一种对羟基苯甲酰-COA硫酯酶及其制备方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，尤其涉及一种对羟基苯甲酰‑COA硫酯酶及其制备方法。包括以下步骤：1)利用PCR技术扩增得到对羟基苯甲酰‑COA硫酯酶的克隆，2)构建对羟基苯甲酰‑COA硫酯酶的表达载体；3)将表达载体转化入大肠杆菌感受态菌体中得到重组菌体，进一步诱导表达、和纯化蛋白得到对羟基苯甲酰‑COA硫酯酶。该方法简单，易操作，且发现了新的基因序列的对羟基苯甲酰‑COA硫酯酶。另外，本发明专利技术还提供该对羟基苯甲酰‑COA硫酯酶的多克隆抗体以及其检测方法，对低温菌Cryobacterium属菌种的鉴定提供新的依据，对于对羟基苯甲酰‑COA硫酯酶的研究提供了新的研究方向。

A pair of hydroxybenzoyl -COA sulfur esterase and its preparation method

The invention relates to the field of molecular biology, in particular to a pair of hydroxybenzoyl COA sulfur esterase and a preparation method thereof. The following steps were included: 1) the cloning of hydroxy benzoyl COA sulfur esterase was amplified by PCR technology, and 2) construction of the expression vector of the hydroxy benzoyl COA sulfur esterase; 3) the recombinant plasmid was transformed into the Escherichia coli to obtain the recombinant strain, and the expression of the protein was further induced and the purified protein was obtained to the hydroxybenzoyl CO A sulphate esterase. The method is simple and easy to operate, and a new sequence of COA benzoyl sulfide is found. In addition, the invention also provides the polyclonal antibody of the polyhydroxybenzoyl COA sulfur esterase and its detection method, and provides a new basis for the identification of the bacteria of the hypothermia Cryobacterium genus, and provides a new research direction for the study of the hydroxy benzoyl COA sulphate esterase.

【技术实现步骤摘要】
一种对羟基苯甲酰-COA硫酯酶及其制备方法
本专利技术属于分子生物学领域，主要涉及一种对羟基苯甲酰-COA硫酯酶及其应用。
技术介绍
对羟基苯甲酰-CoA硫酯酶，英文名:4-hydroxybenzoyl-CoAthioesterase。对羟基苯甲酰-CoA硫酯酶可将对羟基苯甲酰-CoA转化为CoA和对羟基苯甲酸。在4-氯苯甲酸的降解过程中起到重要的作用，在农药及除草剂污染等环境保护领域有极大的应用价值。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺陷，本专利技术的目的是提供一种低温适应性好的对羟基苯甲酰-COA硫酯酶，并相应开发一种更高效、简便的制备对羟基苯甲酰-COA硫酯酶的方法。本专利技术提供一种对羟基苯甲酰-COA硫酯酶的氨基酸序列，所述对羟基苯甲酰-COA硫酯酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术提供一种对羟基苯甲酰-COA硫酯酶基因的核苷酸序列，所述对羟基苯甲酰-COA硫酯酶的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。相应地，本专利技术提供包含上述对羟基苯甲酰-COA硫酯酶基因的重组载体、重组菌株以及表达上述对羟基苯甲酰-COA硫酯酶的方法。本专利技术提供包含上述对羟基苯甲酰-CO本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对羟基苯甲酰‑COA硫酯酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种对羟基苯甲酰-COA硫酯酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种对羟基苯甲酰-COA硫酯酶基因，其特征在于：编码权利要求1所述的对羟基苯甲酰-COA硫酯酶。3.如权利要求2所述的对羟基苯甲酰-COA硫酯酶基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。4.包含权利要求2或3所述对羟基苯甲酰-COA硫酯酶基因的重组载体。5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述载体的构建方法为：将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的对羟基苯甲酰-COA硫酯酶的编码基因插入到质粒pET21a上的EcoRI和NdeI限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于启动子下游并受其调控，得到重组大肠杆菌BL21表达质粒pET21a-HCTE。6.包含权利要求2或3所述对羟基苯甲酰-COA硫酯酶基因PCR扩增的引物序列。7.根据权利要求6所述的引物序列，其特征在于：所述引物序列的正向引物如SEQIDNO.3所示，反向引物如SEQIDNO.4。8.一种制备权利要求1所述的对羟基苯甲酰-COA硫酯酶的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫春杰，童心语，薛栋升，胡征，杨波，王毅，
申请(专利权)人：湖北工业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42