一种检测肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条制造技术

本发明专利技术公开了一种检测肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条。本发明专利技术样品垫预处理液搭配本发明专利技术包被液制备的肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条精密度好，37℃加速七天后，检测效果仅下降5％以内；检测值与理论值偏差小(R

【技术实现步骤摘要】
一种检测肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条
本专利技术免疫学检测领域，更具体地涉及一种检测肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条。
技术介绍
肌钙蛋白(troponin，Tn)是与心肌收缩有关的调节蛋白，调节心肌的收缩和舒张。已知肌钙蛋白是包含3种蛋白：肌钙蛋白I(tropomyosininhibitorycomponent，TnI)、肌钙蛋白T(tropomyosin-bindingcomponent，TnT)、肌钙蛋白C(calinmbindingcomponent，TnC)的肌原纤维蛋白复合体，通过肌球蛋白和肌动蛋白的相互作用，有助于对钙离子所致的肌肉收缩进行调节。TnI分子量为21kD，是肌原纤维ATP酶的抑制性亚单位，它可抑制肌球蛋白与肌动蛋白的偶联，松弛骨骼肌或心肌。TnT分子量为37kD，是与原肌球蛋白结合的亚单位，它将肌钙蛋白C和肌钙蛋白I连接到肌动蛋白和原肌蛋白上，从而在肌纤维收缩和舒展工程中发挥中介作用。3个亚单位结合与原肌球蛋白一起构成Tm-Tn复合体，调节肌肉收缩和舒张的力量和速度。目前，肌钙蛋白的检测在心肌缺血损伤的临床诊断和预后判断中的应用非常广泛。如急性冠状动脉综合症(包括隐性心绞痛和不稳定心绞痛，急性心肌梗死等)、心肌炎、心肌创伤、围手术期心脏并发症、脓毒血症导致的左心衰竭等等。此外还可用于溶栓治疗效果观察，心肌损伤面积的估计，心脏移植后排异反应观察，某些药物疗效观察等。因此开发灵敏度更高、快捷方便的心肌肌钙蛋白测量产品，仍是临床诊断产品研究领域亟需解决的重要问题。荧光免疫层析定量检测技术是免疫层析技术和荧光标记技术的结合，其具有检测仪器精巧轻便、操作简单迅速、结果精准等优点，被广泛应用于多类抗原物质的检测。其中，抗体-荧光微球偶联物实施荧光免疫层析定量检测的关键分子之一，其稳定性关乎抗原荧光定量检测的准确度及其产品的保存期。因此，对结合抗体-荧光微球偶联物的NC膜特性的要求很高。另外承载样品的样品垫对样品的检测也是至关重要的，因些寻找一种助稳性能更好、能提高检测准确度的样品垫预处理液和用于NC膜的包被液对检测肌钙蛋白I非常具有现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条。本专利技术所采取的技术方案是：一种检测肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条，该试纸条中的样品垫耗材是玻璃纤维素膜，经过样品垫预处理液浸泡，烘干所得；该试纸条中的硝酸纤维素膜上划有检测线和质控线，分别包被液稀释的肌钙蛋白I单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体。进一步的，所述的样品垫预处理液配方为：PBS的质量浓度是10～200mM、TritonX-100的百分浓度是0.01％～10％、BSA的百分浓度是0.1％～8％、PVA的百分浓度是0.01％～4％、NaCl的百分浓度是0.01％～5％、葡聚糖的百分浓度是0.01％～5％、异嗜性抗体的质量浓度0～20mg/ml、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～1.5％，余量为水，pH6.0～10.0。进一步的，所述的包被液配方为：PB的质量浓度为5～100mM、异丙醇的百分浓度为0％～3.8％、葡聚糖2万的百分浓度为0.05％～5％，BSA的百分浓度为0.1％～10％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～1.5％，余量为水，pH6.0～9.0。进一步的，样品垫预处理液配方为：PBS的质量浓度是25～150mM、TritonX-100的百分浓度是0.01％～3％、BSA的百分浓度是0.1％～3％、PVA的百分浓度是0.01％～2％、NaCl的百分浓度是0.01％～2％、葡聚糖的百分浓度是0.01％～2％、异嗜性抗体的质量浓度0～6mg/ml、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～1.5％，余量为水，pH7.0～9.0。进一步的，包被液配方为：PB的质量浓度为5～50mM、异丙醇的百分浓度为0％～1.9％、葡聚糖2万的百分浓度为0.05％～2％，BSA的百分浓度为0.1％～3％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～0.5％，余量为水，pH7.0～9.0。进一步的，该试纸条中还含有结合垫和吸水滤纸。进一步的，该试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸依次搭接地粘贴在PVC底板上制得。进一步的，所述结合垫的材质为玻璃纤维膜。上述任一项所述的试纸条的检测方法，将该试纸条加样层析后，检测质控线和检测线的荧光信号强度，并以质控线荧光信号强度校正检测线的荧光信号强度，实现肌钙蛋白I的定量检测。本专利技术的有益效果是：本专利技术样品垫预处理液搭配本专利技术包被液制备的肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条精密度好，37℃加速七天后，检测效果仅下降5％以内；检测值与理论值偏差小(R2＝0.9998)，检测的准确率高；检测结果的出峰效果较好，出峰信号高，基线平整，前段几乎无抬起，不影响软件对峰面积的计算，读值准确度高；荧光微球释放效果更好，软件计算面积更加准确有关。适合临床上检测，具有很好的临床指导意义，具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。附图说明图1为本专利技术荧光免疫层析试纸条组成结构示意图；图2为本专利技术样品垫预处理液搭配本专利技术包被液制备的肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条检测雅培I2000的肌钙蛋白I标准曲线；图3为本专利技术样品垫预处理液搭配本专利技术包被液制备的肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条检测肌钙蛋白I重组抗原的检测值与理论值散点图；图4为本专利技术样品垫预处理液搭配本专利技术包被液制备的肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条检测掺入干扰物的肌钙蛋白I校准品的荧光检测折线图；图5为本专利技术样品垫预处理液搭配本专利技术包被液制备的试纸条检测含肌钙蛋白I的病人血清样本检测值与雅培I2000的CTnI检测值的相关图。具体实施方式实施例1本专利技术样品垫预处理液的优选配方：PBS的质量浓度是100mM、TritonX-100的百分浓度是0.75％、BSA的百分浓度是2.0％、PVA的百分浓度是1.0％、NaCl的百分浓度是0.5％、葡聚糖的百分浓度是1.2％、异嗜性抗体的质量浓度5mg/mL、Proclin300百分浓度为0.05％、PH7.5样品垫预处理液制备方法：称取5g的PVA加入250mLPBS母液和230mL纯水浸泡过夜，称取6g葡聚糖加入其中，放置70℃加热溶解。用加样枪加入3.75mL的TritonX-100，异嗜性抗体根据原浓度加入相应体积稀释至5mg/ml，反复打匀；称取10gBSA，2.5gNaCl放入磁力搅拌器溶解；加入150μL的Proclin300，用6M的HCl调节PH值至7.5，振荡混匀。最后室温定容至500mL，过滤除菌，制得样品垫预处理液。0.2MPBS配制方法为：称取71.6g的Na2HPO4·12H2O和31.2g的NaH2PO4·2H2O分别加入1L纯水溶解，按比例配成需要使用的接近PH值的PBS母液。实施例2本专利技术包被液的优选配方：PB的质量浓度为5～50mM、异丙醇的百分浓度为0％～1.9％、葡聚糖2万的百分浓度为0.05％～2％，BSA的百分浓度为0.1％～3％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～0.5％、PH7.0～9.0。包被液制备方法：称取0.025～1g的葡聚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条，其特征在于，该试纸条中的样品垫耗材是玻璃纤维素膜，经过样品垫预处理液浸泡，烘干所得；该试纸条中的硝酸纤维素膜上划有检测线和质控线，分别包被液稀释的肌钙蛋白I单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种检测肌钙蛋白I免疫荧光定量试纸条，其特征在于，该试纸条中的样品垫耗材是玻璃纤维素膜，经过样品垫预处理液浸泡，烘干所得；该试纸条中的硝酸纤维素膜上划有检测线和质控线，分别包被液稀释的肌钙蛋白I单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的样品垫预处理液配方为：PBS的质量浓度是10～200mM、TritonX-100的百分浓度是0.01％～10％、BSA的百分浓度是0.1％～8％、PVA的百分浓度是0.01％～4％、NaCl的百分浓度是0.01％～5％、葡聚糖的百分浓度是0.01％～5％、异嗜性抗体的质量浓度0～20mg/ml、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～1.5％，余量为水，pH6.0～10.0。3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的包被液配方为：PB的质量浓度为5～100mM、异丙醇的百分浓度为0％～3.8％、葡聚糖2万的百分浓度为0.05％～5％，BSA的百分浓度为0.1％～10％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～1.5％，余量为水，pH6.0～9.0。4.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，样品垫预处理液配方为：PBS的质量浓度是25～150mM、Tr...

【专利技术属性】
技术研发人员：何平，梁婷婷，李冰，陈润文，周琼华，
申请(专利权)人：中山市创艺生化工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44