以植物环肽为有效成分的肿瘤细胞异常脂代谢抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种以植物环肽作为有效成分的肿瘤细胞异常脂代谢抑制剂，并公开了所述抑制剂在制备抑制肿瘤细胞异常脂代谢药物中的应用，具体可应用于制备治疗和预防具备异常脂代谢相关癌症包括肝癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌的药物。本发明专利技术所述的细胞异常脂代谢抑制剂可以有效抑制肿瘤细胞异常脂代谢，其有效成分植物环肽来源广泛，提取工艺成熟，其剂型和用药方式多样化，具有广泛的临床应用前景。

Inhibitors of abnormal lipid metabolism of tumor cells and their application with plant cyclic peptides as effective components

The invention discloses an abnormal lipid metabolism inhibitor with plant cyclic peptide as an effective component of tumor cells, and discloses the application of the inhibitor in the preparation of drugs to inhibit abnormal lipid metabolism of tumor cells, which can be used to prepare and prevent cancer of abnormal lipid metabolism, including liver cancer, colon cancer, and rectal cancer. Drugs for prostate cancer. The abnormal lipid metabolism inhibitor described in the present invention can effectively inhibit abnormal lipid metabolism of tumor cells. The effective component of plant cyclic peptide has a wide source, the extraction process is mature, the dosage form and the way of drug use are diversified, and it has broad prospects for clinical application.

【技术实现步骤摘要】
以植物环肽为有效成分的肿瘤细胞异常脂代谢抑制剂及其应用
本专利技术属于肿瘤药物领域，具体涉及以植物环肽作为有效成分的肿瘤细胞异常脂代谢抑制剂，及其制备方法与应用。技术背景脂类是三大营养素之一，除与能量供应和储存密切相关外，还具有两方面作用：一是细胞的主要构建分子，脂类分子包括磷脂(甘油磷脂和鞘磷脂等)和胆固醇，是细胞膜的主要成分，脂类代谢改变直接影响细胞膜合成和细胞增殖；二是细胞生命活动中的重要活性分子，脂类分子及其代谢中间物可参与细胞多种信号转导，炎症、血管调节等，并与细胞增殖、细胞黏附和运动等密切相关。肿瘤异常脂代谢是肿瘤代谢重编程的重要组成部分。正常人体主要依赖血液流动提供脂质，肿瘤细胞的脂质合成过程却是从头开始。正常细胞主要以葡萄糖的有氧氧化磷酸化供能，在缺氧环境下则以无氧糖酵解为主，而肿瘤细胞则明显不同，即便在供氧充足情况下，仍表现为活跃地摄取葡萄糖并进行糖酵解，同时产生大量乳酸。肿瘤细胞采取有氧糖酵解的代谢方式的原因，最重要的是有氧糖酵解产物能够促进肿瘤细胞对营养物质的摄取并合成生物大分子(如核苷、氨基酸和脂质)。脂质合成过程中很多调控因子在肿瘤细胞中高表达而在相应正常组织细胞中却是低表达或不表达。因而靶向于脂质合成具有良好的选择性，更具有优势和发展前景，是近年抗肿瘤代谢药物的研究热点，受到了科研工作者的广泛关注。但是目前市场上并无靶向于肿瘤异常脂代谢的药物。茜草科类型环肽(Rubiaceae-typecyclopeptides，RAs)为茜草科植物所特有，普遍存在于茜草属植物中，是一类双环均环六肽类化合物，主要由一个D-型α-丙氨酸、一个L-型α-丙氨酸、三个L-型N取代α-酪氨酸和一个其他L-型编码的α-氨基酸以肽链相连形成的环六肽，六个氨基酸缩合成十八元环，其中两个邻位的酪氨酸之间的苯环经氧桥连接形成一个具有较大张力的十四元环。RAs因其新颖的双环结构和显著的体内外抗肿瘤活性而备受关注。但是现有技术中未见有茜草科类型环肽抑制肿瘤异常脂代谢的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以茜草科类型环肽化合物为有效成分的作用于肿瘤细胞异常脂代谢的抑制剂及其应用。技术方案：本专利技术所述的肿瘤异常脂代谢抑制剂，其有效成分为植物环肽。进一步的，所述植物环肽为茜草科类型环肽。更进一步的，所述茜草科类型环肽为如下结构式所示的RA-V或RA-XII。所述抑制剂可以为任何药物治疗学上可接受的剂型，其使用剂量为任何药物治疗学上可接受的剂量。上述抑制剂用于制备治疗与预防能够受益于细胞异常脂代谢的疾病的药物上的应用，也在本专利技术的保护范围内。所述应用包括但不仅限于抑制肿瘤细胞异常脂代谢的受益于的疾病上的应用。上述茜草科类型环肽RAs的制备方法参考中国专利技术专利CN201410445325.0。有益效果：本专利技术所述的脂代谢抑制剂可以有效抑制肿瘤细胞快速增殖和异常脂代谢，其有效成分植物环肽来源广泛，提取工艺成熟，其剂型和用药方式多样化，可以应用于相关癌症的治疗，具有广泛的临床应用前景。附图说明图1为茜草科类型环肽RA-XII对人肝癌细胞的生长抑制作用；图2为茜草科类型环肽RA-V和RA-XII影响人肝癌细胞脂代谢相关指标的表达；图3为茜草科类型环肽RA-XII抑制人肝癌细胞内脂滴形成；图4为茜草科类型环肽RA-XII体内抗肿瘤试验，采取人肝癌细胞建立裸小鼠体内移植瘤模型，其中，(1)：RA-XII对肿瘤生长具有抑制作用；(2)：RA-XII对裸小鼠体重的影响；(3)：裸小鼠皮下移植瘤；图5为茜草科类型环肽RA-XII抑制裸小鼠皮下移植瘤组织内脂代谢相关指标的表达；图6为茜草科类型环肽RA-XII抑制裸小鼠皮下移植瘤组织内脂滴生成。具体实施方式下面结合附图，用具体实施例来进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此来限定本专利技术。根据本专利技术的实质对本专利技术进行的改进都属于本专利技术的范围。下述茜草科类型环肽RAs的制备方法同中国专利技术专利CN201410445325.0。实验方法：以RAs处理培养的肿瘤细胞，采用SRB方法检测其细胞增殖抑制活性，证实所述化合物能够抑制肿瘤细胞异常增殖；以商品化试剂盒检测细胞内胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白含量，以OilRedO染色检测肿瘤细胞内脂滴含量，证实所述的化合物抑制肿瘤细胞异常脂代谢。以肝癌细胞建立裸小鼠皮下移植瘤模型验证RAs体内抗肿瘤及抑制肿瘤异常脂代谢活性。实施例1RA-XII对人肝癌细胞的生长抑制作用：采用SRB法测定细胞活力。含10％的FBS培养基培养过夜的人肝癌HepG2细胞系(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)，加入胰酶消化，形成细胞悬浮液，按照合适浓度接种在96孔板上，100μl/孔，在CO2培养箱中培养24小时至细胞完全贴壁，加入不同终浓度的RA-XII，作用24h后，每孔加入50μl4℃预冷的TCA溶液(30％，w/v)固定细胞，TCA溶液的终浓度为10％。静置5min移入4℃冰箱中固定1h，取出用去离子水冲洗5遍，室温晾干。染色：待96孔板室温下晾干后，每孔加入0.4％(w/v)的SRB染液(购自sigma,1％乙酸配制)70μl，染色30min后倒掉染液，用1％(v/v)乙酸冲洗4次，去除未结合的染料，室温晾干。用100μl非缓冲Tris-base碱液(10mM，pH＝10.5)溶解与细胞蛋白结合的染料，水平摇床上振荡20min，采用酶标仪540nm处测定光吸收值。试验结果见图1，结果显示，RA-XII抑制肿瘤细胞快速增殖。实施例2RA-V及RA-XII影响人肝癌细胞脂质代谢相关指标的表达：含10％的FBS培养基培养过夜的人肝癌HepG2细胞系，加入胰酶消化，形成细胞悬浮液，按照合适浓度接种在6孔板上，24h后加入RA-V或RA-XII，处理24h，胰酶消化，于室温2000rpm离心5～10min，收集细胞；用预冷1×PBS(4℃)重悬细胞一次，2000rpm离心5～10min，洗涤细胞。采用商品化试剂盒，分别以单试剂GPO-PAP法检测细胞内总胆固醇和甘油三酯的含量，以双试剂直接法检测细胞内低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的含量(其中商品化试剂盒购自南京建成生物工程研究所，货号分别为A111-1、A110-1、A113-1、A112-1)。试验结果见图2，结果显示，RA-V和RA-XII明显抑制肿瘤细胞中脂质代谢相关指标总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白的表达，而对对人体有益的高密度脂蛋白无明显影响。实施例3RA-XII抑制人肝癌细胞内脂滴形成：称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉(购自sigma公司)，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤成为工作液，稀释后数小时内用完。含10％的FBS培养基培养过夜的人肝癌HepG2细胞系，加入胰酶消化，形成细胞悬浮液，按照合适浓度接种在24孔板上，24h后加入RA-XII，处理24h。先小心轻缓倒去培养液，4％多聚甲醛固定30min，油红工作液室温染色30min左右，PBS清洗两次，显微镜下拍照。试验结果见图3，结果显示，RA-XII可明显减少肿瘤细胞内脂滴数量。实施例4RA-XII体内抗肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肿瘤细胞异常脂代谢抑制剂，其特征在于，其有效成分为植物环肽。

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤细胞异常脂代谢抑制剂，其特征在于，其有效成分为植物环肽。2.根据权利要求1所述抑制剂，其特征在于，其有效成分为茜草科类型环肽。3.根据权利要求2所述抑制剂，其特征在于，其有效成分为下述结构式所示的茜草科类型环肽RA-V或RA-XII。4.权利要求1-3中任一所述抑制剂用于制备治疗与预防能够受益于细...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭宁华，王玉荣，宋立华，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32