一种CIK细胞快速扩增的方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种CIK细胞快速扩增的方法及试剂盒，采用的技术方案是，一种CIK细胞快速扩增的试剂盒，所述试剂盒中包括活化剂、CIK细胞激活剂和CIK细胞增殖剂，所述活化剂由CD3单克隆抗体和IFN‑γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；CIK细胞激活剂由IL‑2、IL‑1α和IFN‑γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；CIK细胞增殖剂由IL‑2、抗坏血酸、维生素E、人血浆白蛋白和胰岛素组成。本发明专利技术具有如下优点：CIK细胞快速扩增方法及试剂盒使用方便，操作简单，能高效、快速扩增CIK细胞，大大缩短培养周期，两周时间即可将50mL～100mL外周血中分离的单个核细胞诱导扩增CIK细胞达到2～8×10

A method and kit for rapid amplification of CIK cells

The present invention discloses a method and kit for rapid amplification of CIK cells, the technical scheme adopted is a rapid amplification kit for CIK cells, which includes activator, CIK cell activator and CIK cell proliferator. The activator is prepared by the CD3 monoclonal antibody and the IFN buffer gamma solution in the PBS buffer solution. The CIK cell activator is made up of IL 2, IL 1 alpha and IFN dissolved in PBS buffer solution. The CIK cell proliferator consists of IL 2, ascorbic acid, vitamin E, human plasma albumin and insulin. The invention has the following advantages: CIK cell rapid amplification method and kit are easy to use, simple operation, efficient and rapid amplification of CIK cells, greatly shorten the culture cycle, and two weeks time can induce the CIK cells isolated from 50mL to 100mL peripheral blood to 2~8 x 10.

【技术实现步骤摘要】
一种CIK细胞快速扩增的方法及试剂盒
本专利技术涉及生物技术、生命科学与医学的交叉
，具体涉及一种CIK细胞快速扩增的方法及试剂盒。
技术介绍
CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells)，是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞。是在LAK细胞(淋巴因子活化的杀伤细胞，Lymphokine-activatedkillercells)的基础上发展起来的新一代细胞因子活化淋巴细胞。LAK细胞是1982年Grimm等首先报道，在外周血单个核细胞中加入多种细胞因子体外培养4-6天，诱导出的一种非特异性的杀伤细胞，可杀伤多种肿瘤细胞。1984年Rosenberg研究组首次应用IL-2与LAK协同治疗25例肾细胞癌、黑色素瘤、肺癌、结肠癌等肿瘤患者，其中11例肿瘤缩小50％，1例黑素瘤完全消退。1988年该研究组总结了协同治疗的222例肿瘤患者，其中16例患者肿瘤转移灶完全消退，26例患者肿瘤消退50％以上，该疗法对转移性肾细胞癌、黑素瘤、结肠癌和非何杰金氏淋巴瘤的疗效显著。CIK细胞中CD3+CD56+双阳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种CIK细胞快速扩增的方法，包括分离外周血单个核细胞的步骤，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：①活化培养瓶：向培养瓶中加入活化剂至覆盖瓶底，孵育，得活化培养瓶，所述活化剂由CD3单克隆抗体和IFN‑γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；②配制活化培养基：向49mL含血浆的基础培养基中加入1mL的CIK细胞激活剂，得活化培养基，所述CIK细胞激活剂由IL‑2、IL‑1α和IFN‑γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；③接种单个核细胞：以活化培养基重悬单个核细胞，接种于活化培养瓶，37℃、5％CO2培养箱中培养48‑96h，得CIK细胞；④扩增CIK细胞：弃活化培养基，加入扩增培养基，37℃、5％CO2培养箱...

【技术特征摘要】
1.一种CIK细胞快速扩增的方法，包括分离外周血单个核细胞的步骤，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：①活化培养瓶：向培养瓶中加入活化剂至覆盖瓶底，孵育，得活化培养瓶，所述活化剂由CD3单克隆抗体和IFN-γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；②配制活化培养基：向49mL含血浆的基础培养基中加入1mL的CIK细胞激活剂，得活化培养基，所述CIK细胞激活剂由IL-2、IL-1α和IFN-γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；③接种单个核细胞：以活化培养基重悬单个核细胞，接种于活化培养瓶，37℃、5％CO2培养箱中培养48-96h，得CIK细胞；④扩增CIK细胞：弃活化培养基，加入扩增培养基，37℃、5％CO2培养箱中培养至所需数量，所述扩增培养基为含有IL-2、抗坏血酸、维生素E、人血浆白蛋白和胰岛素的基础培养基。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤①的活化剂中CD3单克隆抗体浓度为30-100μg/mL，IFN-γ浓度为1000-3000U/mL；所述步骤②的CIK细胞激活剂中IL-2浓度为20000-100000U/mL，IL-1α浓度为20000-100000U/mL，IFN-γ的浓度为50000-150000U/mL；所述步骤④的扩增培养基中IL-2浓度为500-1000U/L、抗坏血酸浓度为100-400mg/L、维生素E浓度为300-800mg/L、人血浆白蛋白浓度为3-8g/L、胰岛素浓度为5-20ng/L。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤①的活化剂中CD3单克隆抗体浓度为50μg/mL，IFN-γ浓度为2000U/mL；所述步骤②的CIK细胞激活剂中IL-2浓度为50000U/mL，IL-1α浓度为50000U/mL，IFN-γ的浓度为100000U/mL；所述步骤④的扩增培养基中IL-2浓度为700U/L、抗坏血酸浓度为200mg/L、维生素E浓度为500mg/L、人血浆白蛋白浓度为5g/L、胰岛素浓度为10ng/L。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述基...

【专利技术属性】
技术研发人员：段海峰，
申请(专利权)人：北京汇智驰康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11