一种用于鉴定中药麝香的PCR方法技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定中药麝香的PCR方法。该方法包括：从待测中药样品中提取基因组DNA作为模板，采用引物对(SEQ ID No.1和SEQ ID No.2)进行PCR扩增；对所得PCR产物进行测序；将测序序列与标准序列进行比较，如果测序序列与所述标准序列完全一致或者仅有1个核苷酸的差异，则待测中药样品为麝香；或者以测序序列和标准序列构建NJ树，如果测序序列与标准序列在NJ树的同一个分枝上，则待测中药样品为麝香。本发明专利技术所建立的用于鉴定中药麝香的PCR方法快速、准确、科学性强且使用方便，对于确保药材市场中麝香的质量及其临床疗效具有重要意义。

A PCR method for the identification of musk of traditional Chinese Medicine

The invention discloses a PCR method for identifying musk of traditional Chinese medicine. The method includes: extracting genomic DNA from the sample of traditional Chinese medicine as a template, using primers to amplify PCR (SEQ ID No.1 and SEQ ID No.2), sequence the obtained PCR products, and compare the sequence with the standard sequence, if the sequence sequence is identical with the standard sequence or only 1 nucleotides are poor. The sample is musk, or the NJ tree is constructed by sequencing and standard sequence. If the sequence and standard sequence are on the same branch of the NJ tree, the sample of Chinese medicine is to be measured as musk. The PCR method used to identify musk of Chinese medicine is fast, accurate, scientific and easy to use. It is of great significance to ensure the quality of musk in the medicinal market and its clinical effect.

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定中药麝香的PCR方法
本专利技术属于中药鉴定领域，涉及一种用于鉴定中药麝香的PCR方法。
技术介绍
麝香是麝科动物林麝MoschusberezovskiiFlerov.,马麝M.sifanicusPrzewalski或原麝M.moschiferusL.成熟雄性香囊的干燥分泌物。收载于2015年及即将实施的2020年版《中国药典》。麝香具有开窍，通经络，消肿止痛的功效，临床用于邪蒙心窍、神志昏迷，功效卓著。由于麝香来源极其有限,市场销售价格昂贵，所以市场上出现较多的伪品和掺杂品，常见的有鼠科动物麝鼠OndatrazibethicusLinnaeus的麝鼠香，也有掺入鸡GallusgallusLinnaeus的血块，羊OvisariesLinnaeus的粪便，牛内脏等动物的组织和分泌物的掺伪品。为保证用药安全有效，需对其进行真伪鉴别。且不同种来源的麝香价格具有差异，应用也有不同。目前虽然有很多生药学的方法对麝香进行鉴定，但均难以准确鉴别麝香来源于哪种麝的基原物种。此外，也有研究表明可采用DNA条形码技术对麝香的原动物进行鉴别，但只能鉴定麝的肌肉、组织或毛发，均无法从麝香(即麝本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鉴定中药麝香的PCR方法，包括如下步骤：(a)从待测中药样品中提取基因组DNA作为模板，采用引物对进行PCR扩增，得到PCR产物；所述引物对为如下(a1)或(a2)所示的引物对：(a1)由SEQ ID No.1所示的上游引物和SEQ ID No.2所示的下游引物组成的引物对；(a2)由(a1)中的上游引物和/或下游引物经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列组成的，且与(a1)中所述引物对功能相同的引物对；(b)对步骤(a)所得PCR产物进行测序，获得测序序列；(c)按照如下(c1)或(c2)确定所述待测中药样品是否为麝香：(c1)将所述测序序列与标准序列进行比较，如果...

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定中药麝香的PCR方法，包括如下步骤：(a)从待测中药样品中提取基因组DNA作为模板，采用引物对进行PCR扩增，得到PCR产物；所述引物对为如下(a1)或(a2)所示的引物对：(a1)由SEQIDNo.1所示的上游引物和SEQIDNo.2所示的下游引物组成的引物对；(a2)由(a1)中的上游引物和/或下游引物经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列组成的，且与(a1)中所述引物对功能相同的引物对；(b)对步骤(a)所得PCR产物进行测序，获得测序序列；(c)按照如下(c1)或(c2)确定所述待测中药样品是否为麝香：(c1)将所述测序序列与标准序列进行比较，如果所述测序序列与所述标准序列完全一致或者仅有1个核苷酸的差异，则所述待测中药样品为或候选为麝香；反之，则所述待测中药样品不为或候选不为麝香；(c2)以所述测序序列和所述标准序列为数据源，构建NJ树，如果所述测序序列与所述标准序列在NJ树的同一个分枝上，则所述待测中药样品为或候选为麝香；反之，则所述待测中药样品不为或候选不为麝香；所述标准序列选自如下任一：SEQIDNo.3所示核苷酸序列、SEQIDNo.4所示核苷酸序列、SEQIDNo.5所示核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，从所述待测中药样品中提取基因组DNA是按照包括如下步骤的方法进行的：采用60-70％乙醇对所述待测中药样品中的组织碎片和DNA进行沉淀，然后采用CTAB法提取基因组DNA；进一步地，从所述待测中药样品中提取基因组DNA是按照包括如下步骤的方法进行的：(a1)将所述待测中药样品置于60-70％乙醇中旋涡振荡10-20min，65℃孵育20-60min，离心得沉淀，记为沉淀1；(a2)将所述沉淀1置于CTAB提取液中，65℃孵育20-60min；然后加入由氯仿和异戊醇按照体积比24：1的比例混合而成的混合液，振荡，离心得上清，记为上清1；(a3)向所述上清1中加入由氯仿和异戊醇按照体积比24：1的比例混合而成的混合液，振荡，离心得上清，记为上清2；(a4)向所述上清2中加入异丙醇，-15至-25℃放置1-3h；然后离心得沉淀，记为沉淀2；(a5)将所述沉淀2用乙醇漂洗后，得所述基因组DNA。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，采用所述引物对进行PCR扩增时的退火温度为56℃。4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(b)中，对所述PCR产物进行测序后，还包括如下步骤：对测序所得原始序列进行预处理，去除两端的低质量区域和引物区，获得132bp的测序序列。5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：步骤(c2)中，是基于K2P距离模型对所述测序序列和所述标准序列构建所述NJ树的。6.用于鉴定中药麝香的引物对或试剂盒，其特征在于：所述引物对为如下(a1)或(a2)所示的引物对：(a1)由SEQIDNo.1所示的上游引物和SEQIDNo.2所示的下游...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁媛，蒋超，赵玉洋，周骏辉，黄璐琦，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11