miR-184在自然流产预警作用中的应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及miR‑184在自然流产预警作用中的应用，具体涉及静脉注射miR‑184‑3p agomir建立自然流产模型的方法和孕早期检测孕妇外周血的miR‑184用于评估自然流产风险。体外实验显示，早孕期母‑胎界面miR‑184高表达可通过相关分子机制导致自然流产的发生，并且反复自然流产患者的外周血中miR‑184表达也升高；体内动物试验显示，静脉注射miR‑184‑3p agomir使小鼠体内miR‑184过表达后，小鼠胚胎吸收率增加，从而建立一种自然流动物模型。另外，与正常妊娠妇女相比，反复自然流产患者的外周血中miR184表达上升，提供了一种孕早期评估自然流产风险的方法。

The application of miR-184 in the early warning of spontaneous abortion

The present invention belongs to the field of medical technology, which involves the application of miR 184 in the early warning of spontaneous abortion, specifically involving the method of establishing a natural abortion model by intravenous injection of miR and 3P agomir and the miR of pregnant women's peripheral blood at early pregnancy to assess the risk of spontaneous abortion. In vitro experiments showed that the high expression of miR 184 could lead to spontaneous abortion through the related molecular mechanism, and the expression of miR in the peripheral blood of patients with recurrent spontaneous abortion also increased; in vivo animal experiments showed that intravenous injection of miR 184 3P agomir made miR 184 over expression in mice. The rate of embryo absorption increased, thus establishing a natural flow animal model. In addition, the increased expression of miR184 in peripheral blood of patients with recurrent spontaneous abortion provides a way to assess the risk of spontaneous abortion at the early stage of pregnancy compared with normal pregnant women.

【技术实现步骤摘要】
miR-184在自然流产预警作用中的应用
本专利技术属于医药
，具体地说，是miR-184在自然流产预警作用中的应用。
技术介绍
成功妊娠是一个极其复杂的生理过程，作为胚胎和母体直接接触的前沿，母-胎界面的正常生物学功能是维持成功妊娠的关键，近年来母-胎界面的免疫调节机制及如何维持成功妊娠一直是生殖免疫学的研究热点。早孕期母-胎界面发生了一系列变化，主要包括子宫内膜蜕膜化、滋养细胞发育和胎盘形成以及母胎交互对话，这些事件主要以细胞为载体，同时以局部分泌的细胞因子和细胞外基质为媒介，从而构成一个复杂的相互作用网络，调控妊娠的进展。胚胎来源的滋养细胞(trophoblast)和母体的蜕膜共同组成了母-胎界面。同时，滋养细胞也是人类胎盘的主要构成细胞，其不仅能调控自身的增殖和侵袭，还能通过表面的一些分子作用于母体的免疫活性细胞，进而参与母-胎免疫耐受形成。母体蜕膜组织的细胞成份比较复杂，以蜕膜基质细胞(DSC)最多，占75％，其次为蜕膜免疫细胞(DIC)，占15％。蜕膜基质细胞一方面为蜕膜提供所需营养，另一方面又能通过分泌一些激素和细胞因子参与调节蜕膜局部微环境，进而利于维持正常妊娠。蜕膜免疫细胞的组成不同于外周，其50-70％为CD56brightCD16-NK细胞，近20％的为巨噬细胞而T细胞约占10％，几乎没有B细胞；这些细胞能够产生多种细胞因子形成独特的细胞因子作用网络，指导母-胎界面发生Th2型免疫偏倚，同时还对滋养细胞的增殖分化以及迁移起到重要的作用，最终协同促进了妊娠的发展。反复自然流产(recurrentspontaneousabortion，RSA)是妇产科常见的病理妊娠之一,严重威胁着人类的生殖健康。其病因主要包括染色体异常、母体生殖道异常、母体内分泌异常、免疫功能异常、生殖道感染、宫颈机能不全及血栓形成倾向等，但是有50％反复自然流产患者，使用目前临床的诊断方法尚不能发现导致流产反复发生的病因，且疗效不理想，称为不明原因反复自然流产(unexplainedrecurrentspontaneousabortion)，是临床上疑难性的不育症。因此，探讨其可能的致病因素能为反复自然流产的临床诊断和治疗提供一些新思路和新方法。microRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，在多种生物学过程中具有重要的作用。至今已在人细胞中发现2000多种microRNA，这些microRNA调节了将近人体1/3的基因，已然成为人类最大的调节基因群。根据与目的基因互补的程度，microRNA主要以两种方式下调目的基因的表达：一是当与目的靶基因完全互补时，以siRNA相同的方式降解靶基因mRNA；另一种即与靶基因的3’UTR结合，在不改变靶基因mRNA表达水平的情况下，抑制其翻译。研究表明反复自然流产的发生与microRNA表达异常密切相关。例如，HLA-G基因在母胎界面的表达对母胎免疫耐受和维持正常妊娠有着重要的作用，而miR-133a可以通过下调人类白细胞抗原HLA-G基因调节反复自然流产。并且一些microRNA还可以通过其自身的多态性(miR-146aC>G，miR-149T>C，miR-196a2T>C，andmiR-499A>G)影响反复自然流产的发生。miR-184是一个短的非编码单链RNA分子，在哺乳动物中，其主要表达在大脑、睾丸及角膜上皮中。现已发现miR-184与神经发育、凋亡及发育等功能密切相关。有研究表明，miR-184在法令综合征、家族性圆锥角膜、缺血诱导的视网膜新生血管形成、Rett综合征及一些肿瘤(如，肿瘤舌鳞状细胞癌、神经母细胞瘤)中具有一定的调控作用。基于现有技术的现状，本专利技术拟通过实验研究母胎界面miR-184过表达在反复自然流产中的作用，提供又一个建立自然流产模型的方法，同时评估miR-184作为评估自然流产发生风险的可行性，为临床上自然流产的诊断和治疗提供新靶点和新思路。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供miR-184或其检测试剂的用途。本专利技术的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供一种建立自然流产动物模型的方法。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：miR-184或其检测试剂的用途，用于制备判断反复自然流产的试剂盒。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述检测试剂包括引物、反义核酸、探针或芯片。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述检测是指外周血检测。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述检测的对象为孕早期孕妇。进一步，本专利技术的试剂盒通过检测受试者外周血中miR-184的表达水平对受试者自然流产风险进行早期诊断。进一步，将受试者外周血miR-184的表达水平与正常妊娠妇女的进行比较，若受试者miR-184水平显著增高，则提示所述受试者患有反复自然流产。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种建立自然流产动物模型的方法，包括对建模动物静脉注射miR-184-3pagomir的步骤。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述建模动物为BALB/c雌性小鼠。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述miR-184-3pagomir注射剂量为15nmol。本专利技术通过microRNA芯片分析发现miR-184在反复自然流产患者的绒毛和蜕膜组织中均高表达，并且反复自然流产患者的外周血中miR-184的表达水平也升高，进一步体外研究发现miR-184表达增加可以促进滋养细胞凋亡，体内实验发现小鼠体内miR-184过表达后孕鼠胚胎吸收率增加。这提示静脉注射miR-184-3pagomir可以使小鼠体内miR-184过表达，进而诱导自然流产的发生，该发现为临床上反复自然流产的诊断和治疗提供了新方法。本专利技术对正常妊娠妇女和反复自然流产患者的绒毛和蜕膜组织进行microRNA芯片分析，结果发现miR-184在反复自然流产患者的绒毛和蜕膜组织中均高表达(如图1所示)。检测正常妊娠妇女和反复自然流产患者的外周血发现，miR-184在反复自然流产患者的外周血中表达也升高(如图2所示)。滋养细胞系HTR8过表达miR-184后细胞凋亡增加(如图3所示)。之后经静脉给小鼠注射miR-184的激动剂agomir，使小鼠体内miR-184过表达，结果证实miR-184在小鼠的外周血及孕鼠的子宫中高表达(如图4所示)，待小鼠孕11天观察胚胎吸收率发现，miR-184过表达可以增加小鼠的胚胎吸收率(如图5所示)。本专利技术从体内体外实验均说明了miR-184高表达可以导致自然流产的发生，从而为自然流产模型的建立提供了一种新的方法；并且通过检测早孕期外周血中miR-184可以评估自然流产的风险，这就为临床上反复自然流产的诊疗提供了一种新策略。附图说明附图1是正常妊娠妇女和反复自然流产患者的绒毛和蜕膜组织中miR-184的表达。其中，Lr：反复自然流产患者的绒毛组织；Zr：正常妊娠妇女的绒毛组织；LT：反复自然流产患者的蜕膜组织；ZT：正常妊娠妇女的蜕膜组织；villi：早孕绒毛组织；deciduas：早孕蜕膜组织；normal：正常妊娠；abortion：反复自然流产。***P<0.00本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑184或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备判断反复自然流产的试剂盒。

【技术特征摘要】
1.miR-184或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备判断反复自然流产的试剂盒。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测试剂包括引物、反义核酸、探针或芯片。3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述检测是指外周血检测。4.一种建立自然流产动物...

【专利技术属性】
技术研发人员：金莉萍，张媛，周济，张进平，李明清，周文洁，
申请(专利权)人：上海市第一妇婴保健院，
类型：发明
国别省市：上海,31