PEG‑OH、Fmoc‑Glu(OH)‑OtBu和十八烷二酸单叔丁酯，得Alloc‑Lys(PEG‑PEG‑γ‑Glu(OtBu)‑Monobutyl octadecanate)‑CTC树脂的肽树脂Ⅱ；3)裂解步骤2)制得的肽树脂Ⅱ，得Allo...
【技术特征摘要】
1.一种固液结合制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，包括步骤如下：1)缩合反应Ⅰ：将Alloc-Lys(Fmoc)-OH与树脂进行缩合，得Alloc-Lys(Fmoc)-树脂，并封闭；2)缩合反应Ⅱ：脱除步骤1)制得的Alloc-Lys(Fmoc)-树脂上Lys侧链的Fmoc保护基后，在缩合体系Ⅱ中，依次缩合Fmoc-PEG-OH、Fmoc-PEG-OH、Fmoc-Glu(OH)-OtBu和十八烷二酸单叔丁酯，得Alloc-Lys(PEG-PEG-γ-Glu(OtBu)-Monobutyloctadecanate)-CTC树脂的肽树脂Ⅱ；3)裂解步骤2)制得的肽树脂Ⅱ，得Alloc-Lys(PEG-PEG-γ-Glu(OtBu)-Monobutyloctadecanate)-OH；4)采用液相合成法合成10个二肽或三肽或四肽片段，具体为Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Val-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-Ala-Ala-OH、Fmoc-Glu(OtBu)Gly-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-Val-OH、Fmoc-Thr(OtBu)-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-Aib-OH；5)缩合反应Ⅲ：在缩合体系Ⅲ中，按照索玛鲁肽的序列依次对步骤3)和步骤4)制得的肽片段、以及氨基酸与树脂进行缩合，依次缩合的肽片段和氨基酸为：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Val-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-OH、Alloc-Lys(PEG-PEG-γ-Glu(OtBu)-Monobutyloctadecanate)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-Ala-Ala-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-Val-OH、Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(OtBu)-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-Aib-OH，得索玛鲁肽肽树脂；所述的索玛鲁肽全保护肽树脂为：His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(PEG-PEG-γ-Glu(OtBu)-Monobutyloctadecanate)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-树脂；6)裂解步骤5)制得的索玛鲁肽肽树脂，同时脱除侧链保护基，得到索玛鲁肽粗肽；7)对步骤6)制得的索玛鲁肽粗肽进行纯化、冻干，得索玛鲁肽纯品多肽。2.根据权利要求1所述的一种固液结合制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，步骤1)中所述树脂为：替代度为0.1～1.0mmol/g的CTC树脂；所述缩合反应Ⅰ为：将Alloc-Lys(Fmoc)-OH、DIEA和树脂的摩尔质量比为2～5:6:1混合后，在10～30℃条件下反应1～5h；所述封闭方法为：将MeOH、DMF和DIEA的混合溶液加至树脂中，在10～30℃条件下反应20～60min。3.根据权利要求1所述的一种固液结合制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，步骤2)中所述缩合反应Ⅱ具体为：a)脱除Fmoc保护基：向树脂中加入体积分数20％PIP-DMF溶液，在10～30℃条件下进行两次脱Fmoc保护：第一次脱Fmoc保护和第二次脱Fmoc保护后，再用DMF洗涤树脂pH至7；所述第一次脱Fmoc保护时间为5min，所述第二次脱Fmoc保护时间为10min，得脱保护的树脂；b)活化：在10～30℃条件下，将Fmoc-PEG-OH、Fmoc-Glu(OH)-OtBu和十八烷二酸单叔丁酯与缩合体系Ⅱ混合活化5～10min；c)缩合：将步骤b)制得的活化后的Fmoc-PEG-OH、Fmoc-Glu(OH)-OtBu和十八烷二酸单叔丁酯加至步骤a)脱保护的树脂中，在10～30℃条件下进行缩合反应1～5h，得线性全保护肽树脂；所述Fmoc-PEG-OH、Fmoc-Glu(OH)-OtBu和十八烷二酸单叔丁酯与缩合体系Ⅱ、Fmoc树脂的摩尔质量比为2～5:2～5:1。4.根据权利要求3所述的一种固液结合制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，所述缩合体系Ⅱ为：A+D或A+B+C，其中A为HOBT或HOAT，B为HATU、HBTU、TBTU或PyBOP其中任何一种，C为DIEA或TMP，D为DIC。5.根据权利要求1所述的一种固液结合制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，裂解步骤3)得到的肽树脂的方法为：将体积比为8:1:1的DCM-TFE-乙酸溶液溶液加至Alloc-Lys(PEG-PEG-γ-Glu(OtBu)-Monobutyloctadecanate)-CTC树脂中，裂解2～5h，抽滤，将滤液蒸干，得到Alloc-Lys(PEG-PEG-γ-Glu(OtBu)-Monobutyloctadecanate)-OH。6.根据权利要求1所述的一种固液结合制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，步骤4)中，所述Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH合成方法：a)将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC存在时生成Fmoc-Arg(Pbf)-OSu；b)将Fmoc-Arg(Pbf)-OSu和H-Gly-OH在碱催化下生成Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH；所述Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Val-OH合成方法：a)将Fmoc-Trp(Boc)-OH和HOSu在DCC存在时生成Fmoc-Trp(Boc)-OSu；b)将Fmoc-Trp(Boc)-OSu和H-Leu-OH在碱催化下生成Fmoc-Trp(Boc)-Leu-OH；c)Fmoc-Trp(Boc)-Leu-OH和HOSu在DCC存在时生成Fmoc-Trp(Boc)-Leu-OSu；d)将Fmoc-Trp(Boc)-Leu-OSu和H-Val-OH在碱催化下生成Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Val-OH；所述Fmoc-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-OH...
【专利技术属性】
技术研发人员：姬胜利，陈明鲁，殷金岗，刘超，王广胜，
申请(专利权)人：润辉生物技术威海有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37
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