一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术的酿酒酵母保藏编号为保藏编号为CCTCC NO：M2017792的酿酒酵母F2，该菌株能够降解氨氮，可在养殖水体中快速转化氨氮成蛋白质，同时产生大量菌体为水生动物提供饵料，维持水产动物肠道微生态平衡，提高水产动物存活率和产量，具有工业化开发和推广应用的潜力。

A Saccharomyces cerevisiae and its application in aquaculture

The invention discloses a Saccharomyces cerevisiae and its application in aquaculture, and belongs to the field of microbial technology. The preservation of Saccharomyces cerevisiae is numbered as the preservation of Saccharomyces cerevisiae F2, numbered CCTCC NO:M2017792, which can degrade ammonia nitrogen and can quickly transform ammonia nitrogen into protein in the aquaculture water, and produce a large number of bacteria to provide bait for aquatic animals, maintain the microecological balance of the intestinal tract of aquatic animals and improve the survival of aquatic animals. Yield and yield are potential for industrial development and application.

【技术实现步骤摘要】
一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用。
技术介绍
随着工业污染排放、畜禽养殖业污水排放、生活污水排放、水产养殖中过量投喂饲料行为等，养殖水体中氨氮超标致使水生生物中毒死亡的事情频繁发生，给养殖户带来极大的经济损失。养殖水体中的总氨氮一般以两种形式即非离子氨(NH3)和铵离子(NH4+)存在，在pH值小于7时，水中的氨几乎都以NH4+的形式存在，在pH大于11时，则几乎都以NH3的形式存在，温度升高，NH3的比例增大。氨氮对水生生物的危害主要是指非离子氨的危害，非离子氨进入水生生物体内后，对酶水解反应和膜稳定性产生明显影响，表现出呼吸困难、不摄食、抵抗力下降、惊厥、昏迷等现象，甚至导致水生生物大批死亡。另外，在生物体内富集的高浓度氨氮可转化为亚硝酸盐后对生物体产生危害，而亚硝酸盐又是强氧化剂，不仅会使生物体中毒，它还有致癌作用。根据《渔业水质标准》，水产养殖生产中，应将氨的浓度控制在0.02mg/L以下。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用，该菌株可在养殖水体中快速转化氨氮成蛋白质，同时产生大量菌体为水生动物提供饵料，提高水产动物存活率和产量，具有工业化开发和推广应用的潜力。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一株酿酒酵母，为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)F2，该菌株已于2017年12月15日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国.武汉.武汉大学)，其分类命名为：SaccharomycescerevisiaeF2酿酒酵母菌F2，保藏编号为：CCTCCNO：M2017792。该酵母形态与生理生化特征：该菌株在YPD固体培养基上繁殖形成的菌落圆形，大而湿润，呈乳白色，表面隆起，光滑无皱褶，边缘清晰，生长迅速；镜检显示细胞个体较大，呈近球形，多边芽殖，可产生子囊孢子。发酵葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖，棉籽糖发酵1/3，不同化硝酸盐，不分解尿素，产酯，耐10％乙醇。所述酿酒酵母可用于水产养殖中，利用酿酒酵母F2能够快速降低养殖水体中氨氮浓度，维护水体微生态平衡。所述的酿酒酵母在水产养殖过程中的添加量为每亩每米水深添加200-400g，所述的酿酒酵母的有效活菌数为100-150亿CFU/g。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术的酿酒酵母F2能降低养殖水体中氨氮含量，能维持水产动物肠道微生态平衡，促进生长。附图说明图1是实施例1中不同分离菌株对氨氮的去除效果图。图2是实施例2中不同碳源对酿酒酵母F2降解氨氮的影响结果图。图3是实施例2中酿酒酵母F2对氨氮降解的曲线图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。实施例1酿酒酵母的筛选及鉴定(1)菌株初筛从武汉天辰生物科技有限公司黄颡鱼养殖池中取水样，转移至含有50μg/mL氨苄青霉素的YPD液体培养基中30℃好氧富集培养浑浊，适当稀释后涂平板，根据菌落形态挑取典型酵母菌单菌落(白色，大小1-2mm，湿润隆起，有酯香味)。YPD液体培养基：葡萄糖20g、胰蛋白胨20g、酵母粉10g，水1000mL，调pH7.0，115℃灭菌20min。YPD固体培养基：葡萄糖20g、胰蛋白胨20g、酵母粉10g，琼脂18g，水1000mL，调pH7.0，115℃灭菌20min。(2)菌株复筛将初筛得到的单菌落接种到氨氮浓度为5.3mg/L的灭菌养殖水体(121℃30min)中，25℃培养24h后测定其NH4+浓度，结果见图1，筛选得到一株性状优良的酵母菌F2。(3)鉴定参照《真菌鉴定手册》对筛选到的菌株进行个体形态观察、生化特性试验、生长特性试验及DNA鉴定，确定最终筛选得到的是一株酿酒酵母。F2菌株菌落与菌体形态：该菌株在YPD固体培养基上繁殖形成的菌落圆形，大而湿润，呈乳白色，表面隆起，光滑无皱褶，边缘清晰，生长迅速；镜检显示细胞个体较大，呈近球形，多边芽殖，可产生子囊孢子。生理生化特征：发酵葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖，棉籽糖发酵1/3，不同化硝酸盐，不分解尿素，产酯，耐10％乙醇。提取F2菌株的基因组DNA，PCR扩增26SrDNAD1/D2区进行分子水平鉴定，将26SrDNAD1/D2区扩增序列(测序结果见SEQIDNO.1)与GeneBanK上报道的酿酒酵母26SrDNAD1/D2区序列进行比对，同源性达到100％，进一步确证该菌为酿酒酵母。其中，PCR扩增上游引物：5`-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAC-3`，PCR扩增下游引物：5`-GGTCCGTGTTTCAAGACGC-3`。F2菌株已于2017年12月15日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国.武汉.武汉大学)，其分类命名为：SaccharomycescerevisiaeF2酿酒酵母菌F2，保藏编号为：CCTCCNO：M2017792。实施例2酿酒酵母F2在养殖水体中去除氨氮实验(1)将酿酒酵母F2单菌落接种到50mLYPD液体培养基中30℃、200rpm培养24h，离心除去培养基用50mL无菌水重悬。吸取1.0mL重悬菌液接种至100mL含有45mg/L氨氮养殖水体中，分别添加终浓度2g/L的葡萄糖、蔗糖、乙醇、乙酸钠、柠檬酸钠作为碳源，未加碳源作为对照组，每组3个重复，25℃培养24h测定氨氮浓度，结果见图2。由图2可知，葡萄糖和蔗糖是菌株F2进行氨氮降解的良好碳源，24h氨氮降解率可达99％以上。(2)将酿酒酵母F2单菌落接种到50mLYPD液体培养基中30℃、200rpm培养24h，离心除去培养基用50mL无菌水重悬。分别吸取0.5、1.0、1.5mL重悬菌液接种至100mL含有10.4mg/L氨氮养殖水体中，添加终浓度100mg/L葡萄糖作为碳源，未接种作为对照组，每组3个重复，25℃下培养每隔1h测定氨氮浓度，结果见图3。由图3可知，在葡萄糖作为碳源时菌株F2对养殖水体中氨氮具有快速降解能力，当接种量为1.5mL时，降解速率可达0.46mg/L·h。实施例3酿酒酵母F2的扩大培养(1)将酿酒酵母F2单菌落接种到50mLYPD液体培养基中，30℃、200rpm培养24h作为一级种子液。(2)将一级种子液转接2mL到200mLYPD液体培养基中，30℃、200rpm培养12h作为二级种子液。(3)50L发酵罐扩大培养将10L初始培养基(100g葡萄糖，50g硫酸铵，10g磷酸二氢钾，10L水，调pH至6.0，115℃灭菌20min)加到50L发酵罐中，接种上述二级种子液进行发酵。以葡萄糖作为碳源，硫酸铵作为氮源，磷酸二氢钾作为磷源，采用流加的方式补充C、N、P，发酵全程补加葡萄糖(0.225-0.4kg/L)、补加硫酸铵(30-32.5g/L)、补加磷酸二氢钾(5-6g/L)，以每小时每升发酵液中加入18mL的速度向发酵液中添加，共流加20L。发酵过程中用碳酸钠调节pH5.0-6.0，维持发酵过程葡萄糖含量1-10g/L，发酵全程维持温度37℃和转速500rpm，通风培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株酿酒酵母，其特征在于：保藏编号为CCTCC NO：M2017792。

【技术特征摘要】
1.一株酿酒酵母，其特征在于：保藏编号为CCTCCNO：M2017792。2.权利要求1所述的酿酒酵母在水产养殖中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将所述的酿酒酵母投放到养殖水体中以去除...

【专利技术属性】
技术研发人员：荣克明，马良骁，赵述淼，
申请(专利权)人：武汉市天辰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42