香菇和松茸原生质体融合方法技术

本发明专利技术属于食用菌生物育种技术领域，具体涉及一种香菇和松茸原生质体融合方法，将制备的纯化的香菇原生质体溶液依次经热灭活和紫外灯照射，得到紫外灭活香菇原生质体溶液；将制备的纯化的松茸原生质体溶液依次经紫外灯照射和热灭活，得到热灭活松茸原生质体溶液；将紫外灭活香菇原生质体溶液和热灭活松茸原生质体溶液按照1:1的体积比例混合，加入聚乙二醇4000，离心，25‑30℃水浴10‑20min，再生液洗涤，复溶于再生液中，得到重组子混合液，涂布于再生固体培养基平板上，挑选出融合重组子。该方法原生质体再生率较高，再生时间短，再生效率高，克服了香菇与松茸原生质体属间远源不亲和的障碍。

Protoplast fusion of letinous edodes and Tricholoma matsutake

The invention belongs to the field of edible fungus biological breeding technology, in particular to a method of fusion of letinous edodes and protoplast of Tricholoma matsutake, and the purified letinous edodes protoplast solution is irradiated by hot inactivation and ultraviolet light in turn, and the ultraviolet Inactivated Protoplast solution is obtained. The purified protoplast solution of the protoplast of the Tricholoma matsutake is successively purple. The protoplast solution of thermally Inactivated Protoplast was obtained by external lamp irradiation and thermal inactivation. The solution of the protoplast and the thermal Inactivated Protoplast solution of letinous edodes and the thermal Inactivated Protoplast solution were mixed in accordance with the volume ratio of 1:1, adding polyethylene glycol 4000, centrifugation, 10 20min at 30 C water bath 10, regenerated solution in the regenerated solution, and obtained the recombinant seed. The mixed solution was coated on the regeneration solid medium plate, and the fusion recombinants were selected. This method has high regeneration rate, short regeneration time and high regeneration efficiency, and overcomes the barrier of distant source incompatibility between letinous edodes and Tricholoma matsutake protoplasts.

【技术实现步骤摘要】
香菇和松茸原生质体融合方法
本专利技术属于食用菌生物育种
，具体涉及一种香菇和松茸原生质体融合方法。
技术介绍
香菇隶属口蘑科、香菇属，是世界第二大食用菌，素有山珍之称。其味道鲜美、香气沁人。香菇营养丰富，是高蛋白。低脂肪的营养保健品，其麦角甾醇含量很高，对防治佝偻病有效，香菇多糖可以提高细胞免疫能力，从而抑制癌细胞的生长。目前香菇的人工培养条件非常成熟，条件温和、产量高、成本低，具有极高的推广价值。松茸隶属口蘑科、口蘑属，富含珍贵物质双链松茸多糖、松茸多肽和松茸醇，是世界上珍稀名贵的天然药用菌，现代医学研究表明，松茸具有抗肿瘤、抗衰老作用，可提高机体免疫力，可治疗糖尿病、心血管疾病、促进肠胃功能、保护肝脏。由于松茸对生长环境要求极为苛刻，目前尚无法实现大量完全人工栽培，只实现了半人工栽培，产量低，价格昂贵。因此开发香菇与松茸结合的新食用菌品种，对于提高食用菌营养价值、药用价值，降低生产成本、提高产量具有重要的经济价值。目前国内外对于食用菌新品种的选育主要有单孢子分离法、组织分离法、单一因子诱变、原生质体融合等。但是香菇与松茸属于不同属，亲缘关系较远，且生长环境相差较大，原生质本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种香菇和松茸原生质体融合方法，其特征在于，将制备的纯化的香菇原生质体溶液依次经热灭活和紫外灯照射，得到紫外灭活香菇原生质体溶液；将制备的纯化的松茸原生质体溶液依次经紫外灯照射和热灭活，得到热灭活松茸原生质体溶液；将紫外灭活香菇原生质体溶液和热灭活松茸原生质体溶液按照1:1的体积比例混合，加入聚乙二醇4000，离心，25‑30℃水浴10‑20min，再生液洗涤，复溶于再生液中，得到重组子混合液，涂布于再生固体培养基平板上，挑选出融合重组子；其中，每升所述再生液的配方为：土豆泥150g、香蕉泥50g、葡萄糖20g、D‑甘露醇0.6mol，水定容至1L；每升所述再生固体培养基的配方为：土豆泥150...

【技术特征摘要】
1.一种香菇和松茸原生质体融合方法，其特征在于，将制备的纯化的香菇原生质体溶液依次经热灭活和紫外灯照射，得到紫外灭活香菇原生质体溶液；将制备的纯化的松茸原生质体溶液依次经紫外灯照射和热灭活，得到热灭活松茸原生质体溶液；将紫外灭活香菇原生质体溶液和热灭活松茸原生质体溶液按照1:1的体积比例混合，加入聚乙二醇4000，离心，25-30℃水浴10-20min，再生液洗涤，复溶于再生液中，得到重组子混合液，涂布于再生固体培养基平板上，挑选出融合重组子；其中，每升所述再生液的配方为：土豆泥150g、香蕉泥50g、葡萄糖20g、D-甘露醇0.6mol，水定容至1L；每升所述再生固体培养基的配方为：土豆泥150g、香蕉泥50g、葡萄糖20g、D-甘露醇0.6mol、琼脂20g，水定容至1L。2.根据权利要求1所述的香菇和松茸原生质体融合方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1，菌株培养制备新鲜的香菇菌丝体和松茸菌丝体；S2，原生质体分离取S1中收集的香菇菌丝体，加入混合酶液，25-30℃水浴酶解3-4h，过滤，离心，收集香菇原生质体沉淀，洗涤，重悬，得到纯化的香菇原生质体溶液；纯化的松茸原生质体溶液的制备方法与纯化的香菇原生质体溶液制备方法相同；S3，原生质体的灭活与融合将S2纯化的香菇原生质体溶液依次经热灭活和紫外灯照射，得到紫外灭活香菇原生质体溶液；将S2纯化的松茸原生质体溶液依次经紫外灯照射和热灭活，得到热灭活松茸原生质体溶液；将紫外...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓红，王志伟，贾世霖，
申请(专利权)人：刘晓红，王志伟，
类型：发明
国别省市：辽宁,21