本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒。本发明专利技术提供的试剂盒包括试剂R1、试剂R2和试剂R3，其是利用吡喃糖氧化酶催化葡萄糖生成葡萄糖醛酮和过氧化氢，生成的过氧化氢可以直接与发光底物反应，形成一种持续稳定的化学光信号，用已知浓度的葡萄糖与测出的光信号作出剂量‑反应曲线，通过该曲线推算出待测样品的葡萄糖含量。本发明专利技术提供的采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒具有抗干扰能力强、准确度高、特异性好和线性范围宽的优点，可用于全自动测量、手工或半自动测量，适合各个层次的医疗和研究机构使用。
【技术实现步骤摘要】
一种采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒。
技术介绍
血清中葡萄糖是人体内各组织细胞活动所需的物质。人体内的血糖必须保持在一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。正常人的空腹血糖浓度为3.9～6.0mmol/L。空腹血糖浓度超过6.0mmol/L称为高血糖，血糖浓度低于3.9mmol/L称为低血糖。血清中葡萄糖是临床生化检验中的一个重要指标，可以为糖尿病、高血压以及心脑血管系统等疾病的诊断、治疗用药、病情监测以及疾病预防等方面提供客观依据。因此，对血清中的葡萄糖进行准确的测定具有极其重要的意义。目前，对于血清中的葡萄糖的诊断方法主要有非酶法和酶法。所谓非酶法，是对无干扰情况下单纯对葡萄糖的检测步骤，不是一个完整的方法，如近红外光谱法、脉冲电、氧化物电极法、光散射法等。对于复杂的样本(如血液样本)，除了含有各种细胞外，还含有大量的氨基酸、蛋白质、碳水化合物等杂质，使用非酶法测定复杂的血清样本中的葡萄糖含量，必须将血清样本中的各成分预先分离，步骤复杂，分离难度较大，不适于临床使用而逐渐被酶法所取代。现临床上检测葡糖糖最常用的酶法检测法有：己糖激酶(HK)法，葡萄糖氧化酶(GOD)法等。专利文献CN106868096A公开了一种稳定性强且成本低的己糖激酶法葡萄糖检测试剂，所述试剂为液体双试剂，试剂1中的主要成分为缓冲液、Mg2+、离子平衡剂、防腐剂、NAD(氧化型性辅酶I)、保护剂、表面活性剂，试剂2的主要成分为缓冲液、保护剂、表面活性剂、防腐剂、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、ATP-Na2等。该试剂盒为了保障试剂中酶类的稳定性，在试剂中有针对性的添加了聚乙烯二醇2万、吐温-80、FAD等多种保护剂，为了降低成本，尤其是降低酶类的使用，在试剂中添加了多种表面活性剂，增加对酶类的乳化以及提高酶的使用效率，从而大大降低了试剂的成本，方便于临床中的使用和推广。但是，该试剂采用己糖激酶最为催化酶，其特异性低，不仅作用于葡萄糖，也作用于其他单糖生成相应的6-磷酸衍生物，容易对结果造成影响，使检测结果不准确。蔡贵民发表了一篇题目为“应用酶荧光毛细分析法对血清中葡萄糖含量的检测方法”的论文，该检测方法是利用国产荧光分光光度计和毛细管微量样品测量，通过L-酪氨酸与葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶偶联，建立一种液态酶葡萄糖的荧光毛细分析方法，并将其成功地应用于血清葡萄糖的测定。但是，葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶形成的偶联反应系统，葡萄糖氧化酶仅作用于β-D葡萄糖，特异性很高，由于过氧化物酶特异性比较差，可作用于血液中其他过氧化物，容易导致检测结果偏高。另外，使用葡萄糖氧化酶法在临床上比较广泛的是比色法，比色分析法是通过颜色的深浅来判定葡萄糖的浓度，此方法线性范围窄，对高浓度的样本需要经稀释后测定；血液中的一些还原性物质如抗坏血酸、胆红素和谷胱甘肽等可对产物颜色的影响，从而对葡萄糖测定产生较明显干扰；有的是测定酶促反应的速率，对时间要求十分严格，手工或半自动操作均难达到要求。
技术实现思路
为了克服现有技术中血清葡萄糖检测试剂盒存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒。该试剂盒是利用吡喃糖氧化酶催化葡萄糖生成葡萄糖醛酮和过氧化氢，生成的过氧化氢可以直接与发光底物反应，形成一种持续稳定的化学光信号，用已知浓度的葡萄糖与测出的光信号作出剂量-反应曲线，通过该曲线推算出待测样品的葡萄糖含量。本专利技术提供的试剂盒具有抗干扰能力强、准确度高、特异性好和线性范围宽的优点，更适合临床使用。本专利技术提供了一种采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和试剂R3，所述试剂R1包括以下组分及浓度：缓冲液5-50mmol/L抗干扰剂1-10KU/L防腐剂0.01-1％(w/v％)所述试剂R2包括以下组分及浓度：缓冲液5-50mmol/L吡喃糖氧化酶0.01-10g/L防腐剂0.01-1％(w/v％)所述试剂R3的组分为：发光底物：LumigenHyPerBlu。所述LumigenHyPerBlu购自美国LumigenInc.，商品名为HyPerBlu。进一步地，所述试剂R1中的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、醋酸缓冲液和HEPES缓冲液中的一种或其组合物。进一步地，所述试剂R1中的缓冲液由pH为6.5的磷酸盐缓冲液和pH为7.2的Tris缓冲液组成。进一步地，所述试剂R1中的抗干扰剂由抗干扰物I和抗干扰物II按重量比1:(0.2～0.6)组成。进一步地，所述抗干扰物I为抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、铁氰化钾、胆红素氧化酶、过氧化氢酶中的一种或其组合物。进一步地，所述抗干扰物II的制备方法为：S1将硒酸、氯化锌、氯化锰、氯化锶、氯化锡和氯化镧加入去离子水中搅拌至完全溶解，得混合液A，接着加入N-羧甲基壳聚糖搅拌均匀后，在65～75℃温度下搅拌3～4h，所述N-羧甲基壳聚糖与混合液A的固液比为1g:3ml，过滤，并用去离子水洗2～3遍，冻干后收集粉末，得混合粉末；S2将N-羧甲基壳聚糖溶于去离子中搅拌均匀，制成质量浓度为4～6％的N-羧甲基壳聚糖溶液，得成膜液；S3将步骤S2得到的成膜液加入步骤S1得到的混合粉末中搅拌均匀，所述混合粉末与成膜液的固液比为1g:4ml，烘干，即得。进一步地，所述步骤S1中硒酸、氯化锌、氯化锰、氯化锶、氯化锡和氯化镧的重量比为(4～6):(2～4):(1～3):(0.8～1.2):(0.8～1.2):(0.8～1.2)。进一步地，所述步骤S1中硒酸、氯化锌、氯化锰、氯化锶、氯化锡和氯化镧的重量比为5:3:2:1:1:1。进一步地，所述试剂R2中的缓冲液的pH为6.5～8.5，其选自硼酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、Tris缓冲液和磷酸盐缓冲液中的一种或其组合物。进一步地，所述试剂R1和R2中所述防腐剂为叠氮钠、ProClin300和KY-100生物防腐剂中的一种或其组合物。目前，现有的葡萄糖检测试剂盒的抗干扰剂一般只能清除血清中的抗坏血酸、胆红素等常见的内源性干扰物，导致试剂盒整体检测效果不佳，准确性和重复性较差，尤其对于含有乳糜、黄疸或血糖浓度高于6.0mmol/L的异常血清样品的检测结果误差较大，大大的影响了诊断结果的准确性。经专利技术人深入研究发现，正常人的血清内含有大量的自由基，而且在除去血清中的干扰物时发生的酶促反应也会产生大量的自由基，该自由基可以氧化葡萄糖或破坏葡萄糖的结构。另外，当血糖高于6.0mmol/L时，血清中的游离脂肪酸浓度会升高，氧化应激反应增多，导致血清中的活性氧簇、自由基和二价铁离子的浓度不断升高，活性氧簇和二价铁离子可进一步催化氧自由基转变为羟自由基和超氧阴离子自由基，可以快速氧化葡萄糖或者破坏葡萄糖的结构。而且高浓度的具有还原性的二价铁离子和自由基不仅能与常规的抗干扰物反应，还会抢先与葡萄糖产生的终产物过氧化氢反应，降低过氧化氢的含量，从而导致检测的血清葡萄糖浓度与正常值误差较大，严重影响诊断结果的准确性，延误治疗进程，影响糖尿病患者的健康。本专利技术提供了一种采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，其在检测的过程中可以有效的清除血清内的自由基和超氧阴离子自由基，同时本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2和试剂R3，所述试剂R1包括以下组分及浓度：缓冲液 5‑50mmol/L抗干扰剂 1‑10KU/L防腐剂 0.01‑1％所述试剂R2包括以下组分及浓度：缓冲液 5‑50mmol/L吡喃糖氧化酶 0.01‑10g/L防腐剂 0.01‑1％所述试剂R3的组分为：发光底物：Lumigen HyPerBlu。
【技术特征摘要】
1.一种采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2和试剂R3，所述试剂R1包括以下组分及浓度：缓冲液5-50mmol/L抗干扰剂1-10KU/L防腐剂0.01-1％所述试剂R2包括以下组分及浓度：缓冲液5-50mmol/L吡喃糖氧化酶0.01-10g/L防腐剂0.01-1％所述试剂R3的组分为：发光底物：LumigenHyPerBlu。2.如权利要求1所述的采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、醋酸缓冲液和HEPES缓冲液中的一种或其组合物。3.如权利要求2所述的采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液由pH为6.5的磷酸盐缓冲液和pH为7.2的Tris缓冲液组成。4.如权利要求1所述的采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的抗干扰剂由抗干扰物I和抗干扰物II按重量比1:(0.2～0.6)组成。5.如权利要求4所述的采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，其特征在于，所述抗干扰物I为抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、铁氰化钾、胆红素氧化酶、过氧化氢酶中的一种或其组合物。6.如权利要求4所述的采用酶化学发光法检测葡萄糖的试剂盒，其特征在于，所述抗干扰物II的制备方法为：S1将硒酸、氯化锌、氯化锰、氯化锶、氯化锡和氯化镧加入去离子水中搅拌至完全溶...
【专利技术属性】
技术研发人员：李民友，丘传添，蓝媛，蔺涛，张玲，
申请(专利权)人：广州市进德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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