一种稳定的对硝基苯磷酸溶液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种稳定的对硝基苯磷酸溶液，溶液含有Trisbase‑HCl缓冲液，咪唑，对硝基苯磷酸二钠，叠氮化钠。其配制方法是：1)将Trisbase和咪唑依次溶于去离子水中；2)用盐酸溶液调节以上溶液pH至8.4后加入叠氮化钠，搅拌使充分溶解；3)加入对硝基苯磷酸二钠，充分混匀后定容；4)将配制好的存储液转入棕色试剂瓶，于2‑8℃条件下避光保存。本发明专利技术配制的对硝基苯磷酸溶液具有较好稳定性，该存储液用于碱性磷酸酶测定试剂盒中精密度、相关性良好，同时产品具有较好稳定性。

A stable solution of P nitrobenzene phosphoric acid and its preparation method

The present invention discloses a stable solution of P nitrobenzene phosphate. The solution contains Trisbase HCl buffer, imidazole, two sodium nitrobenzene phosphate and sodium azide. The preparation method is: 1) 1) dissolve the Trisbase and imidazole in deionized water in turn; 2) to adjust the above solution to the sodium azide after pH to 8.4, and stir to fully dissolve; 3) add the nitrobenzene phosphate two, fully mix well after mixing; 4) turn the prepared storage liquid into the brown reagent bottle and avoid light at 2 8 degrees centigrade. Preservation\u3002 The invention has good stability for the nitrobenzene phosphate solution, and the storage solution is used for the precision and correlation in the alkaline phosphatase determination kit, and the product has good stability.

【技术实现步骤摘要】
一种稳定的对硝基苯磷酸溶液及其制备方法
本专利技术涉及生物检测领域，特别涉及一种稳定的对硝基苯磷酸溶液及其制备方法。
技术介绍
碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高。目前碱性磷酸酶的检测主要是基于PNPP-AMP法，即在碱性条件下，碱性磷酸酶水解底物对硝基苯磷酸二钠(PNPP)，水解产物对硝基苯酚形成速率和碱性磷酸酶的活性成正比。然而，PNPP是一种不稳定的化合物，在光照或溶液状态下极易分解，给设计具有适用价值的试剂盒带来困难。专利US3425912A提供了一种使用有机胺与对硝基苯磷酸反应制备稳定的干态PNPP盐的方法。专利US4132598提到使用酚类或者含咪唑结构的化合物可以作为PNPP在溶液中的稳定剂，为得到稳定的对硝基苯磷酸溶液，要先将底物对硝基苯磷酸和稳定剂在干态的条件下混合后再溶于去离子水中，然后调节溶液pH至8.6左右，操作步骤比较复杂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开一种稳定的对硝基苯磷酸溶液及其制备方法。本专利技术所采取的技术方案是：一种稳定的对硝基苯磷酸溶液，溶液含有Trisbase-HCl缓冲液，咪唑，对硝基苯磷酸二钠，叠氮化钠。优选的，溶液中Trisbase-HCl缓冲液浓度为30-50mM；按质量体积比计，咪唑浓度为0.4-0.6％，对硝基苯磷酸二钠浓度为1.5-5.0％，叠氮化钠浓度为0.1-0.2％。优选的，Trisbase-HCl缓冲液pH为8.4。一种碱性磷酸酶试剂盒，试剂盒由反应缓冲液和底物存储液两部分组成。优选的，反应缓冲液由AMP-HCl缓冲液，硫酸镁，硫酸锌，HEDTA组成。硝基苯磷酸溶液的配制方法，包含以下步骤：1)将Trisbase和咪唑依次溶于去离子水中；2)用盐酸溶液调节以上溶液pH至8.4后加入叠氮化钠，搅拌使充分溶解；3)加入对硝基苯磷酸二钠，充分混匀后定容；4)将配制好的存储液转入棕色试剂瓶，于2-8℃条件下避光保存。本专利技术的有益效果是：本专利技术无需将底物与其保护剂在干态下预混合，只需依序将各物料溶于去离子水即可，减少了实验设备的使用，简化了生产工艺。碱性磷酸酶底物存储液具有较好稳定性，该存储液用于碱性磷酸酶测定试剂盒中精密度、相关性良好。且工艺简单、减少了试验设备，同时产品具有较好稳定性。具体实施方式实施例1、配制工艺碱性磷酸酶试剂盒由反应缓冲液和底物存储液两部分组成，其中，碱性磷酸酶底物存储液的配制方法：1)将Trisbase和咪唑依次溶于去离子水中；2)用盐酸(1.0mol/L)溶液调节以上溶液pH至8.4后加入叠氮化钠，搅拌使充分溶解；3)加入对硝基苯磷酸二钠，充分混匀后定容；4)将配制好的存储液转入棕色试剂瓶，于2-8℃条件下避光保存。2、相关配方按照下述配方配制碱性磷酸酶底物存储液：按照下述配方配制反应缓冲液3、实验效果：将试剂盒于2-8℃避光保存一定时间后监测试剂空白，试验结果如下，对照组为未加入稳定剂咪唑的试剂盒试剂空白。对试剂空白升高速率的影响储存时间——试剂空白实例1实例2实例3对照第0天0.27680.27840.27750.2763第15天0.28650.28790.28730.4642第30天0.30160.30180.30010.4642第150天0.41080.41270.3704第300天0.52520.50880.5016第365天0.59560.54370.5236试剂空白升高速率8.27×10-4/天7.18×10-4/天7.09×10-4/天1.25×10-2/天由上表数据可知，未加入稳定剂的试剂盒试剂空白升高速率比加入稳定剂的试剂盒快15-18倍。计算表明，按上述配方及工艺生产的碱性磷酸酶试剂盒在2-8℃保存365天后，底物分解率约为0.31％。为进一步证实本专利技术应用于碱性磷酸酶测定试剂盒的效果，选取以上实例2配制的底物存储液，于2-8℃避光保存15个月后测试碱性磷酸酶试剂盒性能，结果如下：表试剂盒保存12个月后的精密度和相关性以上结果表明，按本专利技术配制的碱性磷酸酶底物存储液具有较好稳定性，该存储液用于碱性磷酸酶测定试剂盒中精密度、相关性良好。本专利技术配制工艺简单、减少了试验设备，同时产品具有较好稳定性，值得推广应用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定的对硝基苯磷酸溶液，其特征在于，所述溶液含有Trisbase‑HCl缓冲液，咪唑，对硝基苯磷酸二钠，叠氮化钠。

【技术特征摘要】
1.一种稳定的对硝基苯磷酸溶液，其特征在于，所述溶液含有Trisbase-HCl缓冲液，咪唑，对硝基苯磷酸二钠，叠氮化钠。2.根据权利要求1所述的对硝基苯磷酸溶液，其特征在于，所述溶液中Trisbase-HCl缓冲液浓度为30-50mM；按质量体积比计，咪唑浓度为0.4-0.6％，对硝基苯磷酸二钠浓度为1.5-5.0％，叠氮化钠浓度为0.1-0.2％。3.根据权利要求1所述的硝基苯磷酸溶液，其特征在于，Trisbase-HCl缓冲液pH为8.4。4.一种碱性磷酸酶试剂盒，其特征在于，所述试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔海林，黄小全，李冰，曾晓君，黄清媚，
申请(专利权)人：中山市创艺生化工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44