一种UPLC/Q‑TOF‑MS测定党参炔苷含量的方法技术

本发明专利技术属于中药药代动力学领域，具体涉及一种UPLC/Q‑TOF‑MS测定健脾组方及党参提取物中党参炔苷的含量的方法，包括下列步骤：1)制备健脾组方或党参提取液；2)采用高效液相色谱‑质谱联用仪分离检测党参炔苷；3)以不同浓度党参炔苷与对应的响应峰面积作图，得到党参炔苷的标准曲线，将待测样品峰面积对照标准曲线计算其党参炔苷含量。本发明专利技术建立了应用液质联用技术检测中药党参中、健脾组方中党参炔苷含量的方法。该方法快速、灵敏、稳定性好，为党参炔苷的含量测定提供了新的参考方法。

【技术实现步骤摘要】
一种UPLC/Q-TOF-MS测定党参炔苷含量的方法
本专利技术属于中药药代动力学领域，具体涉及一种UPLC/Q-TOF-MS测定党参炔苷含量的方法。
技术介绍
中药药代动力学(Pharmacokineties，PK)是应用动力学原理，研究中药活性成分、有效部位、单味药和复方的体内吸收(Abosorpton)、分布(Distribution)、代谢(Metabolism)、排泄(Excretion)和毒性(ADME/Tox)的动态变化规律及其体内量-效、时-效关系，并用数学函数加以定量描述的一门新兴学科。它对阐明中药药效物质基础、揭示中药科学内涵,对中药新药创制、剂型改进以及方剂组分配伍机制的研究均发挥着十分重要的作用，现已成为当今中药现代化研究链上一个不可分割的重要组成部分，从而成为我国药代动力学研究的热点。血药浓度法是药代动力学研究的经典方法,是计算药代动力学最常用最准确的测定方法,所以血药浓度准确的测定是中药药代动力学研究至关重要的环节。LC-MS在中药药代学研究方面的应用是很广泛的。吴晓霞等从黄连解毒汤生物碱类入手,联用(LC-MS/MS)技术建立了测定药根碱、巴马汀、小果碱血药浓度的方法,并成功应用于黄连解毒汤正常大鼠体内这3个成分的药动学研究,为中药复方药动学研究提供了可以借鉴的分析方法。丁建刚等以地西泮为内标,采用HPLC-MS/MS技术，建立了比格犬血浆中丹参酮IIA的测定方法,而且本法的最低定量浓度为1ng/ml,已完全能够满足实验要求,且样品处理和测定过程简便,适合比格犬体内药代动力学研究。LI等建立了一个快速,特异和敏感的UPLC-MS/MS术分析大鼠口服袖皮苷和袖皮素(骨碎补提取物)后的药代动力学参数,结果显示,该方法符合FDA指导下的生物药品的分析标准,袖皮苷及其活性代谢产物袖皮素的药代动力学研究可以为骨碎补的临床应用提供一个合理的参考。陈宁等建立SPE-HPLC-MS测定大鼠血浆中黄芪甲苷含量的方法,并研究了黄芪甲苷在大鼠体内的药代动力学和组织分布。YujuanLi应用LC-MS/MS定量分析大鼠血浆中白术内酯Ⅰ的含量并对其药物代谢动力学进行了研究。Xiao-huaLiu等应用UPLC-MS同时检测大鼠口服黄芪提取夜后血浆中毛蕊异黄酮葡糖糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ6种成分，对每种成分进行药代动力学研究。Mei-LingHou等应用UPLC-MS/MS技术研究了以三黄泻心汤为基础的7种中成药制剂中6种活性成分的含量。并比较了大鼠灌胃中药单体大黄酸，中药大黄，中药复方三黄泻心汤后，大黄酸单体的药物代谢动力学过程。研究表明中药复方及单味中药中的大黄酸的吸收率高于大黄酸单体的吸收率，从而得出在大黄酸的吸收率方面三黄泻心汤复方优于单味中药大黄及单体大黄酸的结论。中药杂质多，被测物浓度或活性极低，可供分析的样品量少,尤其是在连续测定过程中，很难再度获得完全相同的样品，此外工作量很大，因为中药中含有多种化学成分,而且每种化学成分含量低，需要大量的数据处理和分析,这些都给分析带来了一定的困难，也严重限制了其发展,液质联用色谱分离效能高、灵敏度高、选择性高，排除了这些因素的干扰,推动了中药药代学的发展。葛根芩连汤是用于治疗胃肠道疾病传统复方。ZhangY等采用液质联用技术建立了一种同时检测葛根素和大豆黄素有效的方法。并应用该方法比较了葛根芩连汤及葛根提取液中葛根素和大豆黄素的药代动力学差异。结果表明与葛根汤相比，葛根芩连汤中的葛根素和大豆黄素的吸收效率更高，且消除速率下降。为揭示葛根芩连汤的配伍规律提供了科学依据。党参是我国传统名贵中药材,《中华人民共和国药典》2010版收载的党参来源于桔梗科植物的3个品种，分别为党参Codonopsispliosula(Franch)Nannf、素花党参CodoncpsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf)L.T.Shen或川党参CodonopisistangshenOliv.的干燥根。党参味甘、性平，归脾、肺二经，具有补中益气、生津和胃之功效。在临床上主要用于治疗脾胃虚弱，中气不足，脾气亏虚，热病伤津等症。党参中化学成分包括甾醇类，糖苷类，生物碱类及含氮成分，挥发油成分，三萜类及其他类成分，还有多种人体必须的无机元素和氨基酸。现代药理研究表明，党参具有调节血糖，促进造血机能，降压，抗缺氧，耐疲劳，增强机体免疫力，调节胃收缩及抗溃疡等多种作用。党参中的聚乙炔类化合物党参炔苷是从党参中分离出的一水溶性成分。党参炔苷对乙醇所致的胃黏膜损伤有很好的保护作用，与党参补益脾胃的传统功效相符，是党参保护胃黏膜的活性成分之一。可作为党参质量控制的指标性成分。健脾组方以健脾补气为主要功效，党参是临床上常用的健脾药物。党参炔苷是从党参中分离出的一种聚乙炔类化合物，2010年版《中国药典》(一部)将党参炔苷作为党参质量控制的指标性成分。目前国内外多采用HPLC-UV、RP-HPLC的方法对党参炔苷的含量进行测定。这类方法需要对党参进行繁琐和复杂的预处理，且因其含有多种化学成分，给特定成分含量的测定带来了困难。液质联用技术分离效能高、灵敏度高、选择性高，排除了这些因素的干扰,为党参炔苷测定提供了优良的技术手段。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种UPLC/Q-TOF-MS测定健脾组方及党参提取物中党参炔苷的含量的方法。本专利技术的UPLC/Q-TOF-MS测定健脾组方及党参提取物中党参炔苷的含量的方法，包括下列步骤：1)制备健脾组方或党参提取液；2)采用高效液相色谱-质谱联用仪分离检测党参炔苷；3)以不同浓度党参炔苷与对应的响应峰面积作图，得到党参炔苷的标准曲线，将待测样品峰面积对照标准曲线计算其党参炔苷含量。其中，制备健脾组方提取物的具体步骤是：按照重量比1:1:1称取黄芪、党参、白术，以1：10的料液比加入50％乙醇回流提取2次，每次2个小时，浓缩定容至200ml，精密吸取提取液100μL至50mL容量瓶中，以50％甲醇水超声溶解，冷却后定容至刻度，精密吸取适量至进口EP管中，12000r/min离心20min，取上清适量至上样瓶。其中，制备党参提取物的具体步骤是：称取党参，以1：10的料液比加入50％乙醇回流提取2次，每次2个小时；浓缩定容至200ml，精密吸取提取液100μL至50mL容量瓶中，以50％甲醇水超声溶解，冷却后定容至刻度，精密吸取适量至进口EP管中，12000r/min离心20min，取上清适量至上样瓶。其中，色谱条件：色谱柱：watersBEHC18柱(2.1×50mm,1.7μm)；柱温：40℃；流动相A：甲醇，B：含有0.1％甲酸水的水溶液；梯度洗脱：0-1.5min，60％-80％A；1.5-2min，80％-60％；样品间平衡3min；分析时间：2分钟；流速为0.2ml/min；进样量为5μL；质谱条件：电喷雾离子源(ESI)；毛细管电压：2500V；离子源温度：100℃；雾化温度：100℃；锥孔气速：50L/h；雾化气速：800L/h；检测模式：正离子；检测m/z：50-1200。党参炔苷常见的提取方式有冷浸法、煎煮法、乙醇回流法和超声提取法。已有文章考察了不同提取工艺所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种UPLC/Q‑TOF‑MS测定健脾组方及党参提取物中党参炔苷的含量的方法，其特征在于，包括下列步骤：1)制备健脾组方或党参提取液；2)采用高效液相色谱‑质谱联用仪分离检测党参炔苷；3)以不同浓度党参炔苷与对应的响应峰面积作图，得到党参炔苷的标准曲线，将待测样品峰面积对照标准曲线计算其党参炔苷含量。

【技术特征摘要】
1.一种UPLC/Q-TOF-MS测定健脾组方及党参提取物中党参炔苷的含量的方法，其特征在于，包括下列步骤：1)制备健脾组方或党参提取液；2)采用高效液相色谱-质谱联用仪分离检测党参炔苷；3)以不同浓度党参炔苷与对应的响应峰面积作图，得到党参炔苷的标准曲线，将待测样品峰面积对照标准曲线计算其党参炔苷含量。2.如权利要求1所述UPLC/Q-TOF-MS测定健脾组方及党参提取物中党参炔苷的含量的方法，其特征在于，制备健脾组方提取物的具体步骤是：按照重量比1:1:1称取黄芪、党参、白术，以1：10的料液比加入50％乙醇回流提取2次，每次2个小时，浓缩定容至200ml，精密吸取提取液100μL至50mL容量瓶中，以50％甲醇水超声溶解，冷却后定容至刻度，精密吸取适量至进口EP管中，12000r/min离心20min，取上清适量至上样瓶。3.如权利要求1所述UPLC/Q-TOF-MS测定健脾组方及党参提取物中党参炔苷的含量的方法，其特征在于，制备党参提取物的具体步...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗颂平，郜洁，陈静静，
申请(专利权)人：罗颂平，
类型：发明
国别省市：广东,44